ТЕЧНА ХРОМАТОГРАФИЈА ВИСОКИХ ПЕРФОРМАНСИ (ХПЛЦ): ОБРАЗЛОЖЕЊЕ, ОПРЕМА, ВРСТЕ - ХЕМИЈА - 2025

Течна хроматографија високих перформанси је инструментални техника у хемијским анализама које су дозвољене засебне смеше, очисти и квантификовати делове и додатне студије. Позната је по скраћеници ХПЛЦ, која је настала из енглеског: Хигх Перформанце Ликуид Цхроматограпхи.

Тако, као што му име каже, делује манипулирањем течностима. Они се састоје од смеше која се састоји од аналита или узорка који вас занима и једног или више растварача који делују као покретна фаза; то јест онај који провлачи аналит кроз сву ХПЛЦ опрему и колону.

ХПЛЦ опрема. Извор: Дквии

ХПЛЦ широко користе лабораторије за анализу квалитета у многим компанијама; као што су лекови и храна. Дотични аналитичар мора припремити узорак, мобилну фазу, проверити температуру и друге параметре, а бочице ставити у точак или вртиљак да опрема аутоматски изврши ињекције.

ХПЛЦ опрема је спојена са рачунаром преко кога се могу посматрати генерисани хроматограми, као и за покретање анализа, контрола протока мобилне фазе, програмирање типа елуције (изократски или градијент) и укључивање детектора (УВ -Вис или масени спектрофотометар).

Основе

За разлику од класичне течне хроматографије, попут папирне или силикагелске колонске хроматографије, ХПЛЦ не зависи од гравитације да течност влажи стационарну фазу. Уместо тога, делује са пумпама високог притиска, које наводњавају покретну фазу или елуирају кроз колону већег интензитета.

На овај начин, није потребно свако толико да се мобилна фаза сипа кроз колону, већ систем то врши континуирано и са већим протоцима.

Али ефикасност ове технике није последица искључиво овог детаља, већ и ситних честица пунила које чине стационарну фазу. Што је мањи, његова површина додира са покретном фазом је већа, тако да ће боље комуницирати са аналитом и његови ће се молекули више одвојити.

Ове две карактеристике, плус чињеница да техника омогућава спајање детектора, чине ХПЛЦ далеко супериорнијом у танкослојној или папирној хроматографији. Раздвајања су ефикаснија, покретна фаза путује боље кроз стационарну фазу, а хроматограми могу открити било какав неуспех у анализи.

Опрема

Поједностављени дијаграм рада ХПЛЦ опреме. Извор: Габриел Боливар.

Изнад је поједностављени дијаграм рада ХПЛЦ опреме. Растварачи се налазе у њиховим одговарајућим посудама, распоређеним цревима, тако да пумпа заузима малу количину од њих у опрему; имамо мобилну фазу.

Мобителска фаза или елуент морају се најпре одмастити, тако да мехурићи не утичу на одвајање молекула аналита, који се меша са мобилном фазом након што опрема направи ињекције.

Хроматографска колона је смештена унутар рерне која омогућава регулисање температуре. Дакле, за различите узорке постоје одговарајуће температуре за постизање раздвајања високих перформанси, као и широк каталог стубова и врста пуњења или стационарних фаза за специфичне анализе.

Мобилна фаза са раствореним аналитом улази у колону и из ње се најпре испиру молекули који „осећају“ мањи афинитет за стационарну фазу, док они који их више задржавају елуирају касније. Сваки елуирани молекул генерише сигнал приказан на хроматограму, где се посматрају времена задржавања одвојених молекула.

А с друге стране, мобилна фаза након проласка кроз детектор завршава у контејнеру за отпад.

ХПЛЦ типови

Постоји много врста ХПЛЦ-а, али међу свима њима су најистакнутије следеће четири.

Хроматографија нормалне фазе

Нормална фазна хроматографија односи се на ону у којој је стационарна фаза поларне природе, док је покретна фаза неполарна. Иако се назива нормалним, у ствари се најмање користи, при чему је обрнута фаза најраспрострањенија и најефикаснија.

Хроматографија реверзне фазе

Будући да је инверзна фаза, сада је стационарна фаза аполарна, а покретна фаза поларна. Ово је посебно корисно у биохемијској анализи, јер се многи биомолекули боље растварају у води и у поларним растварачима.

Хонатографска хроматографија

Код ове врсте хроматографије аналит се са позитивним или негативним набојем креће кроз колону, замењујући јоне у којима живи. Што је наелектрисање веће, веће је његово задржавање, због чега се широко користи за одвајање јонских комплекса прелазних метала.

Хроматографија за искључивање величине

Ова хроматографија, уместо одвајања, задужена је за прочишћавање добијене смеше. Као што му име каже, аналит се више не одваја у зависности од тога колико је уско повезан са стационарном фазом, већ у зависности од његове величине и молекуларне масе.

Мањи молекули ће се задржати више од великих молекула, јер се ови не би нашли заробљени између пора на полимерним ступовима.

Апликације

ХПЛЦ омогућава квалитативну и квантитативну анализу. Са квалитативне стране, упоређивањем времена задржавања хроматограма под одређеним условима, може се открити присуство одређеног једињења. Такво присуство може указивати на болест, прељубу или употребу дрога.

Стога је рачунарски део дијагностичких лабораторија. Слично томе, налази се унутар фармацеутске индустрије, јер омогућава проверу чистоће производа, као и његов квалитет у односу на његово растварање у желудачном окружењу. Почетни материјали се такође подвргавају ХПЛЦ да би се прочистили и обезбедили бољи учинак у синтези лекова.

ХПЛЦ омогућава анализу и одвајање сложених смеша протеина, аминокиселина, угљених хидрата, липида, порфирина, терпеноида и у основи је одлична опција за рад са биљним екстрактима.

И на крају, хроматографија молекуларне искључености омогућава вам одабир полимера различитих величина, јер су неки могу бити мањи или већи од других. На овај начин се добијају производи ниске или високе просечне молекуларне масе, што је пресудан фактор њихових својстава и будуће примене или синтезе.

Референце

1. Даи, Р. и Ундервоод, А. (1989). Квантитативна аналитичка хемија. (пето издање). ПЕАРСОН Прентице Халл.
2. Бусси Јуан. (2007). Хроматографија високих перформанси. . Опоравак од: финг.еду.уи
3. Википедиа. (2019). Хроматографија високих перформанси. Опоравак од: ен.википедиа.орг
4. Цларк Јим. (2007). Хроматографија високих перформанси. Опоравак од: цхемгуиде.цо.ук
5. Маттхев Барковицх. (05. децембра 2019). Хроматографија високих перформанси. Цхемистри ЛибреТектс. Опоравак од: цхем.либретектс.орг
6. ГП Тхомас. (15. априла 2013. године). Течна хроматографија високих перформанси (ХПЛЦ) - методе, предности и примене. Опоравак од: азом.цом