НЕГАТИВНО БОЈЕЊЕ: ОБРАЗЛОЖЕЊЕ, ТЕХНИКА, ПРЕДНОСТИ И НЕДОСТАЦИ - БИОЛОГИЈА - 2025

Негативна обојење је метод специјалног бојења да истакне присуство капсуле у неким микроорганизмима , углавном Стрептоцоццус пнеумониае, Клебсиелла пнеумониае и Цриптоцоццус неоформанс-, из клиничких узорака или чистих култура.

Директни узорак који се обично користи за наношење негативног бојења је цереброспинална течност. Ова техника представља брзу алтернативу за претпостављену дијагнозу менингитиса, посебно Цриптоцоццус неоформанс.

А. Зубни каменац обојен индијском мастилом, Б. Цриптоцоццус неоформанс вар гатти слабо је инкапсулиран као што се јавља у природи, користећи нигросин. Ц. Цриптоцоццус неоформанс вар гатти са густом капсулом која се налази у његовом паразитском облику, користећи нигросин. Д. Цриптоцоццус неоформанс са мало разблаженом индијском мастилом. Гиселл Куинде, са Викимедиа Цоммонс / ЦДЦ, преко Викимедиа Цоммонс / Фотограф: Добављачи садржаја: ЦДЦ / Др. Леанор Халеи, путем Викимедиа Цоммонс

Исто тако, ова мрља се може нанети и на испљувак и стерилне течности уопште, као и на сојеве добијене из младих чистих култура. Ова техника користи нигросин или индијску тинту за своје извршавање; према томе, примјена је врло једноставне и јефтине методологије која у кратком времену пружа информације од велике дијагностичке вриједности.

У том смислу, свака лабораторија је способна да изведе обојење. Наравно, лабораторија мора имати компетентно особље, способно да препозна изолиране или пупољане Цриптоцоццус неоформанс квасце и разликује их од леукоцита и артефаката које узорак може имати.

Основе

Нигросин и Индија мастило раде на сличан начин; према томе, било која од две супстанце се може користити наизменично.

Ова техника се назива негативно бојење, јер делује супротно од осталих техника бојења. При томе остаје оно што није тражено од структуре која се тражи или коју жели видети; то јест микроорганизми.

Стога се бојење темељи на бојењу дна мрље тамном бојом. У овом сценарију, капсулиране структуре ће се истакнути светлом или безбојном бојом.

Генерално, квасци су блистави, окружени бистрим ореолином који одговара капсули. То се дешава зато што су индијска тинта и нигросин супстанце које не могу да продре у полисахарид који чини капсула живих микроорганизама.

Вриједно је напоменути да друге структуре које могу бити присутне у директном узорку, попут леукоцита или црвених крвних зрнаца, не продиру ни у једну.

Међутим, ако су микроорганизми мртви, боја може продријети унутар њих, тако да је и ово обојење корисно за процену одрживости микроорганизама.

Техника

материјали

Нигросине

Нигросин дугује своје име црној боји коју има. То је синтетичка супстанца која се добија загревањем мешавине органских једињења - таквих као нитробензин, анилин и анилин хидрохлорит - користећи катализатор (гвожђе или бакар) у поменутој реакцији.

Кинеска мастила

Кинеска мастила је супстанца коју углавном користе Азијци за писање, прављење уметничких дела и једнобојно сликање. Веома је популаран у кинеској култури.

Добија се од масти са лигњама помешаног са прашканим угљем, производом спаљивања стабала са ниском смолом.

Такође га је могуће припремити од чађи из спаљивања угљоводоника (биљних уља), заједно са протеинским желатином који му даје праву конзистенцију како би се избегло таложење честица угљеника.

Спецификације за узорковање

- Не захтева пост.

- Узорак ЦСФ, испљувак или стерилни течни узорак мора да садржи најмање 1 мл запремине и мора се одмах пренети у лабораторију на собној температури.

- ЦСФ и стерилне узорке течности мора узети специјални лекар.

- Такође може бити чиста култура сумњивог соја повезаног са горе поменутим патогенима.

Извођење технике директним узорцима

- Узорци се морају центрифугирати, супернатант се одбацује и узима талог.

- Кап центрифугираног материјала (седимента) и кап индијске мастила или нигросина ставе се на чисти тобоган.

- Треба га добро измешати и прекрити покривачем, чиме ће се кап ширити као танки филм без преласка преко ивица.

- Након тога се препарат монтира на микроскоп.

- Ако је препарат превише таман, може се разблажити водом.

Извођење технике са сојевима из културе

- Веома мали део младе културе узима се иглама за сејање и раствара се у капи мастила из Индије претходно стављеној на чисту стакалу.

- Покривач се поставља на врх.

- Примећује се у микроскопу у 10Кс, а потом и у 40Кс.

Такође можете да растворите део колоније у дестилованој води, а одатле попијете кап и помешате је са индијском мастилом. На овај начин препарат неће бити толико густ, да би омогућило посматрање структура изоловано; ако има гужве, то се неће добро приметити.

Друга методологија је следећа:

- Ставите кап културе суспензије на један крај клизача.

- Ставите кап нигросина на исти крај и измешајте.

- Помоћу другог тобогана, узорак ширите као да ствара хематолошки брис.

- Оставите да се осуши и посматрајте под микроскопом.

Микроскопско посматрање

Прво морате да се фокусирате са циљем 10Кс да бисте имали широк поглед на поље. Након тога треба потражити постоје ли јасни размаци; ако их има, фокусирајте 40Кс да бисте видели детаље.

Предност

- То је лако извршити.

- То је јефтина техника.

- Ова метода не захтева да се мрља фиксира на топлоту или са хемикалијама; стога се микроорганизми посматрају без изобличења.

- Свежи препарат није потребно сушити, па се може приметити одмах, брзо стварајући резултате.

Недостатак

Једном састављени, свежи препарати се морају одмах посматрати; ако се оставе да се осуше, више их није могуће посматрати и мора се поставити нова.

Бојење ткива мастилом Индије

Друга функција коју индијска тинта може да испуни је у патолошким лабораторијама. Ово се примењује на хируршки извађеним узорцима ткива како би се обележиле ресекционе маргине тумора.

Означено ткиво је прскано сирћетном киселином. То делује као мордант и спречава испадање мастила када се ткиво подвргне рутинској преради препарата за биопсију.

Поступак се састоји од купања ткива у алкохолу и ксилелу, а затим намочењем у парафински восак. Ово обележавање води патолога када посматра ткиво, указујући на то где се налазе хируршка ресекција или друга тачка интереса.

Референце

1. «Нигросина». Википедија, Слободна енциклопедија. 11 сеп 2017, 22:46 УТЦ 6 јануар 2019, 16:56: ен.википедиа.орг
2. "Кинеска мастила". Википедија, Слободна енциклопедија. 1 окт 2018, 03:08 УТЦ. 6. јануар 2019, 18:20: ес.википедиа.орг/
3. Силва Л, Силва Ц, Фернандез Н, Буено Ц, Торрес Ј, Рицо М, Мациас Ј и сарадници. (2006). Радно особље аутономне заједнице Ектремадура. Специфични дневни ред Том ИВ. Редакција МАД. Севиља-Шпанија, стр. 211-212.
4. Силва М, Гарциа М, Цорралес Ј, Понце Е. (2006), специјалиста лабораторијских техничара, Галицијска здравствена служба (СЕРГАС). Обим специфичног дневног реда теме 2. Редакција МАД. Севиља-Шпанија, стр. 79-80.
5. Форбес Б, Сахм Д, Веиссфелд А. 2009. Микробиолошка дијагностика Баилеи & Сцотт. 12 ед. Аргентина. Редакција Панамерицана СА