ТЕТРАТХИОНАТЕ ЈУХА: РАЦИОНАЛНОСТ, ПРИПРЕМА И УПОТРЕБА - БИОЛОГИЈА - 2025

Тетратхионате чорба или чорба ТТ је селективни течни медијум културе за обогаћивање и опоравак сојевима рода Салмонелла. Направио га је Муеллер, а касније га модификовао Кауффманн, због чега постоје они који га зову Муеллер-Кауффманн бујон.

Оригинални медијум је садржавао протеозне пептоне, калцијум карбонат и натријум тиосулфат. Кауффманн је додао жучне соли и створио још један модалитет јарко зеленом бојом. Ове супстанце инхибирају раст колиформи, остављајући средину слободном за развој патогених бактерија, у овом случају салмонеле.

Додавање јодне растворе јода у тетратионати јуху. Извор: Мануел Алмагро Ривас

Модификација је била веома успешна јер је значајно повећала осетљивост медија. Из тог разлога, тренутно је корисно за претрагу салмонеле у било којој врсти узорка, али посебно за чврсте или течне столице и храну.

Припрема се састоји од две фазе; Комерцијални медијум је основа за припрему тетратионационог бујона, и после тога, тако да се тетратионат може формирати, додаје се јодирани раствор јода који комплетира медијум.

Америчка асоцијација за јавно здравље (АПХА) препоручује употребу Тетратхионате чорбе са додатком јарко зелене боје за обогаћивање узорака за салмонелу, пошто је селективнији од бутера Тетратхионате и селенита.

Опћенито, тетратионати јуха је идеална када се сумња на присуство бактерија рода Салмонелла у малим количинама или када се они злоупотребе излагањем инхибиторним супстанцама или индустријским процесима који минимизирају њихову одрживост.

Основе

Присутни пептони одговарају пробављању панкреаса казеину и пептичном пробављању животињског ткива. Они обезбеђују извор угљеника, азота и општих хранљивих материја за раст бактерија.

Натријум-тиосулфат са своје стране реагује са јодираним раствором и формира тетратионат. То инхибира раст колиформи и фаворизује развој бактерија које садрже ензим тетратионат редуктаза, међу њима је род Салмонелла, али и Протеус.

Жучне соли делују и као инхибиторна супстанца за већину грам-позитивних и неких грам-негативних бактерија (колиформи).

Калцијум карбонат апсорбује токсичне материје настале распадањем тетратионата који формира сумпорну киселину. У том смислу, калцијум карбонат неутралише киселост, одржавајући пХ медијума стабилним.

У случају јарко зеленог модалитета, ова супстанца повећава селективну снагу тетратионатног бујона инхибирајући микроорганизме који нису род Салмонелла.

Припрема

-Тетратхионате јуха

Јод раствор јода

Да одмери:

• 6 грама јода.
• 5 г калијум јодида.

Калијум јодид је растворен у отприлике 5 мл стерилне дестиловане воде, затим се јод додаје мало по мало, док се смеша загрева. Након што се потпуно растопи, надопуните до ознаке стерилном дестилованом водом до постизања коначне запремине од 20 мл.

Базна подлога за тетратионати јуху

Извагати 46 грама дехидрираног медијума и суспендовати у 1 литру стерилне дестиловане воде. Мешајте и загревајте док се потпуно не отопи, може прокухати само неколико минута. Не аутоклавирајте. Пусти се да се база медијума охлади на приближно 45 ° Ц и за то време се дода 20 мл јодованог раствора.

Након додавања јодованог раствора у медијум треба га одмах користити. Ако не желите да користите целокупну смешу, поступите на следећи начин:

10 мл основног медијума се дистрибуира у епрувете, а само оним које ће се инокулирати узорцима додаје се 0,2 мл јодираног раствора.

Они који се неће користити могу се и даље чувати у фрижидеру, али како медијум није стерилисан, идеално је припремити тачну количину која је потребна.

Боја медијума пре додавања јодованог раствора јода је млечно бела са белим талогом, а после додавања смеђа, са густим талогом. Посматрани талог је нормалан и одговара калцијумовом карбонату који се не раствара. Крајњи пХ медијума је 8,4 ± 0,2.

-Тетратхионате варијанта јухе са јарко зеленом бојом

За припрему јарко зеленог тетратионационог бујона, спроведени су сви горе описани кораци, али додатно, смеши ће се додати 10 мл јарко зеленог раствора припремљеног у 0,1%.

Светло зелена

Ово решење се припрема на следећи начин:

Извагати 0,1 г јарко зелене боје и суспендовати у 100 мл дестиловане воде. Загревати до кључања како би се постигло потпуно растварање. Чувајте у амбре боци.

Употреба

За узорке столице (култура столице) протокол је следећи:

Инокулирајте 1 г чврсте столице или 1 мл течне столице у епрувети са 10 мл готовог тетратионационог бујона. Снажно протресите и аеробно инкубирајте на 43 ° Ц током 6-24 сата.

Након тога, узмите 10 до 20 ул алкије бујота и субкултуре у селективном медијуму за салмонелу, као што су СС агар, КСЛД агар, јарко зелени агар, Хектоен ентериц агар, између осталих.

Паралелно са тим, селективне подлоге за салмонелу треба инокулирати директним узорком (изметом) без обогаћивања. За ректалне узорке брисача, скупите материјал у епрувету и наставите како је горе описано.

За узорке хране изважите 10 г чврсте хране или 10 мл течне хране и инокулирајте флашу са 100 мл готовог тетратионационог бујона. Поступите на исти начин као што је описано горе, али инкубирајте на 37 ° Ц.

Као што се може видети, однос између узорка и бујона увек ће бити 1:10.

КА

Познати контролни сојеви могу се користити за тестирање култивативног медијума. Најчешће коришћени су сојеви АТЦЦ сертификовани.

Сојеви који ће се користити су Салмонелла типхимуриум АТЦЦ 14028, Салмонелла абони ДСМ 4224, Салмонелла ентеритидис АТЦЦ 13076, Есцхерицхиа цоли АТЦЦ 25922, Ентероцоццус фаецалис АТЦЦ 19433 и Стапхилоцоццус ауреус АТЦЦ 25923.

Очекује се одличан раст за сојеве салмонеле, док Есцхерицхиа цоли може имати слаб или редован раст, а Грам позитивни сојеви (Ентероцоццус и Стапхилоцоццус) су делимично или потпуно инхибирани.

препоруке

-Ако овај медијум не инхибира раст Протеуса, неке лабораторије користе 40 мг / Л новобиоцина да спрече развој овог соја микроба. Пре додавања раствора јода, антибиотик се мора додати.

-Након припреме медијума, укључујући јодни раствор јода, не треба проћи више од 2 сата да се инокулише.

-Када се дистрибуира медијум у епрувете, смеша се мора континуирано хомогенизовати да се ресуспендира формирани талог.

-У мање контаминираних узорака, тетратионатирани бујов се инкубира на 35-37 ° Ц, а код високо контаминираних узорака препоручује се инкубација на 43 ° Ц.

Референце

1. Цонда Пронадиса Лабораторија. 2010. Тетратхионате бујонска база према Муеллер-Кауффманну. Доступна у:
2. БД Лабораториес. 2003. Тетратхионате база бродова. Доступна у:
3. Британниа Лабораториес. 2015. Тетранате базни бујот. Доступна у:
4. ББЛ Медиа. 2005. Припремљен у епруветама за културу врсте Салмонелла.
5. Форбес Б, Сахм Д, Веиссфелд А. (2009). Баилеи & Сцотт Микробиолошка дијагноза. 12 ед. Редакција Панамерицана СА Аргентина.
6. Флорес-Абукапкуи Ј, Пуц-Францо М, Хередиа-Наваррете М, Вивас-Росел М, Францо-Монсреал Ј. Поређење медијума културе натријум-селенита и натријум-тетратионата, оба инкубирана на 37 ° Ц и 42 ° Ц за изолација Салмонелла спп из измета носача. Рев Биомед 2003; 14 (4): 215-220