БИОХЕМИЈСКИ ТЕСТОВИ: ВРСТЕ, ЧЕМУ СУ НАМЕЊЕНИ И ЗНАЧАЈ - БИОЛОГИЈА - 2025

У биохемијски тестови у микробиологији су скуп тестних хемикалија изводе се микроорганизми представити у узорку како би се идентификовале их ; Ти микроорганизми су обично бактерије. Микробиологу је на располагању велики број биохемијских тестова.

Међутим, избор ових тестова заснован је на прелиминарним налазима, као што су образац мрља по Граму и особине раста, које омогућавају да бактерије буду сврстане у одређену категорију. Биохемијска испитивања се углавном заснивају на метаболичким својствима сваке врсте бактерија.

Не имају све бактерије иста својства, па се испитује да ли поседују неки одређени ензим додавањем супстрата и чекајући да се реакција појави. Обично се ово одређивање даје променом боје или пХ у медијуму за културу.

Мање од 15 биохемијских тестова често је потребно за поуздану идентификацију бактерије до нивоа врста. Извођење више биохемијских тестова може повећати поверење у идентификацију.

Већина ових биохемијских испитивања се врши на серуму или крвној плазми. Међутим, они се могу извести и на другим биолошким излучевинама, попут: урина, цереброспиналне течности, плеуралне течности и измета, између осталог.

Класификација

Биохемијска испитивања могу се класификовати у 3 групе:

универзалан

То су тестови који се могу обавити на било ком узорку и који усмеравају микробиолога на следећа биохемијска испитивања која морају бити изведена да би се добила поуздана идентификација.

Пример

Тест каталазе и оксидазе.

Дифферентиалс

То су тестови који су извршени да би се идентификовали микроорганизми у узорку свели на ниво врста.

Идентификација се врши на основу резултата комбинације тестова, јер појединачни резултати нису довољно информативни да би могли да се идентификују.

Пример

ИМВиЦ тестови и тестови искористивости шећера.

Специфично

Они су специфични тестови за одређену скупину врста или за подврсту врста. Ови тестови се углавном раде да би се потврдили или идентификовали на нивоу подврста. Појединачни тестови су сами по себи информативни.

Пример

Тест γ-глутамил аминопептидазе.

Врсте биохемијских тестова

Каталазни тест

Каталазни тест је тест којим се показује присуство ензима каталазе разградњом хидроген пероксида у кисеоник и воду. Мала количина бактерија додаје се капи водоник пероксида (3%) на тобогану.

Каталазни тест је једноставан тест који користе микробиолози да помогну идентификовању врста бактерија и да утврде способност неких микроба да разграде хидроген пероксид производњом ензима каталазе.

Ако се примете мехурићи кисеоника, то значи да бактерија има ензим каталазу, јер катализује распадање водоник пероксида у кисеоник и воду. За организам се каже да је позитиван на каталазу (нпр. Стапхилоцоццус ауреус).

Тест оксидазе

Овај тест се користи за идентификацију микроорганизама који садрже ензим цитокром оксидаза (важан у ланцу преноса електрона). Обично се користи за разликовање породице Ентеробацтериацеае и Псеудомадацеае.

Цитохром оксидаза преноси електроне из ланца преноса електрона до кисеоника (крајњи акцептор електрона) и смањује га у воду. Вештачки молекули електронских давалаца и акцептора дају се у тесту оксидазе.

Када се донор електрона оксидује дејством цитокром оксидазе, медијум постаје тамно љубичаст и сматра се позитивним резултатом. Микроорганизам Псеудомонас аеругиноса је пример бактерије са позитивном на оксидазу.

Тест сланог манитол-агар-а (МСА)

Ова врста теста је и селективна и диференцијална. МСА ће одабрати организме способне да живе у окружењу са високим концентрацијама соли, као што је врста стафилокока за разлику од врста стрептокока, чији раст је инхибиран под овим условима.

Диференцијална компонента овог теста је шећер манитол. Организми који могу да користе манитол као извор хране произвеће нус-продукте ферментације, који су кисели и на тај начин снижавају пХ медијума.

Киселост медијума узрокује да се индикатор пХ, црвено феноло, поживи. Примјери врста бактерија које се могу разликовати овом методом су: Стапхилоцоццус ауреус (позитиван јер ферментира манитол) и Стапхилоцоццус епидермидис (негативан јер не ферментира манитол).

Коагулазни тест

Коагулаза је ензим који помаже згрушавање крвне плазме. Овај тест се изводи на грам-позитивне и каталазне позитивне бактерије да би се идентификовао Стапхилоцоццус ауреус (позитиван на коагулазе). У ствари, коагулаза је фактор вируленције ове врсте бактерија.

Стварање угрушака око инфекције изазване овом бактеријом вероватно је штити од фагоцитозе. Овај тест је веома користан када желите да разликујете Стапхилоцоццус ауреус од осталих Стапхилоцоццус врста које су негативне на коагулазу.

Тест уреазе

Овај тест се користи за идентификацију бактерија које су способне да хидролизују сечнину, користећи ензим уреазу. Обично се користи за разликовање рода Протеус од осталих ентеричких бактерија.

Хидролизом урее један је од производа који производи амонијак. Ова слаба база повећава пХ медијума изнад 8,4 и пХ индикатор (црвени фенол) се мења из жуте у ружичасте. Пример позитивне бактерије на уреазу је Протеус мирабилис.

За шта се користе биохемијски тестови?

Биохемијски тестови у микробиологији користе се за дијагностицирање болести које узрокују микроби и за праћење третмана који су примењени у борби против њих. Поред тога, користе се за скрининг заразних болести и за њихову прогнозу.

Биохемијска идентификација микроорганизама нуди идеју на шта су ти микроорганизми способни, могуће је разликовање различитих сојева исте врсте према посебним биохемијским профилима.

Разлике у специфичним активностима ензима упућују на екологију, физиологију или природно станиште микроорганизма, што се у неким случајевима може сматрати важном информацијом.

Значај

Структурне разлике у облику, величини и распореду бактерија помало помажу у процесу идентификације, јер постоји много врста бактерија које су сличних облика, величине и распореда.

Из тог разлога, идентификација бактерија се у коначници заснива пре свега на разликама у њиховим биохемијским активностима.

Свака врста бактерија има добро дефинисан скуп метаболичких активности различитих од свих осталих врста. Ови биохемијски „отисци прстију“ су својства која контролишу бактеријски ензими.

Стога су биохемијски тестови важни јер помажу истраживачу да правилно идентификује патогене присутне у узорку и на тај начин може да препоручи пацијенту одговарајући третман.

Референце

1. Бецкетт, Г., Валкер, С. и Рае, П. (2010). Клиничка биохемија (8. изд.). Вилеи-Блацквелл.
2. Цларке, ПХ и Цован, СТ (1952). Биохемијске методе за бактериологију. Јоурнал оф Генерал Мицробиологи, 6 (1952), 187-197.
3. Гав, А., Мурпхи, М., Сривастава, Р., Цован, Р., Ст, Д. и О'Реилли, Ј. (2013). Клиничка биохемија (5. изд.). Елсевиер Хеалтх Сциенцес.
4. Голдман, Е. & Греен, Л. (2008). Практични приручник микробиологије (друго издање). ЦРЦ Пресс.
5. Харриган, В. (1998). Лабораторијске методе у микробиологији хране (3. изд.). Академска штампа.
6. Васантхакумари, Р. (2009). Практична микробиологија. БИ Публицатионс Пвт Лтд.