КОАГУЛАЗНИ ТЕСТ: ОБРАЗЛОЖЕЊЕ, ПОСТУПАК И УПОТРЕБЕ - БИОЛОГИЈА - 2025

Тест коагулаза је лабораторија техника која се користи за откривање присуства ензима коагулаза. Овај ензим има својство коагулационе плазме. Лоеб 1903. године први је описао овај ензим.

Овај тест се изводи на Грам-позитивне, каталазно-позитивне коке, што омогућава разликовање сојева Стапхилоцоццус ауреус од осталих стафилокока, јер је једини микроорганизам који је клинички значајан који га производи.

Обе слике откривају позитиван тест коагулазе. Извор: Лева слика: Пхилиппињл. Слика на слици: Фотографије снимио аутор МСц. Мариелса Гил.

У том смислу, чланови породице Стапхилоцоцацеае који негативно тестирају често се називају коагулаза негативним стафилококом.

Постоје неки сојеви осим С. ауреус који могу произвести коагулазу, попут Стапхилоцоццус сцхлеифери спп цоагуланс, С. хиицус, С. интермедиус и С. делпхини.

Међутим, прве три су клиничке важности на ветеринарском нивоу и веома ретко би се могле наћи као узрочници инфекција код људи, док се С. делпхини налази само у морским срединама.

Надаље, лако се разликују јер С. хиицус и С. интермедиус не ферментирају манитол, а С. сцхлеифери спп цоагуланс не ферментира малтозу или трехалозу, док С. ауреус ферментира ове угљене хидрате.

Присуство ензима коагулазе везује се за вируленцију сојева. Међутим, ова теорија се распада, јер су примећене и друге вирулентне врсте негативне коагулазе које могу изазвати значајне инфекције.

Основе

Тумачење

Аглутинација у року од 5-20 сек (јак позитиван тест).

Променљива аглутинација која се дешава између 20 секунди и једне минуте (одложен позитиван тест).

Неки степен аглутинације после једног минута (сумњиви докази). Препоручује се поновити тест или потврдити методом епрувете.

Не постоји аглутинација (негативан тест).

Резултат са ССФ-ом. Увек мора давати негативан резултат, ако аутоматски даје позитиван резултат, резултат теста је неважећи.

-Тубе коагулазни тест

материјали

-Стерилна епрувета

-Плазма

-Кадење Марије на 37 ° Ц.

Техника

Пипетирајте 0,5 мл плазме у епрувету димензија 12 к 75 стерилном пипетом.Уставите платинасту петљу са 2 до 4 чисте колоније да бисте проучавали из чврсте културе током 18 до 24 сата и растварали се у плазми. пажљиво мешати и инкубирати на 37 ° Ц током 4 сата.

Испитајте епрувету у првом сату, без да је протресете, само је лагано нагните. Ако се угрушак још увек не види, може га се наставити опажати сваких 30 минута до завршетка 4 сата. Ако је након 4 сата и даље негативан, може се оставити највише 24 сата, али на собној температури. Посматрајте и известите о резултату.

На основу искуства, неки микробиолози препоручују употребу 500 µл бактеријске суспензије из 18-сатне културе у течном медијуму за обављање теста.

Чини се да нуди брже и поузданије резултате него када се емулгирају колоније из чврстих медија, посебно ако се користи људска плазма добијена из банке крви.

Употреба сојева из бујона помаже да се разблажи могуће присуство хуманих антистафилококних антитела у плазми које могу инхибирати деловање коагулазе.

Тумачење

Ако се види да угрушак обухвата сву течност (потпуно згрушавање) или угрушак без ичега у преосталој течности (делимично згрушавање), то би требало сматрати позитивним тестом.

Ако се не формира угрушак, односно суспензија остаје хомогена, тест је негативан.

-Когулаза тест употребом фибриногена

Фибриноген се користи исто као плазма и користи се и за клизне и епрувете. Поступак како је описано за плазму и протумачите на исти начин.

Употреба

Користи се за разликовање стафилокока ауреуса од стафилокока негативног коагулазе.

КА

Имајте на располагању свеже културе соја С. ауреус како бисте их користили као позитивну контролу. Сој С. епидермидис је такође доступан као негативна контрола.

Ограничења

-Позитивни тест не треба оставити у инкубацији 24 сата, јер С. ауреус производи фибринолизин који раствара угрушак.

-За поуздан тест треба користити свежу или тек реконституисану плазму, као и важно је користити свеже бактеријске културе (18 до 24 х). Тако се избегавају лажни негативи.

-Тест се мора извести заједно са негативном и позитивном контролом.

-Неки чврсти медијуми могу ометати тест коагулазе. Не препоручује се употреба колонија из сланог манитовог агара.

-Ако се користи цитрирана плазма, препоручује се стављање 5 јединица хепарина по мл плазме да се избегну лажни позитивни ефекти. То је зато што неки микроорганизми који нису С. ауреус могу разградити цитрат и изазвати згрушавање плазме. У овом случају, препоручљиво је урадити Грам и каталазни тест.

-Важно је, у тесту у епрувети, пратити реакцију сваких 30 минута, јер постоје сојеви С. ауреус који стварају високе концентрације фибринолизина и брзо разблажују новонастали угрушак. Избегавајте лажне негативности.

-Када надгледате тест, избегавајте нагло тресање епрувете, то може уништити почетак стварања угрушка који се касније неће обновити, узрокујући лажне негативности.

Референце

1. Конеман Е, Аллен С, Јанда В, Сцхрецкенбергер П, Винн В. (2004). Микробиолошка дијагноза. 5. изд. Редакција Панамерицана СА Аргентина.
2. Форбес Б, Сахм Д, Веиссфелд А. (2009). Баилеи & Сцотт Микробиолошка дијагноза. 12 ед. Редакција Панамерицана СА Аргентина.
3. Мац Фаддин Ј. (2003). Биохемијска испитивања за идентификацију бактерија од клиничког значаја. 3. изд. Редакција Панамерицана. Буенос Ајрес. Аргентина.
4. Про-Лаб Лабораториес. Зец коагулише плазму. Доступно на: про-лаб.цом
5. "Коагулаза." Википедија, Слободна енциклопедија. 12 фебруар 2019, 04:23 УТЦ 22 април 2019, 15:50 википедиа.орг.