БАИРД ПАРКЕР АГАР: ОСНОВА, ПРИПРЕМА И УПОТРЕБА - БИОЛОГИЈА - 2025

Агар Баирд Паркер је чврста средње селективног и диференцијал културе. Створен је 1962. године за откривање и бројање стафилокока позитивних на коагулазе (Стапхилоцоццус ауреус).

Састоји се од хидролизата панкреаса казеина, екстракта меса, екстракта квасца, литијум хлорида, глицина, натријум-пирувата, калијум-телурита, агарја и емулзије жуманцета.

Типичне колоније стафилокока ауреуса на агару Баирд Паркер. Извор: Даизи Јохн

Баирд Паркер Агар заснован је на способности С. ауреус да смањује телурит и производи лецитиназу. Обе особине стварају колонију са специфичним карактеристикама за ову врсту. Због тога је веома ефикасан у откривању овог микроорганизма.

Типичне колоније С. ауреус су црне или тамно сиве боје, безбојне обрубе и светлог хала који их окружује, разликујући их од осталих микроорганизама. Овај патоген се може наћи у клиничким узорцима, водама, козметици и сировој или куваној храни.

Његова дијагноза или откривање је од највеће важности, због различитих патологија које производи, као што су тровање храном, синдром скалпане коже, синдром токсичног шока, апсцеси, менингитис, септикемија, ендокардитис, између осталих.

Основе

Храњива моћ

Казеин хидролизат панкреаса, екстракт меса и екстракт квасца извор су хранљивих материја, витамина и минерала неопходних за општи развој микроба, док су пируват и глицин једињења која подржавају специфичан раст Стапхилоцоццус ауреус.

Селективно

Баирд Паркер Агар је селективан јер садржи супстанце које инхибирају раст пратеће флоре, а истовремено промовише развој С. ауреус. Инхибицијска једињења су литијум хлорид и калијум телурит.

Диференцијално

Овај медијум омогућава разликовање С. ауреус од осталих стафилокока негативних коагулазе. С. ауреус има способност редуцирања телурита до слободног металног црног телурума, творећи црне или тамно сиве колоније.

Исто тако, жумањак даје супстратима да докаже присуство ензима лецитиназе и липазе. С. ауреус је позитиван на лецитиназу, па ће се око колоније опазити јасан хало, што указује да је лецитин хидролизован.

У том смислу појава на овом агару сјајних црних или тамно сивих колонија са светлим ореолима око њих указује на присуство С. ауреус.

Ако се формира зона оборина, то показује да је активност липазе. Неки сојеви С. ауреус су позитивни на липазу, а други негативни.

У случају да је С. ауреус позитивна на липазу, уочиће се непрозирно подручје око колоније црне или тамно сиве боје, а затим светлосни ореол због деловања лецитиназе.

Колоније бактерија осим С. ауреус способне да расту на овом медију развијаће безбојне или смеђе колоније без околе.

Атипичне црне колоније такође се могу видети са или без безбојне обрубе, али без светлог хала. Ове колоније не би требало узимати у обзир, не одговарају С. ауреус.

Припрема

Емулзија јајећег жуманца

Узмите свјеже пилеће јаје, добро га оперите и ставите у 70% алкохола на 2 до 3 сата. Јаје се затим асептично отвара и бело се пажљиво одвоји од жумана. Након тога узме се 50 мл жуманца и помеша са 50 мл стерилног физиолошког раствора.

Калијум калијум 1% в / в

Неке комерцијалне куће продају 1% калијум-телурит спреман за употребу. Додаје се медијуму пре него што се чврста материја очврсне.

Да би се овај раствор припремио у лабораторији, 1,0 г калијум-телурита се извагава и раствара у једном делу воде. Након тога, количина воде се напуни до достизања 100 мл. Раствор се мора стерилизовати методом филтрације.

Припрема медијума за културу

Извагати 60 г дехидрираног медијума и растворити у 940 мл дестиловане воде. Оставите да смеша седе око 5-10 минута.

Поднесите топлоту често мешајући медијум да бисте побољшали процес растварања. Доведите да кључа минут. Стерилизирајте у аутоклаву на 121 ° Ц током 15 минута.

Оставите да стоји док не достигне температуру од 45 ° Ц и додајте 50 мл емулзије жуманцета и 10 мл 1% телурита. Добро измешајте и сипајте 15-20 мл у стерилну Петријеву посуду.

Оставите да се очврсне, нарежите на плоче и чувајте у фрижидеру до употребе.

Коначни пХ припремљеног медијума мора бити 6,8 ± 0,2.

Пре сетве узорка, сачекајте да плоча достигне собну температуру. Посадите плоче фиксирањем или површинским сејањем Дригалски лопатицом.

Боја дехидрираног медијума је свијетлосмеђа, а боја припремљеног медијума је свијетло жута.

Употреба

Клинички узорци

Клинички узорци се посеју директно, испуштајући део материјала на један крај плоче и одатле се исцрпљује од исцрпљености. Инкубирајте 24 до 48 сати на 35-37 ° Ц.

Узорци хране

Одвагати се 10 гр узорка хране и хомогенизовати у 90 мл 0,1% воде пептона, одакле се по потреби припрема разблаживање. Инокулирајте плоче у троструком примерку са 0,3 мл припремљених раствора и сетите на површину Дригалски лопатицом. Инкубирајте 24 до 48 сати на 35-37 ° Ц.

Ова методологија омогућава бројање добијених типичних колонија и идеална је када се сумња на присуство С. ауреус изнад 10 ЦФУ по г / мл узорка.

Ако се сумња да је количина С. ауреус мала или постоји пуно пратеће флоре, предлаже се да узорак обогатите сојом у соју триптицазе сојем 10% НаЦл и 1% натријум-пируватом. Ово ће промовисати раст С. ауреус и инхибирати развој пратеће флоре. Мутне епрувете сеју се на агару Баирд Паркер.

Узорци воде

У стерилисаном систему вакуумске филтрације филтрира се 100 мл студијске воде, а затим се 0,4 микрона микропорозна мембрана уклања стерилним пинцетама и поставља на плочу Баирд Паркер. Инкубирајте 24 до 48 сати на 35-37 ° Ц. Ова техника омогућава бројање типичних колонија С. ауреус.

КА

Познати сојеви као што су Стапхилоцоццус ауреус АТЦЦ 25923, Стапхилоцоццус ауреус АТЦЦ 6538, Стапхилоцоццус епидермидис АТЦЦ 12228, Есцхерицхиа цоли АТЦЦ 25922 или Протеус мирабилис АТЦЦ 43071 могу се користити за процену квалитета агента Баирд Паркер.

У случају сојева С. ауреус АТЦЦ, познато је да смањују телурит, а они су позитивни на липазу и лецитиназу. Стога мора постојати задовољавајући развој и расти конвексне колоније са црним средиштем и безбојном обрубом, с непрозирним хало и лаганим вањским ореолом.

Очекује се да ће се С. епидермидис на овом медијуму лоше развијати, са смеђкасто-сивим до црним колонијама, без светлог хала.

За Е. цоли и П. мирабилис очекује се да их тотално или делимично инхибира. У случају раста, смеђе колоније ће се развити без непрозирног подручја или лагане халоге.

препоруке

-Средство не треба да се загрева после додавања телурита и жумањка.

-Припрема емулзије жуманцета и његово додавање у средини је веома рањив корак за контаминацију. Морате бити веома опрезни.

-Ако постоји присуство типичних колонија С. ауреус, то треба потврдити постављањем теста коагулазе на наведени сој.

- Ако постоје сумњиви резултати са коагулазом, требало би поставити друге потврдне тестове.

- Пазите да не збуните присуство типичних колонија С. ауреус са атипичним црним колонијама.

Референце

1. Сарадници Википедије Баирд-Паркер агар. Википедија, Слободна енциклопедија. 15. март 2017., 19:36 УТЦ. Доступно на: википедиа.орг/ Приступљено 18. фебруара 2019. године.
2. БД Лабораториес. Баирд Паркер Агар. 2006. Доступно на: бд.цом
3. Британниа Лабораториес. Баирд Паркер база агар. 2015. Доступно на: британиалаб.цом
4. Францисцо Сориа Мелгуизо Лабораториес. 2009. Баирд Паркер Агар. Доступно на: хттп://ф-сориа.ес/Информ
5. Британниа Лабораториес. Калијум телурит. 2015. Доступно на: британиалаб.цом
6. Аларцон-Лавин М, Оиарзо Ц, Есцудеро Ц, Церда-Леал Ф, Валензуела Ф. Превоз ентеротоксичног стафилокока ауреус типа А, у назофарингеалним мрљама у хранилицама. Рев Мед Чиле 2017; 145: 1559-1564
7. Венецуелански стандард Цовенин 1292-89. (1989). Фоодс. Изолација и набрајање Стапхилоцоццус ауреус. Доступно на: сенцамер.гоб.ве