БИЛЕ ЕСЦУЛИН АГАР: ОБРАЗЛОЖЕЊЕ, ПРИПРЕМА И УПОТРЕБА - БИОЛОГИЈА - 2025

Биле Есцулин агар је селективан и диференцијални средње чврста културу. Користи се као дијагностички тест за утврђивање способности одређеног микроорганизма да расте у медијуму који садржи жуч и такође разграђује глукозидни ескулин на ескулетин и глукозу.

Овај дијагностички тест користи се за разликовање врста рода Стрептоцоццус које припадају групи Д (жучни ескулин позитивни), од осталих група Стрептоцоццус-а који негативно реагују на овај тест.

Плоча са жутим ескулијским агарима, засијана сојем ентерокока (тест позитиван). Извор: Није наведен аутор читљив аутор. Филипињл претпоставља (на основу тврдњи о ауторским правима).

Треба напоменути да неки стрептокок из групе вириданса може хидролизовати ескулин, али нису способни да расту у присуству жучи у концентрацији од 40%, па је у овом медијуму реакција за ову групу негативна.

С друге стране, жучни ескулински медијум је такође користан за дијагнозу врста Листериа моноцитогенес или Аероцоццус сп, јер су ови микроорганизми позитивни на жучни ескулин.

Ескулински жучни агар састоји се од пептона, екстракта меса, оксне жучи, ескулина, гвожђа цитрата, агара и дестиловане воде. Неке комерцијалне куће укључују натријум-азид у саставу медијума.

Медијум се може припремити у лабораторији ако имате сва једињења одвојено или се може припремити из комерцијалног дехидрираног медијума.

Основе

Жућни ескулински медијум садржи пептоне и екстракт меса, оба једињења обезбеђују потребне хранљиве материје за раст микроорганизама.

Такође садржи ескулин; Ово једињење је гликозид настао сједињењем једноставног моносахарида (глукозе) са једињењем које се назива 6,7-дихидроксикармарин или ескулетин (аглукон), повезано ацеталном или глукозидном везом.

Тест се заснива на томе да ли је бактерија способна да хидролизује ескулин. Ако се то догоди, есцулин се разграђује у ескулетин и глукозу. Есцулетина реагује са гвожђем присутним у медијуму, формирајући тамно смеђе, скоро црне смеше.

То значи да феритни цитрат делује као организатор реакције. Ова карактеристика чини Биле Есцулин Агар диференцијалним медијумом.

Са своје стране, жуч је инхибитор који спречава раст неких микроорганизама, према томе, бактерија, пре цепања ескулина, мора бити у стању да расте у присуству жучи. Стога се овај медијум сматра селективним.

Бактерије које се могу развити у овом окружењу су углавном оне које живе у цревном окружењу.

У том смислу, неке комерцијалне компаније додају натријум-азид у медијум да додатно инхибирају раст ентералних Грам негативних бацила, повећавајући селективност медијума за раст стрептокока.

Коначно, агар даје чврсту конзистенцију медијуму, а вода је растварач једињења.

Припрема

Домаћа припрема агар са жучним ескулином

Да одмери:

5 г пептона

3 г екстракта меса

40 г говеђе жучи

1 г ескулина

0,5 г жељезног цитрата

15 г агар

1000 мл дестиловане воде

У случају додавања натријум-азида, измери се 0,25 г / л и дода се смеши.

Отопите компоненте у литру дестиловане воде, загревајте док се једињења потпуно не растопе. Поделите 5 мл у епрувете с навојним поклопцем димензија 16 к 125 мм. Аутоклавите на 121 ° Ц, притиском 15 килограма током 15 минута.

Скините из аутоклава и нагните епрувете на носач, тако да се агар очврсне у широком кљуну флауте.

Чувајте у фрижидеру до употребе. Пре сетве доведите до собне температуре.

Такође се могу припремити плочице са жутим ескулинским агарима; у овом се случају читава смјеса аутоклавира у тиквицу и након тога дистрибуира у стерилним Петријевим посудама. Оставите их да се стврдне и чувајте у фрижидеру.

ПХ медијума мора бити 6,6 ± 0,2.

Припрема жучног ескулинског агарја из комерцијалног медијума

Измерите количину одређену уметком. То може варирати од једне пословне куће до друге. Након тога, поступите према горе описаном поступку.

ПХ медијума треба да буде 6,6 ± 0,2. Боја дехидрираног медијума је светло беж, а припремљени медијум је тамно жута.

Комерцијални жучни ескулински медиј. Извор: Фотографију направио аутор МСц. Мариелса Гил.

Апликације

Медијум жучног ескулина користи се углавном за разликовање Стрептокока из групе Д (жучни ескулин позитиван), од осталих Стрептоцоццус група (негативних ескулина на жуч).

Комбиновањем теста раста хиперсолираног бујона са тестом жучног ескулина може се идентификовати посебна група стрептокока из групе Д названа Ентероцоццус.

Ова посебна група стрептокока припада групи Д горе поменутог рода и они су способни да хидролизују ескулин у присуству жучи као и остали чланови групе Д, али могу да се развијају у хиперсолисаном медијуму (БХИ са хлоридом од 6,5% натријума), својство које разликује.

Стога се стрептококи који хидролизују ескулијску жуч, али не расту у хиперсолираном бујону, називају стрептококи групе Д који нису ентерококи.

Засејано

Медијум инокулирати, по могућности из чистог Тодд-Хевитт 24-сатног бујона.

Додајте 2 капи на површину медијума помоћу Пастерове пипете и раширите је у платинастој петљи.

Инкубирајте 48 сати на 35 ° Ц, док је време инкубације испуњено, може се надгледати да ли постоји позитивна реакција. Ако на крају времена реакција остане негативна, може се инкубирати до 72 сата.

Тумачење

Позитивна реакција : појава тамно смеђе, готово црне боје на кљуну флауте (у случају епрувете са епруветом) или црњење агуса око колоније (у случају теста на плочи).

Негативна реакција : не појави црњење медија или црне боје у мање од половине епрувете после 72 сата инкубације. С друге стране, раст бактерија у медијуму без појаве црне боје треба сматрати негативним тестом.

КА

Да би се проценио квалитет медијума, ентероцоццус фаецалис АТЦЦ 29212 мора бити доступан као позитивна контрола, а сој Стрептоцоццус који не припада групи Д као негативна контрола.

Ограничења

-Медија која не садржи натријум-азид омогућава раст ентеричких Грам негативних бацила. Неки од њих могу поцрнити средину.

- Неке комерцијалне куће додају ниску концентрацију жучи (10%) и због тога се неки стрептокок који не припада групи Д може развити у медијуму и хидролизовати ескулин, што може створити грешке у интерпретацији.

Референце

1. Конеман Е, Аллен С, Јанда В, Сцхрецкенбергер П, Винн В. (2004). Микробиолошка дијагноза. 5. изд. Редакција Панамерицана СА Аргентина.
2. Форбес Б, Сахм Д, Веиссфелд А. (2009). Баилеи & Сцотт Микробиолошка дијагноза. 12 ед. Редакција Панамерицана СА Аргентина.
3. Мац Фаддин Ј. (2003). Биохемијска испитивања за идентификацију бактерија од клиничког значаја. 3. изд. Редакција Панамерицана. Буенос Ајрес. Аргентина.
4. Лабораторија, Британниа. Есцулинска жуч са азидним агарима. 2015. Доступно на: британиалаб.цом
5. "Биле Есцулин Агар." Википедија, Слободна енциклопедија. 22 авг 2017, 17:30 УТЦ 22 април 2019, 17:35 ес.википедиа.орг.
6. Лабораториос Бд. Биле Есцулин Агар Слантс. 2015. Доступно на: бд.цом
7. Неоген Лабораториес. Биле есцулин агар. Доступно на: фоодсафети.неоген.цом