ПРИПРЕМА МЕДИЈА У КУЛТУРИ: ЦИЉЕВИ И КОРАЦИ - БИОЛОГИЈА - 2025

Припрема медија културе је рутински Методологија коришћена у лабораторијама за раст жељених микроорганизама. Медији за културу су чврсти, течни или получврсти препарати који садрже све потребне храњиве састојке за развој микробне популације.

Опћенито, средства за узгој микроорганизама богата су протеинима и аминокиселинама и обично садрже неку компоненту која погодује расту организма који се проучава, попут витамина, крви, серума, између осталог.

Извор: пикабаи.цом

Не постоји општи или универзални медијум за културу, јер његов састав варира у зависности од потреба микроорганизма који су од интереса. Неке бактерије могу расти у било којем медијуму културе, али друге имају посебне захтеве.

Од чега се састоји?

Микроорганизми, попут гљивица и бактерија, не могу се појединачно проучавати због њихове малене величине. Из тог разлога, они се морају гајити на вештачке начине који омогућавају значајно повећање популације.

На пример, ако желимо да проучавамо бактерије, морамо да им обезбедимо праве услове како би се они могли размножавати и формирати колонију (која се може посматрати голим оком).

Припрема медијума за културу увелике варира у зависности од типа микроорганизма који се гаји. Пре него што га припремите, потребно је знати основне прехрамбене потребе радног организма.

Најчешћи састојци који се користе у медијима културе биће описани у даљем тексту како би се добила генерална идеја њихове припреме:

Агар

Употребљава се у културама као средство за гелирање и додаје се када се тражи чврсти или полу-чврсти медијум. Прво средство за учвршћивање коришћено у припреми медија је желатина, али је 1883. године агар у свет бактериологије увео В. Хессе.

Бактериолошки агар има као своју главну компоненту полисахарид са сложеним гранама издвојеним из алги. Ово једињење се користи као згушњивач у уобичајеној храни, попут сладоледа и џемова.

То је веома вредан елемент у микробиологији из више разлога. Углавном због тога што га микроорганизми не могу разградити, укапљује се на температури од 100 ° Ц и остаје у течном стању док не достигне 45 ° Ц или мање.

У случају да желите да припремите чврсти медијум, концентрација агара треба да буде око 1,5%, док се получврсти састојци припремају од 0,3 до 0,5%.

Течности

За узгој патогених организама потребна је телесна течност како би се могли развијати као у природном окружењу. Из тог разлога се додаје цела или дефибрилирана крв. Течност се узима од здраве животиње и, након што је стерилисана, додаје се у медијум за културу.

Изводи

Они се добијају из различитих животињских делова (попут меса или јетре) или поврћа (семенки) и прерађују се да би се добио чврсти концентрат у облику пасте или праха. Најчешћи су квас, слад и месо.

Пептони

Ова органска једињења се добијају ензиматском или хемијском хидролизом животињског или биљног ткива. Сврха је додавање садржаја богатог аминокиселинама, које су основне јединице протеина.

Амортизери

Системи "пуфера" или тампон система избегавају нагле промене пХ и помажу у одржавању оптималног распона који тело толерише.

Већина организама може добро успевати при пХ од 7, мада неке бактерије преферирају алкалне медије. Међутим, постоје бактерије које одолијевају промјенама пХ између вриједности 6 и 9.

Код врста осетљивих на пХ штета не настаје прекомерном количином водоника или хидроксил јона, већ повећањем слабих киселина или база које могу ући у ћелију.

Исто тако, додају се пХ индикатори како би се пратила и избјегла одступања узрокована ферментацијом или другим процесима.

циљеве

Главни циљ приликом припреме медијума за културу је додавање свих потребних састојака како би се успешно изоловао успешан развој организма. Мора се утврдити најефикаснија комбинација компоненти и хранљивих материја за постизање жељеног медијума.

И припрема и складиштење медијума су критични за успешан раст, јер састав и доступност хранљивих материја зависе од ових корака.

Мора се узети у обзир да је култивација микроорганизама под утицајем неколико фактора ван медијума културе, попут интензитета примљене светлости, температуре и нивоа киселости или алкалности медијума. Стога се свака од тих варијабли мора узети у обзир.

Врсте медија

На основу његовог састава

На основу њиховог састава постоје три главне врсте усева: природни или емпиријски, полусинтетички и дефинисани синтетички или хемијски медијуми.

Природно окружење

У природним срединама тачан састав није познат. Укључују састојке као што су млеко, разблажена крв, биљни сокови, екстракти и инфузије меса и пептона. Из економских разлога, често се додају јефтине компоненте попут екстракта соје, сурутке, меласе и сл.

Полусинтетички медијуми

Назива се полусинтетичким медијумом ако је његов састав делимично познат. Сваки медијум који садржи агар постаје полусинтетички медијум.

Међу њима имамо агар декстрозе кромпира, агар цзапек-док, овсени агар, месни пептонски агар, између осталих примера.

Синтетички или хемијски дефинисан медијум

У овом случају, састав ове супстанце - у смислу количине извора угљеника, азота, сумпора, фосфора и било ког другог потребног фактора раста - је у потпуности познат. Веома је корисно ако желите да добијете поновљиве резултате за друге истраживаче.

За такозване "микроорганизме са посебним захтевима раста" потребно је додати потребне компоненте. Пример ове врсте је Лацтобациллус.

На основу врсте микроорганизма

Слично томе, постоји и друга класификација за културне медије заснована на врсти микроорганизма који на њему може расти. Према овом принципу имамо следећа општа, обогаћујућа, селективна и различита средства. Свака је описана у наставку:

Општи медији

Они подржавају развој широког спектра микроорганизама. Ако било ком организму требају посебни услови за свој раст, он се неће моћи успешно развијати у овој врсти културе.

Медији за обогаћивање

Медији за обогаћивање подржавају раст одређене врсте микроорганизама, али није додата ниједна супстанца која би спречила да друге врсте микроба расту у њему.

Селективни медији

Они траже специфичан раст микроорганизма, између осталих га зову гљивице, бактерије, протозоје. Да би то постигли, инхибирају развој других.

Да би се постигао овај циљ, могу се додати хемијска једињења која су смртоносна за широку групу микроорганизама и безопасна за организам који вас занима, или додавањем извора енергије који могу да асимилирају само циљни микроби.

За узимање медицинских узорака за узгој патогеног микроорганизма користе се селективни медији. Овде је неопходно подстаћи раст патогена и инхибирати развој нормалне микробне флоре код пацијента.

На пример, бизмут сулфит агар не дозвољава раст грам-позитивних бактерија и великог броја бактерија које се налазе у гастроинтестиналној шупљини. Из тог разлога се користи у гајењу грам-негативних бактерија које у узорцима фекалија изазивају тифусну грозницу, Салмонелла типхи.

Диференцијални медији

Ова врста користи неке дијагностичке карактеристике организма који је интересује (на пример, карактеристике његовог метаболизма) да би их могао идентификовати против друге врсте која расте у истом окружењу.

И диференцијални и селективни медији врло су корисни у подручју клиничке микробиологије и јавног здравља, јер ове дисциплине морају открити присуство специфичних микроорганизама повезаних с патологијама или лошим хигијенским условима.

У културу се могу додати супстанце за индикаторе које дају карактеристичне карактеристике траженој колонији. На пример, лактоза и пХ индикатор су додани у агар-еозин-метилен плави (скраћено ЕМБ) и МацЦонкеи агар.

Стога, када се колонија развије у овим медијумима са способношћу ферментације лактозе и стварањем алдехида, они се могу уочити у посебној боји.

Кораци

Тренутно се медији за културу могу набавити у лиофилизованом облику. Стога је припрема лакша, а једино што преостаје је рехидратизирати производ. Садржај мора бити изваган (узимајући у обзир крајњу количину која се припрема) и растворен у дестилованој води пратећи све назнаке производа.

Садржај течног медија мора бити подељен у жељене посуде (Петријеве посуде, епрувете, итд.) За накнадну стерилизацију. За расподелу чврстог медијума потребно је растопити је помоћу микроталасне пећнице или подвргавања материјала воденој купељи. ПХ медијума мора бити подешен.

Обично се агар користи у епруветама или Петријевим посудама. Ако се агар очврсне у нагнутом положају, правилним углом тако да је крајњи руб ивице дијагоналан, овај распоред је познат као кљун или нагнута цев. Када се агар отврдне у потпуно вертикалном положају, назива се "дубоким".

Након стерилизације медија - коришћењем аутоклава - остављени су да се охладе. Са њима се мора руковати у окружењу без микроорганизама, а најчешћи је рад са упаљеним упаљачем који обезбеђује асептично окружење у њиховој близини.

Референце

1. Целис, ЈЕ (2006). Ћелијска биологија: лабораторијски приручник (Вол. 2). Елсевиер.
2. Финеголд, СМ, Баилеи, ВР, Барон, ЕЈ, Финеглод, СМ, & Сцотт, ЕГ (1991). Бејли Скот: микробиолошка дијагноза. Панаамеричка медицина.
3. Оливас, Е. (2004). Приручник из области микробиологије И и ИИ и паразитологије. Аутономни универзитет Циудад Јуарез.
4. Сцхлегел, ХГ и Заборосцх, Ц. (1993). Општа микробиологија. Цамбридге Университи Пресс.
5. Тортора, ГЈ, Функе, БР, & Цасе, ЦЛ (2007). Увод у микробиологију. Панамерицан Медицал Ед.