МРЉА ОД ГРУНВАЛД-ГИЕМСА: ОБРАЗЛОЖЕЊЕ, ТЕХНИКА И УПОТРЕБА - БИОЛОГИЈА - 2025

Мај Грунвалд-Гиемса или Паппенхеим мрља је диференцијални бојење техника која мешавине Гиемса и маја Грунвалд реагенси. Користи се за разликовање нормалних и ненормалних крвних ћелија у периферном брису крви и коштане сржи, као и за бојење хистолошких пресека и цитолошких узорака.

Оба реагенса - Гиемса и Маи Грунвалд - изведена су из бојења Романовског типа, технике која се заснива на комбинацији киселих и базичних боја.

Смеј показује сегментирани неутрофил и милеоцит у случају хроничне мијелоидне леукемије, обојен бојом Маи Грунвалд Гиемса. Др Рамон Симон-Лопез (хттпс://ес.м.википедиа.орг/вики/Арцхиво:ЛМЦ-1.ЈПГ) путем Википедиа.орг.

Гиемса је побољшала технику стабилизацијом смеше еозина, метилен плаве боје и њихових деривата, са глицеролом. Уместо тога, Маи Грунвалд користи еозин и метилен плаву боју, користећи метанол као растварач. Ова стратешка комбинација дала је одличне резултате.

Иако у погледу посматрања ћелијске морфологије делује на сличан начин као на мрље Гиемса и Вригхт, ова техника побољшава претходну рафинирајући мрље паразитима који изазивају маларију, Цхагасову болест, леисхманиасис и трихомонијазу.

Уз то, показало се да је веома корисна техника за цитолошко истраживање сперматичне течности. Истакнуо се не само показујући морфолошке карактеристике сперме, већ и омогућавајући диференцијацију леукоцита, епителних ћелија и ћелија сперматогенезе са великом ефикасношћу.

Основе

Техника прати оснивање Романовских мрља, у којима кисела бојила имају селективни афинитет за основне ћелијске компоненте, а киселе компоненте привлаче основне мрље.

Објашњено на други начин, и ћелијске структуре и боје имају позитивне или негативне електричне набоје; попут одбијања набоја, а различити набоји привлаче.

На примјер, основне боје попут метилен плаве боје су позитивно набијене и привлаче их негативно набијене структуре. Због тога ова боја мрља језгре богате ДНК и РНК које имају негативно наелектрисане фосфатне групе.

Такође су обојене грануле сегментираних базофила и цитоплазме мононуклеарних белих крвних ћелија које садрже РНА.

Исто тако, кисело бојило носи негативан набој, због чега се веже на позитивно наелектрисане структуре попут еритроцита и гранула сегментираних еозинофила. Што се тиче гранула сегментираних неутрофила, ове фиксирају обе боје.

Разне боје

У овој техници, комбинација реакција коегзистира између ортохроматских и метахроматских боја. Ортохроматика (еозин и метилен плави) веже се на ћелијску структуру за коју су повезани и даје стабилну боју која не варира.

С друге стране, метахромати (деривати метилен плавог азура А и азурног Б-а) варирају своју оригиналну боју након што се додају одређеној структури, па чак могу бити и разне нијансе.

Коначно, корак који предузима раствор Маи Грунвалд захтијева присуство воде, јер без тога боја ће продријети у структуре, али се неће учврстити. Да би се то догодило, боја мора постати поларна или јонизовати и на тај начин бити у стању да се исталожи и везати за сродне структуре.

Техника

материјали

- Клизне слајдове.

- Мостови бојања.

- Решење Маи-Грунвалд.

- Гиемса мрља.

- Дестилована вода.

Може Грунвалд обојати концентровани раствор

0,25 г еозин-метилен плаве боје (мрља према Маи Грунвалд) мора се извагати и растопити у 100 мл метанола. Затим се препарат меша током 1 сата и остави да се одмара 24 сата. На крају времена се филтрира.

Да би се применила техника, Маи Грунвалд боја мора се разблажити на следећи начин: за 200 мл разблажене боје измерити 30 мл концентрованог раствора, додати 20 мл пуфер-раствора и 150 мл дестиловане воде подешене на пХ 7,2-7,3 . Касније се меша и филтрира.

Гиемса концентрат за мрље

0,5 г азурно-еозин-метилен плаве боје (мрља према Гиемса) мора се извагати, растворити у 50 мл метанола и 50 мл глицерина додати смеши.

Да бисте извршили технику, разблажите 1:10 са пуфер раствором и оставите да се одмара 10 минута. По потреби се може филтрирати.

Припрема пуферског раствора при пХ 7,2

Треба их измерити:

- 40 мг калијум ди-хидроген фосфата (КХ2ПО4).

- 151 мг ди-натријум хидроген фосфата 12-хидрата (На2ХПО4).

Оба једињења су растворена у 100 мл воде.

Поступак бојења мрља крви или коштане сржи

Постоје два начина: класични и брзи.

Класични режим

1. Покријте мрље 2 до 3 минуте разблаженим раствором Маи-Грунвалд.
2. Оперите са пунираном дестилованом водом да бисте уклонили претходни раствор.
3. Прекријте истим пуферисаним раствором за прање и оставите 1 минут. Идеја је да се претходна боја фиксира на структуре и да су у исто време ћелије хидриране.
4. Додајте 12 капи разблажене Гиемса тинктуре у пуферисану воду и промешајте да се меша и хомогенизује. Оставите да одстоји 15 до 20 минута.
5. Оперите брисе водом са пуњеном дестилованом водом и ставите да се осуши на ваздуху.
6. Усредсредите и прегледајте обојене ћелије под светлосним микроскопом помоћу циља 40Кс. По потреби се може користити 100Кс.

Брзи режим

1. Прекријте размазани разређени мајем Грунвалд флеком 1 минут.
2. Оперите пуферисано дестилованом водом.
3. Прекријте пуханом водом и оставите да одстоји 1 минут.
4. Додајте разређену Гиемса мрљу и оставите 5 минута.
5. Оперите са пуњеном дестилованом водом и оставите да се осуши на ваздуху.

Овде описане технике су смернице, али треба узети у обзир да се поступци и времена бојења разликују у зависности од комерцијалне компаније која дистрибуира реагенсе. Препоручљиво је да следите кораке које стриктно налажу свака комерцијална кућа.

Техника бојања размаза сперматичне течности

1- Прекријте мрља танким слојем раствора Маи Грунвалд током 4 минуте.

2- Уклоните боју и исперите дестилованом водом.

3- Ставите слој разблажене Гиемсе (1:10) у дестиловану воду на 15 минута.

4- Уклоните боју и исперите дестилованом водом.

5- Оставите да се осуши и посматрајте под микроскопом.

Очекиване боје с Маи Грунвалд Гиемса флеком

Важне спецификације

Техника захтева да реагенси и раствори за прање имају пХ подешен на 7,2 -7,3, тако да афинитети боја за ћелијске структуре не буду искривљени и очекивана коначна боја не варира.

Апликације

Ову технику користе клиничке лабораторије за бојење периферне мрље крви и коштане сржи, пресеке ткива и цитологије.

У хематолошком пољу, ова техника је од виталног значаја за проучавање абнормалности ћелија у погледу облика, величине и броја. То је веома драгоцено средство за дијагностику одређених болести, попут леукемије и анемија.

Поред тога, од изузетне је користи за тражење паразита у хематолошким (Пласмодиум сп и Трипаносома црузи) или хистолошким (Леисхманиас сп) областима.

Вагинална цитологија

Када се ради о вагиналној цитологији, ова техника је посебно повољна за посматрање Трицхомонас вагиналис. Ово је важан налаз, будући да његово присуство симулира карцином ин ситу слике који касније нестају када се паразит елиминира.

Узорак сперме

Ово је идеално средство за проучавање узорака сперме, јер пружа драгоцене информације о квалитету сперме.

Подаци које нуди углавном се односе на број и морфологију, као и са пратећим ћелијама које могу бити присутне и које су од виталног значаја, као што су клице, леукоцити и епителне ћелије.

Овом анализом могуће је описати абнормалности које су уочене код сперме у глави, врату, средњем делу и главном делу.

Поред тога, могу такође да помогну да се прикажу случајеви хемоспермије (присуство црвених крвних зрнаца у сперми) и леукоспермије или пиоспермије (повећан број леукоцита у семену).

Референце

1. Цостамагна С, Прадо М. Валидација свежег теста, мрља Грунвалд-Гиемса и Грама и култура подлога за дијагнозу Трицхомонас вагиналис. Параситол. 2001; 25 (1-2): 60-64. Доступно на: сциело.
2. Мерцк КГаА Лабораторија. Мај Грунвалд еозин метилен плави за микроскопију.
3. "Мрља од мај-Грунвалд-Гиемса." Википедија, Слободна енциклопедија. 15 новембар 2018, 14:37 УТЦ 8 јануар 2019, 04:29: ен.википедиа.орг
4. Панреац Лабораторија за стаклене хемикалије. Реагенси за хистолошке технике, хематологију и микробиологију. Доступно на: глассцхемицалс.цом
5. Ретамалес Е, Манзо В. Препорука за мрље на крвним мрљама да бисте прочитали хемограм. Национална и референтна биомедицинска лабораторија. Институт за јавно здравље Чилеа.
6. Сарабиа Л. Спермиограм према критеријумима ВХО. Развојни програм анатомије и биологије. Медицинска школа. Универзитет у Чилеу. Доступно на: пп.центрамерица.цом