РЕАКЦИЈА КСАНПРОПРОТЕИНА: ОБРАЗЛОЖЕЊЕ, ПОСТУПАК, УПОТРЕБА - ХЕМИЈА - 2026

Ксантхопротеин Реакција је хемијска процедура која се користи за одређивање присуства или одсуства ароматичних аминокиселина, као што су тирозина и триптофана, који могу бити у слободном облику или конституишу растворљивих протеина, пептида или полипептида.

Такође се користи за откривање отровних материја у крви које у свом саставу садрже групу бензена. Овај тест је такође познат као ксантопротеин Бецхерова реакција.

Позитивна реакција ксантопротеина Извор: преузето из видеа: хттпс://иоуту.бе/ГзГМбв5в4Во

Ксантопротеинска реакција користи концентровану азотну киселину, топлоту и неутралишући алкал. Ако се после неутрализације реакције раствор претвори из жуте у наранџасте, тест се сматра позитивним. Примећена обојеност настаје услед стварања азотних једињења која су добијена нитрификацијом бензенских група.

Ако је количина укупног протеина потребно квантификовати, неопходно је користити и друге методе одређивања протеина, попут Биурета.

Реакција ксантопротеина углавном се користи када се анализирају супстанце чији хемијски састав није познат. Ова реакција је обично део скупа тестова који ће помоћи да се утврди хемијски састав одређене супстанце или екстракта. Због тога га истраживачи широко користе.

С друге стране, Бецхерова ксантопротеинска реакција користи се за откривање фенолних и индолних супстанци у крви, омогућавајући предвиђање појаве нефропатије пре него што се други каснији параметри повећају.

Основе

Реакцијом се у основи детектује присуство бензен групе, како у аминокиселинама, тако и у протеинима и пептидима. Азотна киселина делује на бензенски прстен аминокиселина које је поседују, формирајући фенолна нитро једињења.

Реакцији је потребно да се изврши топлота, углавном се ствара талог који замућује медијум, претварајући га у млечно. Талог може бити бели или жути. На крају, потребан је корак алкализације који наглашава боју. За то се користи база попут 40% натријум хидроксида или амонијака.

Реакција ће се тумачити као позитивна ако се примети јака жута боја током процеса грејања или тамно наранџаста када се реакција алкализује. Аминокиселине које открије су углавном тирозин и триптофан.

Ксантопротеинска реакција. Извор: хттп://естероисомерас.блогспот.цом/2013/06/царацтеризацион-де-протеинас.хтмл

У случају фенилаланина, мада је ароматична аминокиселина, тешко је да се језгро бензена ове аминокиселине нитрира у једноставној реакцији, тако да ће емитирати или негативну или слабу позитивну реакцију.

Генерално, ксантопротеински тест се може допунити Хопкинс-Цоле тестом који се користи за специфичну идентификацију триптофана. Ако је ксантопротеински тест позитиван и Хопкинс-Цолеов тест негативан, присуство триптофана у том раствору је искључено, што указује углавном на присуство тирозина. Исто тако, између осталог може се употпунити и Миллоновом реакцијом на детекцију тирозина.

Ова реакција се такође може користити на узорцима крви, плазме или десалбуминског серума за дијагнозу уремије или затајења бубрега. У овом случају, тражи се откривање отровних супстанци (фенолних и индола) које настају цревним труљењем.

Ове супстанце имају бензен-групу и зато дају позитивну ксантопротеинску реакцију, иако реакциона супстанца није ни аминокиселина, ни протеин.

Процес

- Ксантопротеинска реакција за детекцију аминокиселина са ароматским групама

Ставите 1 мл тест узорка у чисту, суву епрувету.

-Додајте 0,5 мл концентроване азотне киселине.

-Инкубирати смешу у воденој купељи на 70 ° Ц током 2 минута. Претходно припремите водену купељ на поменутој температури.

-Кад уклањањем епрувете са водене купељи може се уочити да је раствор постао млечан и попримио одређену жућкасто-белу боју.

- Раствор се хлади капањем хладне воде на дно цеви.

-Предпрема се алкално додавањем полако (кап по кап) 40% раствора натријум хидроксида док се не промени боја.

-Ако је тест позитиван, на интерфејсу течности формираће се тамно наранџасти прстен.

-Ако је реакција негативна, неће бити формирања боје.

- Ксантопротеинска реакција на детекцију фенолних и индолних супстанци у крви

-Поделите 5 цц 20% трихлороцетне киселине на 5 цц венске крви, плазме или серума, а последњи је највише назначен. Добро измешати и филтрирати.

- Узмите 2 мл филтрата и помешајте га са 0,5 мл азотне киселине. Затим се загрева до кључања, тако да се цев постави директно преко упаљача на 30 секунди. Охлади се водом и дода се 1,5 до 33% натријум хлорида.

Он се тумачи на следећи начин:

-Негативни резултат: жућкаста боја.

-Поситиван (+) лимун жути резултат.

- (++) златно жуто.

- (+++) тамно жуте до браон боје

Такође се може протумачити употребом референтне Аутенриетх колориметријске скале, која се састоји од различитих концентрација калијум дихромата. То се припрема у 10 у 10 разблажења из 0,03874% основног раствора. Свака епрувета представља проценат.

Интерпретацијске ваге

Постоје две скале интерпретације које се зову древна и модерна. Нормалне вредности су:

Стара таблица: између 75 и 85%

Модерна таблица: између 15 и 25%

Ако је боја епрувете у средини две стандардне епрувете, прави се просек између две мере.

Стандардни раствор калијум дихромата се припрема на следећи начин: мери се 7,9 мл 10 Н калијум дихромата и допуњује до 100 мл у волуметричној тиквици. Разблажења се прате као што је приказано у Аутенриетх колориметријској табели.

Аутенриетх колориметријски сто. Извор: Васкуез А. Ксантопротеинска реакција. Шпански клинички часопис. 1949; 35 (5): 326-327. Доступно на: Елсевиер

Употреба

Употреба ксантопротеинске реакције део је скупа биохемијских тестова који помажу да се сазна хемијски састав неке непознате супстанце. Овај тест доприноси хемијској анализи откривању протеина који у својој структури садрже бензен-групе.

Ова реакција широко користи истраживачи у различитим студијама супстанци које су занимљиве.

У том смислу, Васкуез-Јорге и сарадници користили су ову и друге реакције да би испитали садржај протеина у течности извађеном из огрда мангрова (Црассостреа рхизопхорае).

Слично томе, Ројас ет ал. (2009) користили су низ тестова, укључујући реакцију ксантопротеина, како би анализирали гликокомропептиде у таложима сироке рикоте.

С друге стране, Волхардова модификација Бецхерове ксантопротеинске реакције је модификовала да би се користила у друге сврхе. У овом случају, за откривање фенолних и индолошких супстанци које могу порасти много раније (недељама или месецима) пре него што се ниво урее и заосталог азота у крви повећа.

Ти токсични отпад настаје из цревног труљења хране.

Ове материје се накупљају у крви када се не елиминишу правилно, према томе, позитиван тест ксантопротеина може предвидјети рани почетак правилног затајења бубрега или стање уремије.

У зависности од интензитета боје можете одредити колико је напредна. У овом случају тест је квантитативан.

Код здравих људи овај тест даје благо жуту боју, што одговара нормалним нивоима триптофана и тирозина који могу бити у крви.

Док је код пацијената са бубрезима ксантопротеинска реакција снажно позитивна због присуства следећих супстанци: фенола, индола, парарезола, ароматичних оксидацида, између осталих.

Превентивне мере

Овај тест морају обавити обучени стручњаци. Морају се узети у обзир сви прописи о биолошкој сигурности јер су реагенси корозивне киселине и базе.

Ако случајно неколико капи азотне киселине падне на кожу или нокте, оне ће пожутети, јер обе структуре садрже протеине. Поред тога, на кожи и слузокожи изазива тешке опекотине.

Ако дође до контакта са кожом, протокол који треба следити треба одмах да опере подручје сапуном и водом око 20 минута.

Ако га прска у очи, треба га опрати пуно свјеже воде, покушавајући да очи остану отворене.

Референце

1. Википедија „Ксантопротеинска реакција“, Слободна енциклопедија. 2 сеп 2019, 17:49 УТЦ 21 окт 2019, 20:31 википедиа.орг/
2. Васкуез-Јорге И, Гуерра-Молина Л, Куинтана-Тамаио Ј, Рамирез-Арзуага Ј, Фернандо-Баллестерос Р, Васкуез-Јорге И. Физикално-хемијска карактеристика и садржај протеина у течним екстрактима мангрове остриге (Црассостреа рхизопхорае). Рев Цубана де Куимица, 2014; 26 (1): 66-74. Доступно у Редалиц-у.
3. Ројас Е, Валбуена Е, Торрес Г, Гарциа А, Пинеро М, Галиндо Л. Изолација и перформансе ГМП-а таложењем сурутке са трихлороцетно киселином. Циент. (Марацаибо) 2009; 19 (3): 295-302. Доступно на: ве.сциело.
4. Васкуез А. Ксантопротеинска реакција. Шпански клинички часопис. 1949; 35 (5): 326-327. Доступно на: Елсевиер
5. Галвез И, Гарате О. Реакције Бецхера и Андревеса у мокраћној хирургији. Служба за урологију шпанске болнице. Аргентински часопис за урологију 395-404