СРЕДЊА СИМ: ОСНОВА, ПРИПРЕМА И УПОТРЕБА - БИОЛОГИЈА - 2025

СИМ медијум је получврстог и диференцијални агар, специјално дизајниран за помоћ у идентификацији неке бактерије, нарочито Ентеробацтериацеае. Састоји се од триптеина, пептона, гвожђевог сулфата, амонијум сулфата, натријум-тиосулфата и агара.

Овај медијум омогућава извршавање три важне тестова: производњу хидроген-сулфида (Х ₂ С), формирање индол и покретљивости, одатле сиглу СИМ. Због своје велике корисности, не може да изостане у бактериолошкој лабораторији.

А. Комерцијални СИМ медиј Б. СИМ Х2С (-), Индоле (-) и покретност (+) тест и СИМ Х2С (+), Индоле (-), покретљивост (+) тест. Извор: А. Фотографију написао аутор мр. Мариелса Гил Б. Мфлоаиза

За разлику од других медијума, мора бити получврсти да би се покретљивост неких бактерија могла уочити. У том смислу, овај тест делује веома добро за Ентеробацтериацеае, али не и у не-ферментирајућим грам-негативним штаповима, где се преферирају друге методе, попут висеће капи.

СИМ медијум омогућава разликовање одређених специфичних својстава која карактеришу неке бактерије у односу на друге. На пример, Есцхерицхиа цоли одликује тиме што Х ₂ С (-), индол (+) и покретљивост (+), док је Протеус мирабилис Х ₂ С (+), индол (-), покретљивост (+).

Основе

То је медијум за културу који се сматра диференцијалним, јер се његовом употребом разликују микроорганизми који су способни да производе водоник сулфид од оних који то не чине; такође се истичу оне које формирају индол из триптофана од оних које то немају, и на крају разликује покретне бактерије од непокретних.

Извор напајања

Као и сваки медијум културе, он има елементе који обезбеђују потребне храњиве састојке како би се могли развити незахтевни микроорганизми. Ови елементи су представљени пептонима и триптеином.

Развој микроорганизма у медијуму је од суштинске важности да бисте могли да посматрате присуство или одсуство карактеристика које овај медијум процењује.

Производња водоник сулфида

Писмо С на скраћеницом СИМ односи на производњу водоник сулфида (Х ₂ С). Бактерије способне да формирају водоник сулфид преузеће сумпор из натријум-тиосулфата.

Некада Х ₂ С -цолоурлесс газ образује, он реагује са гвожђа соли којаје присутна у медијуму, формирајући црне сулфид, јасно видљива (црног талога). Бактерије које не чине Х ₂ С, напусти медијум оригиналне боје (беж).

Присуство црног талога може ометати интерпретацију покретљивости. Међутим, већина Х ₂ С- производе Ентеробацтериацеае су познати као позитивно покретан, попут Салмонелла, Протеус и Цитробацтер. Поред тога, црни талог који покрива готово цео медиј сугерише позитивну покретљивост.

Индола формација

Друго слово акронима СИМ је „И“, што представља формирање индола.

У том смислу, триптеин, осим што је извор хранљивих материја, испуњава и другу основну функцију. Овај пептон је богат аминокиселином која се зове триптофан, па може показати бактерије које производе триптофаназу.

Овај ензим је одговоран за цепање аминокиселине триптофан, са последичним стварањем индола (безбојне супстанце), пируичне киселине и амонијума.

Зато је, да би се показала ова реакција, потребно додати супстанцу која открива (Ехрлицхов реагенс или Ковачев реагенс). Или реагује с индолом, формирајући на површини агара супстанцу у облику црвене фуксије. Ако се појави прстен фуксије, тест индола се тумачи као позитиван.

Бактерије које не поседују овај ензим неће формирати прстен и то се тумачи као негативан индол тест.

Важно је напоменути да индол тест треба бити последњи који се тумачи, јер након додавања реагенса, медијум постане замућен, што отежава визуелну покретљивост.

Покретност

Коначно, слово "М" речи СИМ значи покретљивост. Да би се проценила покретност, овај медијум је стратешки полу-чврст, јер је ова карактеристика неопходна да бисте могли да уочите да ли постоји или не постоји кретање бактерија. Бактерије које поседују флагеле су оне које дају овај позитиван тест.

Позитиван тест ће бити видљив када се примети замућеност, како у почетном инокулуму, тако и око њега. Док се немобилне бактерије развијају само на путу почетног инокулума.

Припрема

Средња СИМ картица

Одмрзните 30 г дехидрираног медијума и растворите у литру дестиловане воде. Смеша се остави да стоји 5 минута, а затим се загрева до кључања, често мешајући док се потпуно не отопи.

Распоредите смешу у епрувете са памучним поклопцима и аутоклавите на 121 ° Ц током 15 минута. Извадите држач цеви из аутоклава и оставите га да се очврсне у вертикалном положају, тако да је медијум у облику блока.

Због конзервирања чува се у фрижидеру до употребе. Припремљени медијум мора да има крајњи пХ од 7,3 ± 0,2.

У тренутку инокулације медијума мора бити на собној температури. Средња боја је беж.

Ковачев реагенс

Измерите 150 мл амил или изоамил или бутил алкохола. (Користите једну од три поменуте).

Растворити 10 г п-диметиламинобензалдехида. Затим полако додајте 50 мл концентроване хлороводоничне киселине.

Спремни реагенс за употребу је безбојан или светло жут. Треба га чувати у амбреровој боци и чувати у фрижидеру. Не користите ако постане тамно смеђе боје; што указује да је оштећена. Овај реагенс је пожељан када је у питању Ентеробацтериацеае.

Ерлицхов реагенс

Измерити 2 г п-диметиламинобензалдехида и растворити у 190 мл апсолутног етил-алкохола и лагано мешати са 40 мл концентроване хлороводоничне киселине. На исти начин чувајте Ковачев реагенс. Ехрлицхов реагенс се највише користи за не-ферментирајуће и анаеробне бактерије.

Апликације

СИМ медијум се веома примењује у бактериолошким лабораторијама. Његова предност је што се у идентификацији Ентеробацтериацеае могу уочити три основне карактеристике у истој епрувети.

Засејано

Исправан начин сетве овог медијума је употреба игле, којом се узима део чисте колоније која се проучава и вертикално убацује у средину медијума. Треба обавити једно ручко. Пробијање не би требало да досегне дно цеви, исправна ствар је да прекривате само две трећине дубине.

Понављање иноокулума није препоручљиво, јер то може довести до погрешних интерпретација позитивне покретљивости. Инокулирани медијум се инкубира аеробно на 37 ° Ц током 24 сата.

Након времена, примећено је да ли постоји било производња Х ₂ С и мотилитет чита. Коначно се открива индол, додајући 3 до 4 капи Ехрлицховог или Ковачева реагенса, лагано измешајте и протумачите.

Извор: Конеман Е, Аллен С, Јанда В, Сцхрецкенбергер П, Винн В. (2004). Микробиолошка дијагноза. 5. изд. Редакција Панамерицана СА Аргентина.

КА

Као контрола стерилности, једна или две епрувете се инкубирају без инокулације у рерни на 37 ° Ц током 24 сата. Очекује се да након овог времена не дође до раста или промене боје.

Као контрола квалитета могу се користити познати сертификовани сојеви, као што су: Есцхерицхиа цоли АТЦЦ 25922, Ентеробацтер аерогенес АТЦЦ 13048, Клебсиелла пнеумониае АТЦЦ 13883, Салмонелла типхимуриум АТЦЦ 14028, Схигелла соннеи АТЦЦ 29930, Протеус вулгарис АТЦЦ 13315.

Очекивани резултати су: Есцхерицхиа цоли Х ₂ С негативна индол и позитивни покретљивости, Ентеробацтер аерогенес само позитивну мотилитет, Салмонелла типхимуриум Х ₂ С и позитиван мотилитет са негативним индола. Протеус вулгарис је позитиван, док су Клебсиелла пнеумониае и Схигелла негативне.

Ограничења

-Неки сојеви Морганелла моргании, између осталих сојева, могу стварати смеђе пигмент у овом медијуму због производње меланина, то не треба бркати са талогом жељезовог сулфида. У неискусних стручњака ова ситуација може да генерише лажне позитивне у тумачењу В ₂ С тесту .

-Страктичне аеробне бактерије ће расти само на површини цеви, што отежава тумачење покретљивости.

Референце

1. БД Лабораториес. ББЛ СИМ Медиум. 2008. Доступно на: бд.цом
2. Неоген Лабораториес. СИМ Медиум. Доступно на: сигурност хране
3. Дифцо Францисцо Сориа Мелгуизо. СИМ Медиум. 2009. Доступно на: хттп://ф-сориа.ес
4. Бризуела-Лаб Лабораторија. Средња СИМ картица. Доступно на: .бризуела-лаб.цом
5. Британниа Лабораториес. Средња СИМ картица. 2015. Доступно на: студирес.ес/доц
6. Конеман Е, Аллен С, Јанда В, Сцхрецкенбергер П, Винн В. (2004). Микробиолошка дијагноза. 5. изд. Редакција Панамерицана СА Аргентина.