БОЈЕЊЕ КАПСУЛЕ: ОБРАЗЛОЖЕЊЕ И ТЕХНИКЕ - БИОЛОГИЈА - 2025

Бојење капсула је диференцијални бојења техника која има својство стреса полисахарида структуре околног одређене бактерије и квасца зову капсула. Користи се у клиничким лабораторијама како би се дијагностицирале одређене патологије узроковане капсулираним микроорганизмима.

Такође се користи у наставним лабораторијама за демонстрирање ове морфолошке структуре студентима здравствених наука, као што су: медицина, биоанализа, сестринство или цитотехнологија, између осталих.

Мрље Клебсиелла пнеумониае обојене флеком од капсуле. Индијска метода мастила са сафранином. Извор: А.А.В

Постоји неколико једноставних техника којима се може доказати присуство капсуле у микроорганизмима који је поседују, а то су: негативна мрља, Антхони мрља и варијанта која комбинује претходне две.

Негативно бојење се углавном користи у узорцима ЦСФ-а када се сумња на присуство квасца Цриптоцоццус неоформанс. Овај квас је чест узрок менингитиса.

Ова техника користи нигросин или индијску тинту и заснива се на стварању контраста између позадине препарата и непробојне капсуле микроорганизма. Позадина постаје тамна, а капсула безбојна. На овај начин се открива ова структура.

Што се тиче Антхони технике, може се рећи да се она углавном користи у наставним лабораторијама за демонстрирање структуре полисахарида у бактеријама као што су Клебсиелла пнеумониае, Стрептоцоццус пнеумониае и Неиссериа менингитидис.

Употреба ове технике у дијагностичке сврхе је веома ретка, јер постоје и други рутински тестови који омогућавају идентификацију ових микроорганизама.

Основе

Капсула је снажне структуре полисахаридне природе. Ово штити микроорганизме од фагоцитозе, па је стога тешко пробити структуру.

Зато се мрље на капсулама базирају на контрасту. Боје боје мрље на дну препарата док капсула остане безбојна.

Стога је помоћу ових техника капсула лако препознатљива. Ако микроорганизам нема капсулу, неће се разликовати овом врстом бојења, јер ће све обојати истом бојом.

Све технике које се користе за бојање капсуле имају исти разлог, упркос коришћењу различитих боја и поступака.

Технике пар

-Антонијска мрља

Антхони мрља користи кристално љубичасту мрљу. Ово ће обојати тело бактерија и позадину љубичасто.

С друге стране, користи се 20% бакар-сулфат. Ово служи као раствор за прање, односно уклања вишак љубичасте кристале из препарата, чинећи капсуле бистрим, али без бактеријског тела или позадине губе боју.

материјали

- Иридесцентно млеко.

- Тобоган.

- 1% љубичасти кристал.

- 20% бакар сулфата.

- оптички микроскоп.

- Урањање уље.

Процес

Ова техника се састоји од:

1. Култивирајте микроорганизам у иридесцентном млеку током 36 сати.
2. На крај тобогана ставите кап културе, а поред ње ставите кап љубичастог стакла, помешајте и поспите крај другог клизача.
3. Ваздух се суши и не подноси топлоту.
4. Оперите са 20% раствором бакар-сулфата и оставите да се осуши на ваздуху.
5. Посматрајте под микроскопом са циљем урањања. Претражите према крајевима намаза.

Важно је да не користите топлоту ни за фиксирање ни за сушење, јер то оштећује капсулу. Такође не перите водом.

Тумачење

Иридесцентно млеко је одличан медиј за културу јер обезбеђује потребне храњиве састојке микроорганизму за развој истакнуте капсуле.

С друге стране, иридесцентно млеко ће формирати дебело и компактно дно које ће бити обојено љубичасто заједно са бактеријским телом, али капсула која окружује микроорганизам ће остати безбојна. Због тога се око бактеријског тела примећује јасан хало.

Графички приказ микроскопског посматрања бриса Клебсиелла пнеумониае обојеног Антхони-јевом мрљом. Извор: Израдио аутор мр. Мариелса Гил.

Предност

То је једноставна техника извођења. Не захтева фиксирање.

Такође, треба напоменути да се могу користити и други медијуми за културу, али млечни медијум је пожељнији јер има предност пружања истакнутијих капсула.

Недостаци

То је мало интензивнија техника од негативног бојења, а за њену визуализацију потребно је чекање да се препарат потпуно осуши.

-Негативно бојење

материјали

- Клизне слајдове.

- Култура са микроорганизмом.

- кинеском мастилом или нигросином.

- оптички микроскоп.

- Физиолошки физиолошки раствор.

Процес

Ставите кап физиолошке физиолошке отопине ​​на покривач и растворите мали део микробне културе. Важно је да препарат не буде превише густ. Затим ставите кап кинеске мастила или нигросина и измешајте.

Потом се преко поклопца стави покровни лист без преливања течности. Под микроскопом се посматра тако што се прво фокусира на 10Кс циљ, а затим пређе на 40Кс.

Ова техника се такође може директно користити на узорцима ЦСФ-а. То јест, уместо да се стави кап микробне културе, стави се кап ЦСФ-а.

Предност

То је једноставан начин извођења и истовремено јефтин. Не захтева фиксацију или сушење препарата.

Недостаци

Недостатак је тај што се мора посматрати под микроскопом пре него што се препарат осуши, јер ако се то догоди, микроорганизми ће се скупити, што ће визуализацију отежати.

С друге стране, лажни позитивни ефекти могу се појавити ако је аналитичар неискусан, с обзиром да се леукоцити често мешају са квасцима.

Посматрање капсула квасца кинеском мастилом или нигросином треба сматрати претпостављивом дијагнозом Цриптоцоццус неоформанс док се не покаже са културом.

То је зато што постоје и други квасци који би могли бити узрок менингитиса, а не само Цриптоцоццус неоформанс, попут рода Цандида и Рходоторула, као и друге врсте Цриптоцоццуса.

Тумачење

Ако постоје капсулирани микроорганизми, приметиће се тамна позадина, а провидна тела лебде у течности, наглашавајући присуство капсуле.

Капсула Цриптоцоццус неоформанс обојена кинеском мастилом. Извор: Фотографски кредити: Понудитељи садржаја: ЦДЦ / Др. Леанор халеи

-Индијска техника мастила

Ова техника се може извести и са нигросином. То је комбинација раније описаних техника. Ова техника користи кристално љубичасту и индијску мастило или нигросин.

Тијело бактерија постаје љубичасто од кристално љубичасте јер је негативно набијено, док нигросин обоји дно мрље. Ако бактерија има капсулу, она ће се појавити као прозирни ореол око микроорганизма.

Кристално љубичаста може бити замењена било којом од ових боја: сафранином, основним фуксином или метилен плавом бојом.

материјали

- Љубичасто стакло.

- Нигросин или индијска тинта.

- Клизне слајдове.

- Микроскоп.

Процес

- Узгајати микроорганизам у медијуму за културу.

- Ставите кап културе на крај слајда, а поред ње ставите кап индијске мастила или кристала нигросина, помешајте и поспите крај другог клизача.

- Ваздух се суши и не учвршћује на топлоти.

- Покријте љубичастим кристалним раствором 1 минут, оперите дестилованом водом, али врло деликатно (меким млазом), оставите да се осуши на отвореном.

- Посматрајте под микроскопом са циљем урањања. Претражите према крајевима намаза.

Тумачење

Видеће се љубичасто бактеријско тело и тамна позадина. Капсула ће се појавити безбојна око бактерија.

Референце

1. Цовадонга А, Силониз М, Серрано С. Основне технике микробиологије. Посматрање бактерија. Редука (биологија). Мицробиологи Сериес. 2010; 3 (5): 15-38. Д
2. Лопез-Јацоме Л, Хернандез-Дуран М, Цолин-Цастро Ц, Ортега-Пена С, Церон-Гонзалез Г, Францо-Цендејас Р. Основне мрље у микробиолошкој лабораторији. Медиаграпхиц.орг. 2014; 3 (1): 10-18. Доступно на: медиграпхиц.цом
3. Гил М. Негативно бојење: образложење, техника, предности и недостаци. Лифедер.цом.
4. Форбес Б, Сахм Д, Веиссфелд А. 2009. Микробиолошка дијагностика Баилеи & Сцотт. 12 ед. Аргентина. Редакција Панамерицана СА
5. Танкесхвар А. Мрља од капсуле: принцип, поступак и резултати. 2019. Водич за медицинску микробиологију. Доступно на: мицробеонлине.цом