БОЈЕЊЕ ХЕМАТОКСИЛИН-ЕОЗИНОМ: КАРАКТЕРИСТИКЕ, УПОТРЕБЕ, ТЕХНИКЕ - ХЕМИЈА - 2026

Хематоксилин - еозином је техника бојења користећи комбинацију красителеј хематоксилином и еозином. Овај пар боја чини савршен двојац, јер хематоксилин делује као основна боја, а еозин је кисело бојило.

Означавање базичних или киселих боја не односи се на пХ који добијају у раствору, већ говори о преовлађујућем удела у погледу анионских или катионских набоја које поседују или према локацији хромофорске групе.

Извор: Тодд Страус и Владимир Осипов обојени хематоксилином - еозином (ХЕ) цилиатед цилиатед цолумнар епител

У том смислу, хематоксилин се сматра основним (катионском) бојом и због тога има афинитет према киселинским структурама, као што је језгро ћелија. Док еозин, као кисело (анионско) бојило, има афинитет према алкалним или основним структурама, попут ћелијске цитоплазме.

Из тог разлога, ова комбинација боја се широко користи за обојење ткива, јер омогућава јасно разликовање језгара и цитоплазми. Језгра мрља тамно плаву или љубичасту боју, а цитоплазма је ружичаста.

Бојење хематоксилин-еозином је једна од најчешће коришћених техника бојења у области хистологије и цитологије, због лаког руковања и ниских трошкова. Користи се за визуелизацију ћелија, густих нервних влакана и присуство одређених микроорганизама у ткивима, попут: паразита, гљивица и бактерија, између осталог.

карактеристике

Хематокилин

Хематоксилин је неутрално бојило. Међутим, компонента која даје боју (хромофор) налази се у катионском или основном центру молекула. Отуда њен афинитет према киселинским структурама. Његова хемијска формула је Ц ₁₆ Х ₁₄ О ₆ и његово научно име је 7,11б-дихидро-индено хромен-3, 4,6а, 9,10 (6 Х) -пентол.

Углавном обојава језгре ћелија, пошто су веома богате нуклеинским киселинама. Такође може да обоји цитоплазматске инклузије вирусног порекла.

Да би се хематоксилин могао мрљати, мора бити у оксидованом стању и везан за метал. Потоњи ће служити фиксацији на ткиво, то јест, делује као мордант.

Када се хематоксилин оксидује, назива се хематеин. Оксидација се постиже излагањем кисеонику (старењем) реагенса или супстанцама које помажу његову оксидацију (хемијска оксидација).

Еосин

Еосин је боја која обоји црвену или ружичасту боју. Нерастворљив је у води иако постоји верзија топива у води. Генерално, еозин се припрема растварањем у алкохолу (95 ° етанол).

Боји цитоплазме, мишићна влакна, цитоплазматске органеле и колаген, али не мрља ћелијске језгре. То је зато што је негативно наелектрисано, дакле, има афинитет према позитивно наелектрисаним структурама.

Постоје две врсте еозина "И" и "Б". Еосин "И" је познат као жути еозин. Његов научни назив је тетрабромо-уоресцеин, а хемијска формула је Ц ₂₀ Х ₈ Бр ₄ О ₅ .

С друге стране, еозин "Б" се понекад назива плавкаст еритросин Б. Његов научни име је дибромодинитро фл уоресцеин и формула је Ц ₂₀ Х ₈ Бр ₂ Н ₂ О ₉ . Обоје су врло слични и разлика између употребе једног или другог није баш уочљива. Међутим, најпопуларнији је еозин "И".

Еосин има својство разликовања живе и мртве ћелије, јер је способан да пређе мембрану да би обојао њену цитоплазму кад је ћелија мртва, а цитоплазму ћелије остави безбојну ако остане жива.

Апликације

Бојење нервних влакана

Густа нервна влакна се могу обојати и идентификовати са хематоксилин-еозином. Међутим, није корисно за бојење танких нервних влакана, јер је за визуализацију следњих потребно бојање сребром.

Хистолошке мрље на кожи

Приликом бојења рожног слоја коже, боја која делује је еозин, јер на овом нивоу ћелије немају језгро.

У зрнатом слоју коже, хематоксилин јако мрља кератохијалинске грануле у ћелијама гранула. Супротно томе, кичмени слој коже је слабо обојен хематоксилином, док је базални или герминални слој прилично обојен.

Еосин мрља цитоплазму свих ћелија и интензитет боје може варирати од слоја до слоја.

Бојење хематоксилином-еозином узорака столице

Гомез и др., 2005. показали су да је обојење хематоксилин-еозином ефикасније у идентификовању случајева амебијазе због Ентамоеба хистолитица и Ентамоеба диспарта него свежа метода визуелизације (физиолошки раствор и лугол) код пацијената са акутном дијарејском болешћу.

Такође се показало да је веома осетљива у откривању еритрофагоцитозе (амеје које су захватале еритроците).

Бојење хистолошких пресека за дијагнозу инфекције

Валвин и др., 2004. предложили су употребу хистолошких мрља да би се открили микроорганизми који изазивају инфекцију.

Помоћу бојења хематоксилин-еозином, они су могли да визуелизују инфекције проузроковане Цлостридиум, Ацтиномицес, спириллае или Цандида. Такође су могли да примете присуство паразита Сарцоптес есцабиеи у кожним пресецима и вирусних инклузија цитомегаловирусом и херпесом у одељцима различитих ткива.

Технике

За хистолошке узорке

Хистолошко обојење одсека пролази кроз низ корака. Прво је добити хистолошки пресек. Ово се мора намотати да би се касније постигли резови (ултрафини) микротомом. Техника се састоји од следећих корака:

1-Елиминација вишка парафина : за то можете користити ксилол или Хеме-Д, уронити на 3-5 минута.

2-Рехидратација узорка: ово се постиже урањањем узорка у различите концентрације алкохола (етанол) у падајућем редоследу (100 °, 90 °, 70 °). У свим случајевима 7 минута.

3-Елиминација вишка алкохола: за то се урања у воду на 7 минута.

4-Бојење хематоксилином: узорак је уроњен на 6-10 минута у лежиште у коме се налази хематоксилин. Време излагања зависи од величине и дебљине узорка.

5-Елиминација вишка хематоксилина: испере се водом 5 минута, а затим се брзо прође (10-20 секунди) кроз кисели алкохол. Касније се поново опере водом у трајању од 5 минута. Потом је уроњена у етанол на 96 ° током 1 минута.

6-обојење са еозином: за то је узорак уроњен на 5 минута у лежиште еозина.

7-дехидрација узорка : да бисте то постигли, иде кроз лежиште за алкохол (етанол), али овај пут узлазним редоследом. (70 °, 90 °, 100 °). (5 секунди, 5 секунди, 1 минут респективно).

8 - Појашњење узорка : за то је изложен ксилолу 5-10 минута и осушен да се трајно запти са канадским балзамом или другим сличним материјалом.

За узорке столице у потрази

Накапа се на стакленку са пацијентовом столицом и фиксира се 80% алкохолом током 5 минута. Лист је уроњен у хематоксилин на 5 минута и одмах испран водом.

Након тога, брзо се урања у кисели алкохол, а затим у воду са амонијаком. Испран је водом. Обојено је 5 минута у еозину. Узорак се дехидрира како је објашњено у стању технике и коначно се испере ксилоном.

Припрема реагенса

- Хематоксилин

У литри дестиловане воде раствори се 50 грама калијума или амонијум алуминијум сулфата. Када се потпуно растопи, додајте 1 грам кристализованог хематоксилина. Када се потпуно растопи, додаје се 1 г лимунске киселине заједно са 50 г хлорал хидрата и 0,2 г натријум јодата.

Смеша се кључа 5 минута, а затим се остави да се охлади и профилтрира да се уклоне преостале чврсте честице. Тако припремљен реагенс може се одмах користити.

- Еосин

Може се припремити са алкохолном или са воденом базом.

Алкохолни еозин

У 100 мл етанола на 95 ° раствори се 0,5 грама еозина "И". Затим додајте неколико капи ледене сирћетне киселине.

2% водени еозин

У 1250 мл дестиловане воде раствори се 25 грама еозина растворљивог у води "И". Затим додајте неколико капи ледене сирћетне киселине.

Кисели алкохол

Измерите 0,5 мл концентроване хлороводоничне киселине и додајте до 100 мл апсолутног алкохола.

Амонијачна вода

Измери се 0,5 мл концентрованог амонијака и дода се дестилована вода до 100 мл.

Референце

1. Наваррете, Г. Хистологија коже. Рев Фац Мед УНАМ 2003; 46 (4): 130-133. Доступно на: медиграпхиц.цом
2. Гомез-Ривера Н, Молина А, Гарциа М, Цастилло Ј, Цастилло Ј, Гарциа Р, Фонсеца И, Валензуела О.
3. Идентификација Ентамоеба хистолитица / Е. Раздвојите се техником свеже амебе и њеним бојењем хематоксилином-еозином у акутној дијареји. Рев Мек Педиатр 2005; 72 (3); 109-112. Доступно на: медиграпхиц.цом
4. Валвин В, Иглесиас М, Алмаралес М, Ацоста Н, Мера А, Цабрејас М. Корисност хистолошких техника за дијагнозу инфекције у анатомским узорцима. Рев Цуб Мед Мил, 2004; 33 (2). Доступно на: сциело.слд
5. ПанРеац АпплиЦхем ИТВ реагенси. Мрља од хематоксилина-еозина. 2017, Шпанија. Доступно на: итвреагентс.цом
6. Еосин. Википедија, Слободна енциклопедија. 7 нов 2018, 08:18 УТЦ 4 август 2019, 22:13 ен.википедиа.орг
7. "Хематоксилин." Википедија, Слободна енциклопедија. 3. мај 2019, 11:23 УТЦ 4 август 2019, 22:48 википедиа.орг