ОРЦЕИН: ОСНОВА И ПРИПРЕМА - ХЕМИЈА - 2024

Орцеина је природни обојена љубичасто, екстракује из различитих лишајева као орцхилла или арцхилл, фрутицосе лишаја Роццелла тинцториа и Лецанора Парелла углавном. Роцелла тинцториа се налази на афричком и америчком континенту, мада га могу заменити друге врсте које се налазе у Европи.

Ова мрља се широко користи у цитогенетским студијама од давнина. У том смислу, орцеински препарат који укључује сирћетну киселину увео је ЛаЦоурт 1941. године, због чега је у почетку назван ЛаЦоурт техника.

Хемијска структура орцеина и раствора орцеина. Извор: Википедиа.орг/ Огуентхер на де.википедиа (Др. Гуентхер)

Исто тако, због своје једноставности и ниске цене, коришћен је за производњу лакмуса (боја које се вади из лишајева) и у хистолошким студијама (бојење ћелија и ткива).

Неколико студија користило је то бојење у комбинацији са другим хемикалијама, као што је амонијак пикаркарминат и сирћетна киселина, за мрљање еластичних влакана и хромозома. Тренутно се орцеин и даље користи у цитогенетским студијама животиња и биљака.

Недавно, Силва и др. 2017. успешно је користила ову мрљу за посматрање различитих промена које се јављају у еластичним влакнима коже палца код старијих одраслих особа Чилеа. Ова студија открила је како се влакна палца мењају са старењем.

У том смислу, примећено је да су еластична влакна смеђе-црне боје код особа старијих од 80 година; док су код најмлађих (од 60 година) виђени као црвенкастосмеђи. Цитоплазма и остале ћелијске структуре постају жуто-зелене.

То је омогућило потврђивање присуства и стања еластичних влакана, у погледу њихове диспозиције, количине и интегритета. С друге стране, такође је указано да орцеин може бити од велике помоћи у идентификовању анеуризми и дијагностицирању артеритиса, између осталих стања.

Основе

Орцеин је део оксазинске групе боја, а бојење се заснива на његовом афинитету за ДНК. Боја се везује за негативни набој овог молекула, који је представљен фосфатном групом. Због тога су хромозоми обојени љубичасто.

Међутим, остатак ћелијске структуре поприма другачију боју. Наиме, у случају еластичних влакана, обојена су црвенкасто смеђим, ћелијска језгра од плаве до тамно љубичасте боје, док колаген не мрља.

Из тог разлога, орцеин се користи за бојење кроматина и разликовање спола код неких врста мува. Исто тако, језгра и неке јетрене инклузије произведене антигенима хепатитиса Б могу се обојати.

Орцеинова решења имају специфичне функције у бојењу. Орцеин А има функцију омекшавања ћелијских мембрана, изазивајући њихову смрт и паралишући процес њихове деобе. У међувремену, орцеин Б је одговоран за довршавање бојења адхезијом на хромозоме.

Припрема

Раствор ацето-орцеина 1%

Да бисте припремили 1% раствор ацето-орцеина, 2 грама орцеина је растворено у 45 мл ледене сирћетне киселине, погодно вруће, а на собну температуру је додато 55 мл дестиловане воде.

Затим се непрестано меша како би се раствор хомогенизовао, да би се касније оставило док се не охлади. Коначно се чува на 4 ° Ц у тамним стакленкама. Флорес 2012 је овај препарат користио за посматрање фаза сазревања ооцита краве.

У овом случају, на пример, раствор ацето-орцеина се стави на ткиво претходно фиксирано у сирћетној киселини-етанолу током 24 сата. Овај поступак бојења се изводи током 30 минута и ткиво се накнадно обоји.

Исто тако, може се користити за идентификацију органела у вишећелијским ткивима. У том случају се мрља бучне слузнице обоји капљицом раствора ацето-орцеина, прекривач се постави на слајд и језгро ћелије са његовим подструктурама може се одмах уочити.

Лакто-пропонски раствор орцеин 1%

Поред тога, орцеин се може припремити са другим хемикалијама, као што су млечна киселина и пропионска киселина. Да бисте то учинили, један грам орцеина је растворен у претходно мешаном раствору, на собној температури од 23 мл млечне киселине и 23 мл пропионске киселине; допуњавање запремине дестилираном водом до 100 мл.

Помоћу овог лактопропионског орцеинског раствора могуће је посматрати различите фазе мејотске поделе биљних ћелија. У овом случају, префиксирани и хидролизовани узорак се смешта 15 минута у лактопропионском орцеинском раствору, а затим се ткиво шири на слајдове микроскопа.

У Дукуеовој студији из 2016. о полигеним хромозомима користио је препарат 2 грама орцеина разблаженог у сирћетној киселини и 85% млечне киселине, разблаживши 65% раствор сирћетне киселине. Коначно је погледао хромозоме у пљувачним жлездама дросопхила меланогастер.

Орцеин А и Орцеин Б

Важно је напоменути да се, зависно од узорка и онога што се оцењује, припрема одговарајућа орцеинска отопина. Тако се, на пример, 1Н хлороводонична киселина додаје у раствор орцеина А ради посматрања ћелија које се деле.

Док је раствор орцеина Б растворен у 45% сирћетне киселине. Ова техника је скраћена метода бојења и углавном се користи као додатак бојењу хромосомских структура.

Последње мисли

Од векова прошле године, лишајеви попут Лецанора, Пармелиа и Умбилицариа могу се наћи у земљама америчког континента као што је Аргентина, које су сјајни извори орцеина. Такође су европска подручја попут Канарских острва у то време били велики произвођачи орхидеје.

Извозило се у друге градове истог континента, попут Ђенове и земаља попут Енглеске, док је Холандија монополизовала производњу лакмуса из орхидеје. Због тога је овај лишајев касније смањен све док није ускоро изумро.

То је довело до тога да орхилу замене друге биљке са својствима боје. Међутим, појава синтетичких боја допринела је прекиду трговине овим лишајевима из оркеинског извора.

То је било могуће захваљујући Цоцк-у, који је 1812. године описао синтезу орцеина, знајући тада да га синтетише фенолним једињењем званим орцинол. Међутим, и поред тога, природни орцеин је и даље преферирани.

То је можда зато што је орцинол врло снажно миришуће једињење, а његова продужена изложеност могла би да носи ризике по здравље, попут губитка способности откривања мириса. Ова оштећења хипофизе могу прећи из привремене у трајну што је већа изложеност.

Референце

1. Ортега Л, Гарциа Р, Моралес Ц. «Примена лака који се ствара од гљива за разградњу микробиолошких боја (орцеин и кристално љубичица).» Млади у науци 2. 2015; 633-637. Доступно на: јовенесенлациенциа.угто.мк.
2. Барцат Ј. Орцеина и еластична влакна. Медицина (Буенос Аирес) 2003; 63: 453-456. Доступно на: Медицинабуеносаирес.цом.
3. Силва Ј, Ројас М, Араиа Ц, Виллагра Ф. Хистолошке карактеристике летеће коже палца палца код чилеанских појединаца са бледењем дактилограма. Ј. Морпхол. 2017; 35 (3): 1107-1113. Доступно на: сциело.цоницит.
4. Оррилло М, Меридетх Б. „Репродуктивна биологија и цитогенетика крумпира.“ Међународни центар за кромпир (ЦИП). Технички приручник. Доступно на: ресеарцх.цип.цгиар.орг/
5. Флорес Ф. «Збирка, култура и ин витро сазревање крављих ооцита (бос таурус) у боливијском горју." . Национални универзитет Алтиплано, Пуно-Перу; 2012.Доступно на: репоситорио.унап.еду.пе.
6. Дукуе Ц. Политенски хромозоми: поглед на феномен ендоредупликације. Национални универзитет Колумбије, Медељин; 2016. Доступно на: еду.
7. Цамарена Ф. Ћелијска и молекуларна биологија. Приручник за вежбе Аутономни универзитет у Баји, Калифорнија. 2017. Доступно на: пез.енс.уабц.мк.
8. ФАО / ИАЕА. 2018. Приручник за разликовање дивљих и узгајаних муха Анастрепха луденс (Лоев) од нормалног соја („би-сексуални“) и генетски полног соја (Тапацхула-7), озрачен и без озрачења. Гуиллен Агуилар ЈЦ, Лопез Муноз Л, Лопез Виллалобос ЕФ и Сото Гарциа ДН Организација Уједињених нација за храну и пољопривреду. Рим, Италија, 95 стр.
9. Орцеин. (2018, 30. новембра). Википедија, Слободна енциклопедија. Датум консултација: 03:38, 31. јули 2019. ес.википедиа.орг.
10. Мерцк Миллипоре. (2018, 16. јула). Орцеинова микроскопија за Цертистаин микроскопију. Доступно на: мерцкмиллипоре.цом