ВОГЕС-ПРОСКАУЕР ТЕСТ: ОСНОВА, ПРИПРЕМА И УПОТРЕБА - БИОЛОГИЈА - 2025

Вогес-Проскауер тест је биохемијски тест се користи да помогну у идентификацији бактерија припадају породици Ентеробацтериацеае. Посебно је користан за разликовање сојева Есцхерицхиа цоли од Клебсиелла и Ентеробацтер, између осталих.

Тест се изводи у течном медијуму за културу названом Метил Ред - Вогес Проскауер, познатијем по акрониму РМ / ВП. Овај медијум се састоји од пуферираног полипептона, глукозе, дипоталијум-фосфата и дестиловане воде.

Комерцијални медијум / ВП тест метил Ред-Вогес Проскауер (РМ / ВП) позитиван и негативан. Извор: Фотографију направио аутор МСц. Мариелса Гил / Судипта.нов15, са Викимедиа Цоммонс

Тренутни РМ / ВП медијум је модификација Цларка и Лубсовог медијума, који је у почетку садржавао нижу концентрацију пептона и глукозе. Тако је произведено мање јона водоника, потребног за позитивну Вогес-Проскауерову реакцију.

Тест се заснива на способности микроорганизма да користи глукозу путем бутилен-гликола и формира неутралан крајњи производ зван ацетоин, у присуству кисеоника и алкалног пХ.

У РМ / ВП медијуму, осим што може да открије Вогес-Проскауер тест, може се открити и метил црвени тест.

Основе

Вогес-Проскауер тест основа

Плурипептони присутни у медијуму пружају суштинске прехрамбене потребе за раст бактерија. Са своје стране, глукоза је главно једињење. Многе бактерије имају способност метаболизације глукозе и формирања пируичне киселине.

Пируична киселина је средина метаболизма глукозе и одатле сваки микроорганизам може ићи различитим путевима. Неке ће формирати мешане киселине, попут млечне киселине, сирћетне киселине, мравље киселине и јантарне киселине, а друге ће формирати неутралне производе попут 2,3-бутандиола.

Вогес-Проскауер тест открива способност микроорганизма да формира ацетил метил карбинол (ацетоин), интермедијарни производ 2,3-бутандиола у аеробним условима.

Ацетоин је смањен и формира 2,3-бутандиол, али је та реакција реверзибилна, па ако је 2,3-бутанедиол оксидан, формира се ацетоин. Због тога је кисеоник од суштинског значаја.

Дико калијум фосфат је пуфер који пуферује смешу на пХ 6,9 ± 0,2.

Оснивање доказа и тумачење

Да би се показала реакција, потребно је извести развој помоћу два реагенса (Баррит реагенса), познатих као Вогес А и Вогес Б.

Вогес А је 5% раствор α-нафтола, а Вогес Б је 40% препарат калијум хидроксида. Ако калијум хидроксид није доступан, може се заменити са 40% натријум хидроксида.

Α-наффол је катализатор који ће повећати интензитет реакционе боје, чинећи тест осетљивијим. Α-нафтол се увек мора прво додати, мућкајући епрувету, тако да медијум дође у контакт са кисеоником. На овај начин се присутни ацетоин оксидује у диацетил, а 2,3-бутанедиол се оксидује да формира ацетоин, преносећи га у диацетил.

Овако ће се α-нафтол везивати за диацетил, који се заузврат придружио језгру гванидина који је присутан у аминокиселини аргинин, а последњи долази из плурипептона.

Са своје стране, калијум или натријум хидроксид су одговорни за апсорпцију ЦО ₂ и реакцију са пептоновима. Ова реакција изазива стварање лососове ружичасте боје, јасно видљиве након што добро протресете цев.

Исправне количине диацетила, пептона и α-нафтола морају се помешати како би се боја одмах појавила. Ако се то не догоди, епрувета је остављена да се одмара 15 минута пре него што то тумачи.

Тест је обично позитиван након 2 до 5 минута, када се може видети слабо ружичаста боја. Ако оставите да стоји 30 мин до 1 сат, интензитет боје ће бити максималан (интензивно црвена).

Негативни тест ће се показати када јуха поживи. Након једног сата, ако је тест негативан, може се формирати боја бакра као резултат реакције калијум хидроксида на α-нафтол.

Припрема

Средња МР / ВП

Одважите 17 г дехидрираног медијума за раствор и растворите у литру дестиловане воде. Оставите да стоји 5 минута. Загрејати до врења да се потпуно растопи. Сервирати 3 до 4 мл у епруветама и стерилизовати у аутоклаву на 121 ° Ц током 15 минута.

Средство за дехидрирану културу је беж боје, а припремљени медијум је светло амберне боје.

Крајњи пХ медијума је 6,9 ± 0,2.

Вогес реагенс

Извагати 5 г α-нафтола и растворити у 50 мл етил-алкохола (апсолутно). Затим наставите са додавањем етилног алкохола све док не достигне 100 мл.

Вогес Б реагенс

Извагати 40 г калијум хидроксида и растворити у 50 мл дестиловане воде у чаши. Чаша се мора ставити у хладну водену купељ да би се контролисала температура, јер кад се препарат раствара, температура се нагло повећава.

Након што је раствор хладан, преноси се у волуметријску тиквицу и дода се до 100 мл дестиловане воде.

Вогес-Проскауер поступак испитивања

Да би се извршио тест Вогес-Проскауер, РМ / ВП бујон инокулиран је микроорганизмом који се проучава, из чисте културе током 18 до 24 сата.

Инокулум не сме бити веома густ. Инкубира се на 35-37 ° Ц током 24 до 48 сати, мада је понекад неопходна инкубација током неколико дана. Цован и Стеел сматрају да је 5 дана минимално вријеме инкубације потребно за откривање свих позитивних врста Вогес-Проскауер (ВП) из породице Ентеробацтериацеае.

Развој теста

Одвојите 1 мл аликвота у епрувету и развијте на следећи начин: ставите 12 капи (0,6 мл) реагенса Вогес и 4 капи (0,2 мл) Вогес Б. Мешајте да прозрачите и оставите да се слегне 5 - 10 минута пре превођења. Међутим, ако је тест и даље негативан, оставите га да посматра епрувету након 30 минута до 1 сата.

Појава ружичасто-црвене боје указује да је Вогес-Проскауерова реакција позитивна. Ако медијум остане жут, реакција је негативна.

Додавање програмера у редоследу и назначеној количини је кључно да се избегну лажни негативи.

Употреба

Вогес-Проскауер тест је користан за разликовање сојева Е. цоли који су негативни на ВП, родова Клебсиелла, Ентеробацтер, Серратиа, између осталих који су ВП позитивни.

Извор: Конеман Е, Аллен С, Јанда В, Сцхрецкенбергер П, Винн В. (2004). Микробиолошка дијагноза. 5. изд. Редакција Панамерицана СА Аргентина.

КА

Контролни сојеви се могу користити за тестирање квалитета припремљеног медијума, укључујући Есцхерицхиа цоли АТЦЦ 25922, Клебсиелла пнеумониае АТЦЦ 700603, Протеус мирабилис АТЦЦ 43071, Салмонелла типхимуриум и Ентеробацтер цлоацае АТЦЦ 13047.

Очекивани резултати су позитивне Вогес-Проскауерове реакције само за К. пнеумониае и Е. цлоацае. Остали дају негативне реакције.

Референце

1. Британниа Лабораториес. МР-ВП средња. 2015. Доступно на: ввв.британиалаб.цом
2. Мицрокит Лабораториес. М-идентитет Вогеса Проскауера. 2014. Доступно: хттп://ввв.медиосцултиво.цом
3. Мац Фаддин Ј. (2003). Биохемијска испитивања за идентификацију бактерија од клиничког значаја. 3. изд. Редакција Панамерицана. Буенос Ајрес. Аргентина.
4. Форбес Б, Сахм Д, Веиссфелд А. (2009). Баилеи & Сцотт Микробиолошка дијагноза. 12 ед. Редакција Панамерицана СА Аргентина.
5. Конеман Е, Аллен С, Јанда В, Сцхрецкенбергер П, Винн В. (2004). Микробиолошка дијагноза. 5. изд. Редакција Панамерицана СА Аргентина.