КАТАЛАЗНИ ТЕСТ: ОБРАЗЛОЖЕЊЕ, ТЕХНИКА И УПОТРЕБЕ - БИОЛОГИЈА - 2025

Каталазе Тест је методологија коришћена у бактериологију лабораторијама да открије присуство ензима каталазе у оним бактеријама које га поседују. Заједно са флеком по Граму, они су главни тестови које би требало извршити на ново изолованим микроорганизмима. Ови тестови упућују микробиолога на кораке које треба предузети за дефинитивно идентификовање дотичног микроорганизма.

Генерално, бактерије које садрже цитокром имају ензим каталазу, односно аеробне и факултативне анаеробне бактерије би требале да га имају. Међутим, постоје изузеци, као што је Стрептоцоццус, који упркос томе што су факултативни анаеробни микроорганизми, не поседују ензим каталазу.

Покретање каталазног теста, показујући позитивну реакцију. Извор: Није наведен аутор читљив аутор. Насе претпостављен (на основу тврдњи о ауторским правима).

Због тога се каталазни тест користи првенствено за разликовање породица Стапхилоцоцацеае и Мицроцоцацеае (обе каталазне позитивне) од породице Стрептоцоцацеае (негативне каталазе).

Исто тако, род Бациллус (позитивна каталаза) разликује се од рода Цлостридиум (негативан каталаз), између осталих.

Основе

Каталаза је ензим класификован као хидропероксидаза, то значи да они користе водоник пероксид (Х ₂ О ₂ ) као супстрат .

Такође се сматра оксидоредуктазом, јер у реакцији у којој учествује постоји елемент који служи као давалац електрона (редуктивна супстанца), а други као рецептор електрона (оксидациона супстанца).

Каталаза је протеин који садржи просечну групу са четири тровалентна атома гвожђа (Фе ⁺⁺⁺ ), па је хомопротеин. Ферни јон током реакције остаје оксидисан.

Може се рећи да је каталаза детоксикациони ензим, јер је њена функција да елиминише супстанце настале током метаболизма бактерија токсичне за бактерије. Међу тим супстанцама је водоник пероксид.

Водиков пероксид настаје аеробним распадом шећера. Овај процес се одвија на следећи начин:

Супероксид ион (О ₂ ^- ) (слободних радикала) је формиран као крајњи производ асимилације глукозе од стране аеробног путем. То је токсично и елиминише га ензим супероксид дисмутаза који га претвара у гасовити кисеоник и водоник пероксид.

Водоник пероксид је такође токсичан за бактерије и мора се уклонити. Ензим каталаз разграђује водоник пероксид у воду и кисеоник.

Каталаза може деловати на супстрате који нису водоник пероксид, попут алкохола, алдехида, киселина, ароматских амина и фенола. Међутим, водоник пероксид се такође може користити каталазом за оксидацију других токсичних једињења као што су метил и етил алкохол.

Исто тако, каталаза је присутна у ћелијама фагоцита, штитећи је од токсичног деловања водоник-пероксида.

Рутинска техника за каталазни тест

-Слиде метода

материјали

3% водоник пероксида (10 волумена).

Клизач микроскопа

Једнократна пластична дршка или дрвена чачкалица.

Процес

Узмите довољно колоније да проучите а да не додирнете агар из којег је потекао. Колонија мора бити свежа, односно из културе од 18 до 24 сата.

Поставите колонију на сувом слајду и додати кап 3% водоник пероксида на њу ( 30% Х ₂ О ₂ се такође може користити ). Одмах уочите да ли се пуштају мјехурићи или не.

Тумачење

Позитивна реакција: еволуција гаса, о чему сведочи стварање мехурића (снажно бубање).

Негативна реакција: нема формирања мехурића.

-Директна метода у чистој култури

Место 1 мл 3% Х ₂ О ₂ на чистој плоче или клина културе која не садржи крв (пожељно нутријената агара). Проматрајте да ли постоји или не настаје мјехурић одмах. 30% Х ₂ О ₂ се такође може користити .

Интерпретира се исто као и метода порта порта.

-Метода са капиларном цевком или Фунг и Петрисхко

Напуните капиларну цев од 67 мм до висине од 20 мм са 3% хидроген пероксида капиларношћу.

Додирните исолатед колонију бити истражене са капилара испуњена са 3% Х ₂ О _{2 .} Обратите пажњу да ли се капилара напуни мјехурићима за отприлике 10 секунди. Ова метода омогућава полуквантификацију реакције укрштањем:

Без крстова нема мехурића (негативна реакција).

+ ---- Мало мјехурића (слаба или одгођена реакција).

++ --– Обилни мехури (умерена реакција).

+++ - Мехурићи достижу супротан крај (јака реакција).

-Таилор и Ацханзар метода за каталазне тестове који дају упитно

Поставите изоловану колонију на чист, сув тобоган, а затим ставите кап од 0,5% Х ₂ О ₂ и покријте покривачем. Проматрајте да ли постоји или не настаје заробљени мјехурићи.

Тумачење: присуство мехурића указује на позитивну реакцију. Нема мехурића, то се тумачи као негативна реакција.

Каталазни тест за врсте Мицобацтериум

Ову технику је потребно извести контролисањем пХ и температуре. Мора се извести под поклопцем ламинарног тока, јер је манипулација различитим врстама Мицобацтериум опасна.

-Материјали

Водоник пероксид 30% или 110 запремина (супероксал).

Фосфатни пуфер пХ 7

10% Твеен 80

Клиничка култура микобактерија 3 до 4 недеље

-Припрема

Фосфатни пуфер пХ 7

Да одмери:

1.361 г безводног моно-калијум-фосфата (КХ ₂ ПО ₄ ).

1.420 г безводног динатријум (На2ХПО3) фосфата.

Отопите обе соли у мало стерилне дестиловане воде и допуните до 1000 мл воде.

10% Твеен 80

Направите раствор од 1:10 до комерцијално концентрованог Твеен 80, да бисте то поступили на следећи начин:

Узмите 1 мл Твеен 80 и ставите га у мало дестилиране воде, растворите и затим допуните запремину са водом до 10 мл.

Коначни реагенс

Помешајте количину фосфатног пуфера са количином од 10% између 80 (једнаких делова). У лабораторији одредите колико желите да припремите.

-Процес

Ставите 5 мл фосфатног пуфера у стерилну епрувету са навојним затварачем (бакелит).

Уз помоћ петље за инокулацију узмите довољно колонија семена Мицобацтериум из семена у клиновима и растворите у фосфатном пуферу.

Затворите цев без претераног затезања навоја. Ставите у водену купељ на 68 ° Ц током 20 до 30 минута. Извадите и оставите да се охлади на 22-25 ° Ц

Измерите 0,5 мл крајњег реагенса (смеше) и додајте га у епрувету са хладним раствором. Посматрајте формирање или не мехуриће.

Тумачи се исто као и претходне технике.

Употреба

Када се добије раст колоније у обогаћеном медијуму, на добијеним колонијама треба обавити мрљу по Граму и тест каталазе. Ово ће упутити микробиолога о поступцима које треба следити ради коначне идентификације.

Извор: Припремио аутор мр. Мариелса гил

КА

Да би се проценило добро деловање водоник-пероксидног реагенса, користите свеже узгајане контролне сојеве, попут Стапхилоцоццус ауреус као позитивну контролу и сојеве Стрептоцоццус сп као негативну контролу.

Друга алтернатива која служи као позитивна контрола је стављање капи водоник пероксида на агар крви, еритроцити имају каталазу, тако да ће доћи до бубрења ако је реагенс у добром стању.

Чоколадни агар се може користити као негативна контрола, овде су еритроцити већ лизирани и тест је негативан.

Ограничења

-Немојте користити старе културе за тест, јер то може изазвати лажне негативности.

- избегавајте узимање колонија из култура на крвном агару, ако пазите да не додирнете агар; Овај поступак може довести до лажних позитивних резултата, јер црвена крвна зрнца садрже каталазу.

-Ако узмете колонију платинастом дршком, немојте да мењате редослед поступка јер то може створити лажне позитивне резултате. То је због тога што је платина у стању да реагује са водоник пероксидом, узрокујући жучи.

-Не употребљавајте реагенс водоник-пероксида ако је веома стар, јер је реагенс веома нестабилан и има тенденцију да се с временом распада.

-Одржавајте реагенс водоник-пероксида заштићен од светлости и расхладите да бисте спречили оштећења.

- Обављајте контролу квалитета реагенса водоник пероксида сваки пут када се користи.

-Узми у обзир да уколико 30% Х ₂ О ₂ се користи, реакције су јаче од оних изведена са 3% Х ₂ О ₂ .

Референце

1. Конеман Е, Аллен С, Јанда В, Сцхрецкенбергер П, Винн В. (2004). Микробиолошка дијагноза. 5. изд. Редакција Панамерицана СА Аргентина.
2. Форбес Б, Сахм Д, Веиссфелд А. (2009). Баилеи & Сцотт Микробиолошка дијагноза. 12 ед. Редакција Панамерицана СА Аргентина.
3. Мац Фаддин Ј. (2003). Биохемијска испитивања за идентификацију бактерија од клиничког значаја. 3. изд. Редакција Панамерицана. Буенос Ајрес. Аргентина.
4. БД Лабораториес. Реагент Каталаза-Готарио. Доступно на: хттп://винклерлтда.цл
5. Вадекуимица Лабораториес. Пероксид. Еквиваленција између количина и процента. Доступно на: вадекуимица.цом