ХИСТОХЕМИЈА: ОБРАЗЛОЖЕЊЕ, ОБРАДА, БОЈЕЊЕ - БИОЛОГИЈА - 2025

Хистохемијска је користан алат у проучавању морфологије различитих биолошких ткива (биљке и животиње) захваљујући принципу реакциону компоненти ткивних попут угљених хидрата, липида и протеина, између осталог, хемијске боје.

Ово драгоцено средство омогућава не само идентификацију састава и структуре ткива и ћелија, већ и различите реакције које се у њима дешавају. Исто тако, могу се доказати могућа оштећења ткива узрокована присуством микроорганизама или другим патологијама.

Хистохемијске мрље. Нил вирус, Грам позитивне и грам негативне бактерије (Грам), Хистопласма цапсулатум (Гроцотт), Мицобацтериум туберцулосис (Зиехл Неелсен). Извор: Пикинио.цом/Википедиа.орг/Непхрон / ЦДЦ / Др. Георге П. Кубица

Хистохемија из прошлих векова дала је важне доприносе, попут демонстрације постојања крвно-мождане баријере Паула Ехрлицха. То је било могуће јер мозак експерименталне животиње коју користи Ехрлицх није био обојен анилином, што је основно бојило.

То је довело до употребе различитих боја попут метилен плавог и индофенола, како би се обојиле различите врсте ћелија. Овај налаз је довео до класификације ћелија у ацидофилне, базофилне и неутрофилне, према њиховом специфичном обојењу.

Недавне студије су примењивале ову технику како би показале присуство различитих једињења, укључујући феноле, као и угљене хидрате и неструктурне липиде, у ткивима врсте Литсеа глауцесценс, познатијој као ловор. Проналажење ових, како у лишћу тако и у шуми.

Исто тако, Цоларес и др., 2016. идентификовали су биљку од лековитог интереса Таренаиа хасслериана, користећи хистохемијске технике. Код ове врсте је евидентирано присуство скроба, миросина, као и фенолних и липофилних једињења.

Основе

Хистохемија се заснива на бојењу ћелијских структура или молекула присутних у ткивима, захваљујући њиховом афинитету специфичним бојама. Реакција обојења ових структура или молекула у њиховом оригиналном формату се касније визуализује у оптичком микроскопу или електронском микроскопу.

Специфичност бојења је последица присуства група које прихватају јоне присутне у ћелијама или молекулама ткива.

Напокон, циљ хистохемијских реакција је да се то покаже бојењем. Од највећих биолошких структура до најмањег ткива и ћелија. То се може постићи захваљујући чињеници да боје хемијски реагују са молекулима ткива, ћелија или органела.

Гоњење

Хистохемијска реакција може укључивати кораке пре извођења технике, попут фиксације, уградње и сечења ткива. Стога се мора узети у обзир да у овим корацима структура која се идентификује може бити оштећена, дајући лажне негативне резултате, чак и ако постоји.

Упркос томе, важно је претходно фиксирање ткива које је правилно извршено јер спречава аутолизу или уништавање ћелија. За то се користе хемијске реакције са органским растварачима као што су: формалдехид или глутаралдехид, између осталог.

Укључивање тканине врши се тако да одржи чврстину приликом сечења и тако спречи да се деформише. Коначно, рез се прави микротом за испитивање узорака оптичком микроскопијом.

Поред тога, пре него што наставите са хистохемијским бојењем, препоручује се у сваку групу тестова уградити спољне или унутрашње позитивне контроле. Као и употреба специфичних боја за структуре које се проучавају.

Хистохемијске мрље

Од појаве хистохемијских техника до данас, кориштен је широк спектар мрља, укључујући и оне које се најчешће користе као што су: Периодна киселина Сцхифф (ПАС), Гроцотт, Зиехл-Неелсен и Грам.

Слично томе, друга су се боја користила рјеђе, попут мрље Индије, орцеина или Массон-ове трихроматске мрље.

Шифон периодичне киселине (ПАС)

Овом бојом могу се посматрати молекули високог садржаја угљених хидрата, као што су: гликоген и муцин. Међутим, такође је корисно за идентификацију микроорганизама као што су гљивице и паразити. Поред одређених структура (базалне мембране) у кожи и другим ткивима.

Основа овог бојења је да боја оксидује угљеничне везе између две оближње хидроксилне групе. Ово производи ослобађање алдехидне групе, а то открива Сцхиффов реагенс, одајући љубичасту боју.

Сцхифф-ов реагенс је састављен од базног фуксина, натријум-метабисулфита и хлороводоничне киселине, а ове компоненте су одговорне за љубичасто обојење када су присутне алдехидне групе. У супротном се ствара безбојна киселина.

Интензитет обојења ће зависити од количине хидроксилних група присутних у моносахаридима. На пример, код гљивица, подрумских мембрана, муцина и гликогена боја може прећи из црвене у љубичасту, док језгра обојају плаву боју.

Гроцотт

То је једна од мрља са највећом осетљивошћу у идентификацији гљивица у ткивима уклопљеним парафином. Ово омогућава идентификацију различитих гљивичних структура: хифа, споре, ендоспора, између осталог. Стога се сматра рутинском мрљом за дијагнозу микозе.

Посебно се користи у дијагностици плућне микозе, попут пнеумоцистозе и аспергилозе изазване неким гљивицама из рода Пнеумоцистис и Аспергиллус.

Овај раствор садржи сребрни нитрат и хромску киселину, последњи је фиксатор и обојило. Образложење је да ова киселина производи оксидацију хидроксилних група до алдехида мукополијахаридима присутним у гљивичним структурама, на пример у ћелијској стијени гљивица.

Коначно, сребро у раствору се оксидује алдехидима, изазивајући црну обојеност, што се назива аргентафинска реакција. Такође се могу користити и контрастне боје као што је светло зелена и тако ће се гљивичне структуре посматрати у црној боји са светло зеленом позадином.

Зиехл-Неелсен

Бојење се заснива на присуству кисело-алкохолне отпорности, делимично или потпуно, у неким микроорганизмима, као што су родови Ноцардиа, Легионелла и Мицобацтериум.

Употреба ове мрље је препоручљива, јер ћелијска стијенка претходно поменутих микроорганизама садржи сложене липиде који спречавају продор боја. Нарочито у узорцима дисајних путева.

У њему се користе јака бојила попут карболног фуксина (основни бојан), а топлота се примењује тако да микроорганизам може задржати обојено средство и не би се разбарвао са киселинама и алкохолима. На крају се наноси раствор метилен плаве боје за обојене структуре које су постале обојене.

Присуство кисело-алкохолне отпорности примећено је на структурама обојеним црвеним бојама, док су структуре које не одолијевају изблиједјењу обојене у плаво.

Грам и кинеска мастила

Грам је веома корисна мрља у дијагностици, између осталих, бактеријских и гљивичних инфекција. Ово бојење омогућава разликовање грам-позитивних и грам-негативних микроорганизама, јасно показујући разлике које постоје у саставу ћелијског зида.

Док је индијска тинта мрља која се користи за контраст структура које садрже полисахариде (капсулу). То је зато што се у околини формира прстен, што је могуће код Цриптоцоццус неоформанс.

Орцеин

Овим бојењем обоје се еластична влакна и хромозоми различитих ћелија што омогућава процену процеса сазревања последњих ћелија. Из тог разлога, био је веома користан у цитогенетским студијама.

Ово се заснива на преузимању боје негативним набојем молекула, као што је ДНК, која је присутна у језграма широког спектра ћелија. Дакле, то су обојене од плаве до тамно љубичасте боје.

Массон-ов трихром

Ова мрља се користи за идентификацију неких микроорганизама или материјала који садрже меланицне пигменте. То је случај са микозама, изазваним гнојним гљивицама, феохифомикозама и еумицетомом црног зрна.

Последње мисли

Последњих година је дошло до великог напретка у стварању нових дијагностичких техника, где је укључена хистохемија, али повезана са другим основама или принципима. Ове технике имају другачију намену, као у случају имунохистохемије или ензимхистохемије.

Референце

1. Ацуна У, Елгуеро Ј. Хистокуимица. Ан Цхем. 2012; 108 (2): 114-118. Доступно на: аре.икм.цсиц.ес
2. Местанза Р. Учесталост хистохемијских мрља од ПАС, Гроцотт и Зиехл-Неелсен која се користе за идентификацију микроорганизама, извршена у Служби за патолошку анатомију Специјалне болнице Еугенио Еспејо 2015. године. Централни универзитет Еквадора, Кито; 2016. Доступно на: дспаце.уце.еду
3. Тапиа-Торрес Н, де ла Паз-Перез-Олвера Ц, Роман-Гуерроро А, Куинтанар-Исаиас А, Гарциа-Маркуез Е, Цруз-Соса Ф. Хистохемија, укупни садржај фенола и антиоксидативно деловање у листовима и дрву литсеа глауцесценс Кунтх (Лаурацеае). Шума и шуме. 2014; 20 (3): 125-137. Доступно на: редалиц.орг
4. Цоларес, МН, Мартинез-Алонсо, С, Арамбарри, АМ. Анатомија и хистохемија Таренаиа хасслериана (Цлеомацеае), лековите врсте. Латиноамерички и карипски билтен за лековите и ароматичне биљке 2016; 15 (3): 182-191. Доступно на: редалиц.орг
5. Бонифаз А. Основна медицинска микологија. 4. издање Мексико: МцГрав-Хилл Интерамерицана едиторес, СА де ЦВ 2012.
6. Силва Диего Филипе Безерра, Сантос Хеллен Бандеира де Понтес, Леон Јорге Ескуицхе, Гомес Далиана Куеирога де Цастро, Алвес Поллианна Муниз, Нонака Цассиано Францисцо Вееге. Клиничко патолошка и имунохистохемијска анализа карцинома плочастих ћелија вретенастог ћелија вретена: редак случај. Ајнштајн (Сао Пауло) 2019; 17 (1): еРЦ4610. Доступно од: сциело.бр