БОЈЕЊЕ У КИЊАУНУ: ОБРАЗЛОЖЕЊЕ И ТЕХНИКЕ - БИОЛОГИЈА - 2025

Киниоун обојење је техника бојења се користи за бојење бактерије и паразити киселине алкохол отпоран. Настала је из модификације боје Зиехл-Неелсен; Обе технике се тумаче на исти начин, али се разликују у два елемента: у припреми главног реагенса и у томе што техника Киниоун не користи топлоту.

Из тог разлога је позната и као хладно модификована хладна мрља Зиехл-Неелсен или Киниоун. Индициран је за бојење Мицобацтериум туберцулосис, Мицобацтериум лепрае, атипичним микобактеријама, Ноцардиас сп, Цриптоспоридиум парвум, Цриптоспоридиум мелеагридис, Цриптоспоридиум фелис, Цриптоспоридиум мурис и Цицлоспорас цаиетаненсис.

Цриптоспоридиум парвум обојен мрљом Киниоун. Пунлоп Анусонпорнперм, са Викимедиа Цоммонс

Вриједно је напоменути да се Ноцардиас слабо боје овом техником јер су дјелимично отпорне на киселине, тако да за овај род постоји модификација методологије.

Заузврат, техника хладног Киниоун-а комбинована је са техником трихрома, коју је Дидиер модификовао за откривање кокцидије (Цриптоспоридиум парвум и Исоспора белли) и споре микроспоридије (Ентероцитозоон биенеуси и Енцепхалитозоон интестиналис).

Основе

Главни реагенс за бојење је карболфуксин или карбол фуксин који се има својство везања на карболне киселине које постоје унутар воскастог ћелијског зида богате липидима (миколичне киселине) микобактерија и неких паразита.

Кисели избељивач не спречава ову везу; према томе, микроорганизми су дефинисани као брзи за киселину.

За разлику од технике Зиехл-Неелсен-а која фиксира боју топлотом-, у Киниоун техници овај корак није потребан, јер раствор карболног фуксина припремљен за ову технику садржи високу концентрацију фенола.

Фенол раствара липидни материјал у ћелијској стијенци, омогућавајући улазак карболфуксин боје. Након што боја продре, остаје фиксирана упркос испирању киселим алкохолом.

На тај начин микроорганизми који брзи од киселина попримају карактеристичну црвену боју, док све што није брзо киселина постане обојено и обојава се у плаву боју.

Техника

материјали

- Модификовани карболни фуксин.

- Алкохол -киселина.

- Метилен плаво.

Припрема Киниоун карбол фуксина

- Основни фуксин: 4 гр.

- Фенол: 8 мл.

- Алкохол (95%): 20 мл.

- Дестилована вода: 100 мл.

Основни фуксин треба полако растворити у алкохолу, непрестано мешајући. Затим се кристализовани фенол растопи у воденој купељи на 56 ° Ц. Кад се раствори, 8 мл се додаје горе припремљеном раствору фуксина.

Припрема кисело-алкохола

- Концентрована хлороводонична киселина: 3 мл.

- Етанол (95%): 97 мл.

Мора се мерити, спајати и мешати.

Припрема контрастне боје метилен плаве боје

- Метилен плави: 0,3 г.

- Дестилована вода: 100 мл.

Извагава се и раствара.

Техника бојења Киниоун-ом

1- Припремите мрљу директно из узорка, која може бити спутум, плућна течност, седимент урина, цереброспинална течност или измет; или суспензије микроорганизама добијених из чистих колонија развијених у медијуму примарне културе.

2- Фиксирајте мрљу топлином.

3- Ставите мрљу на мост за бојење и прекријте припремљеним Киниоун карбол фуксинским реагенсом. Оставите да одстоји 3 до 5 минута.

4- Оперите дестилираном водом.

5- Избелите са киселим алкохолом 3 минута и поново исперите дестилираном водом.

6- Избелите поново киселим алкохолом 1 или 2 минута док се више не обојите.

7- Оперите дестилованом водом и оставите да се оциједи, постављајући клизач у вертикални положај.

8- Прекријте препарат метилен плавим и оставите да делује 4 минуте.

9- Оперите дестилираном водом и оставите да се осуши на ваздуху.

10 - Испитајте на 40Кс, а затим на 100Кс.

Да бисте побољшали и убрзали бојење микроорганизама који брзо делују на киселину, додајте 1 капи средства за влажење (попут Тергитола бр. 7) у 30 до 40 мл Киниоун Царбол Фуцхсин.

Неке лабораторије мењају метилен плаво контрастно бојило у јарко зелено или пикиселина; први даје зелену боју позадини, а други ствара жуту боју.

Посебна техника Киниоун-а за нокардије

Да би се побољшало бојење бактерија рода Ноцардиа користи се модификација Киниоун флеке. Техника је следећа:

1- Прекријте размаз Киниоун карбол фуксином 3 минуте.

2- Испрати дестилованом водом.

3- Укратко променити боју киселим алкохолом припремљеним на 3% све док се више не обоји.

4- Оперите поново дестилованом водом.

5- Прекријте препарат метилен плавим и оставите да делује 30 секунди.

6- Оперите дестилованом водом и оставите да се осуши на ваздуху.

Комбинована техника карболног фуксина и трихрома модификована од стране Дидијеа

Ова техника се препоручује истовремено за анализу узорака столице за споре кокцидије и Мицроспоридиум сп. Поступак који слиједи је сљедећи:

1- Прекријте размаз Киниоун карбол фуксином 10 минута.

2- Уклоните боју и исперите дестилованом водом.

3- Избелите 30 секунди алкохолом хлороводоничне киселине.

4- Оперите поново дестилованом водом.

5- Прекријте размазани раствор трихромом 30 минута на 37 ° Ц.

6- Оперите дестилованом водом.

7- Избелите 10 секунди алкохолом с сирћетном киселином.

8- Оперите размаз 30 секунди користећи 95% етанол.

КА

Као позитивна контрола припремају се брисови сојевима Мицобацтериум туберцулосис и обоје се припремљеним реагенсима како би се потврдило да бактерије поприме одговарајућу боју (црвена-фуксија).

Негативне контроле могу се користити и тако што ћете брзо припремити мрље са било којим сојем, осим киселог алкохола, и тако потврдити да цео узорак поприма контрастну боју.

Киниоун техника у поређењу са Зиехл-Неелсен техником

Киниоун техника је једноставнија јер елиминира корак загревања, али његова главна предност је та што дугорочно избегава испуштање паре, високо токсичне и изазива рак. Стога је мрља од Киниоун сигурнија за бојење особља.

Важно је узети у обзир да се мора водити рачуна да реагенси не дођу у директан контакт с кожом, јер су корозивни и избељивач је запаљив.

Што се тиче недостатака, негативан брис не значи нужно да организам није присутан. Поред тога, присуство ћелијских крхотина може довести до лажних позитивних резултата, што доводи до конфузије у дијагнози.

Референце

1. Примењена клиничка хемија. (2016). БК Киниоун Кит. Доступно на: цромакит.ес
2. Орозцо-Рицо Мигуел. Мрља од Киниоун и две кокцидије код ХИВ-а. Медицински часопис МД. 2011; 3 (2): 137
3. Форбес Б, Сахм Д, Веиссфелд А (2009). Баилеи & Сцотт Микробиолошка дијагноза. 12 ед. Аргентина. Редакција Панамерицана СА
4. Конеман Е, Аллен С, Јанда В, Сцхрецкенбергер П, Винн В. (2004). Микробиолошка дијагноза. (5. изд.). Аргентина, уредништво Панамерицана СА
5. Сарадници Википедије "Киниоун мрља." Википедија, Слободна енциклопедија. Википедиа, Тхе Фрее Енцицлопедиа, 8. фебруара 2018. Веб. 5. јануара 2019.
6. Цомбол А, Фернандез Н, Фигуередо Е, Ацуна А, Занетта Е. Примена технике бојења за истодобну дијагнозу кокцидије и микроспоридије. Институт за хигијену Универзитета Републике. Монтевидео. Уругвај Доступно на: хигијена.еду.уи