Цетримид агар или цетримид је селективни медијум чврста културу дизајнирана за изолацију Псеудомонас аеругиноса. Заснована је на приказивању производње карактеристичних пигмената ове врсте и начињена је од модификације Тецх агар-а, коју су креирали Кинг, Вард и Ранеи.
Оригинална формула је садржала соли магнезијумовог хлорида, калијум сулфата, дигестију желатине и панкреаса и агар-агар. Модификација формуле састојала се од додавања цетримида (цетил триметил амонијум бромида) и глицерола.
Цетримидни агар засијан Псеудомонас аеругиноса Извор: БиотецхМицхаел, из Викимедиа Цоммонс
Цетримидни агар је користан за микробиолошка испитивања узорака код којих се сумња на присуство Псеудомонас аеругиноса. Треба напоменути да је ова бактерија изузетно важна, јер иако је део нормалне микробиоте у окружењу, често се понаша као опортунистички патоген.
Из тог разлога, један од најчешћих проблема које изазива ова клица су носокомијалне инфекције, односно оне које се јављају у болничком окружењу, а нападају пацијенте који имају депресивни имуни систем.
С друге стране, због афинитета који овај микроорганизам има са влагом, најосјетљивије мете загађења су: потпомогнута опрема за дисање, лекови, небулизатори, извори воде, клима уређаји, дезинфекциона средства, сапунски раствори, раствори за убризгавање, отворене ране , катетери, мокраћне цеви, између осталог.
У том смислу, цетримидни агар је користан за спровођење микробиолошких контрола и култура на претходно поменуте елементе.
Основе
Цетримидни агар заснован је на могућности медијума да подстиче раст П. аеругиноса, подстиче производњу његових пигмената и заузврат инхибира раст других микроорганизама.
Ова својства настају због функције сваке његове компоненте. Присутан желатински пептон служи као извор азота, витамина и минерала. Глицерол или глицерин дјелују као извор угљеника.
Са своје стране, цетримид (цетил триметил амонијум бромид) је супстанца која инхибира раст бактерија осим П. аеругиноса, укључујући и друге врсте из истог рода.
Инхибиција настаје зато што цетрамид делује као катионски детерџент, успевајући да дестабилизује плазма мембрану већине бактерија, осим П. аеругиноса и неких других који успевају да преживе.
Са друге стране, садржи магнезијум хлорид и калијум сулфат. Ова једињења стимулишу фенотипску експресију повезану са способношћу Псеудомонас аеругиноса да производи различите пигменте, укључујући: пиоцијанин, пиовердин, пиррубин, пиомеланин и флуоресцеин. Коначно, садржи агар-агар, који му даје чврсту конзистенцију.
Тумачење
Интерпретација раста добијеног у овом агару се врши на следећи начин:
Посматрање округлих, глатких колонија са правилним ивицама, уз производњу плаво-зеленкастих, зелених, смеђих или црвенкастих пигмената, плус емисије воћног мириса (аминоацетофенона), претпостављени је резултат присуства ове бактерије у поменутом узорку.
Са друге стране, посматрање јарко зеленкасто-жутог пигмента на колонијама указује на П. аеругиноса када је плоча изложена ултраљубичастој светлости.
Флуоресценција колонија П. аеругиноса на цетримидном агару под ултраљубичастом светлошћу.
Треба напоменути да је свака посматрана боја последица стварања одређеног пигмента. Плаво-зелени пигмент одговара производњи пиоцијанина, зелени до пиовердина, црвенкасти до пјорубин, смеђи до пиомеланин, а јарко жуто-зелена флуоресценција под УВ светлошћу до флуоресцеина.
Припрема
Извагати 43 г дехидрираног медијума и растворити у дестилованој води. Додајте 10 мл глицерола. Однети смешу на извор топлоте. Оставите да кључа неколико минута до потпуног растварања.
Аутоклавите на 121 ° Ц током 15 минута. Оставите да стоји и послужите у стерилним Петријевим посудама када је температура око 50 ° Ц.
Оставите да се стврдне, преокрените, наручите у плоче и чувајте у фрижидеру до употребе. Плоче с цетримидним агарима треба извадити из фрижидера унапред до сетве и оставити их да досегну собну температуру.
Коначни пХ медијума треба да буде 7,2 ± 0,2.
Боја дехидрираног медијума је беж, а препарат непрозиран, бел.
Апликације
Све врсте узорака у којима се сумња на присуство Псеудомонас аеругиноса могу се посејати на цетримидном агару. Због тога је користан у свим областима микробиологије (животна средина, индустријска, клиничка, вода и храна).
Од велике је важности анализирати болничко окружење и на тај начин бити у могућности применити корективне мере, јер овај микроорганизам доспева до пацијената преко контаминиране опреме, лекова, раствора и залиха које пацијент користи.
На овај начин микроорганизам може инфицирати доњи респираторни тракт, мокраћни тракт и ране пацијената са имуносупресијом.
Број колонија П. аеругиноса такође се може извршити у микробиолошким тестовима.
Засејано
Цетримидни агар може се користити као примарна култура. Плоча се инокулира на једној од њених ивица, а одатле се исцрпљењем дистрибуира на остатак плоче. Течни узорци се могу површински сејати дригалски лопатицом.
Плоче се инкубирају аеробно на 37 ° Ц током 24 сата инкубације.
Ограничења
- Мали проценат сојева Псеудомонас аеругиносас не производи пиоцијанин, тако да се лажни негатив може тумачити.
-Неке врсте Псеудомонас клиничког значаја су инхибиране у овом медијуму.
-Упркос посматрању карактеристика описаних за Псеудомонас аеругиноса, оне морају бити поткријепљене додатним тестовима идентификације. Тест који не би требало пропустити је тест оксидазе, мора дати позитиван резултат.
-Неке ентеробактерије могу расти у овом медијуму и развити жути пигмент, али разликује се од Псеудомонас аеругиноса по томе што када је плоча изложена ултраљубичастој светлости нема флуоресценције.
- Серратиа марцесценс успева да развије и створи ружичасти пигмент.
-Ако плоче засађене цетримидним агарима буду изложене неко време на собној температури, сојеви П. аеругиноса могу изгубити флуоресценцију која се примећује под ултраљубичастом светлошћу, међутим својство се обнавља ако се поново инкубирају на 37 ° Ц.
КА
За анализу добрих перформанси цетримидног агара могу се користити контролни сојеви, попут: Псеудомонас аеругиноса АТЦЦ 9027, Стенотропхомонас малтофилиа АТЦЦ 13637, Есцхерицхиа цоли АТЦЦ 25922 и Стапхилоцоццус ауреус АТЦЦ 25923.
Очекивани резултати су:
- Добар раст за П. аеругиноса, са плаво-зеленим пигментом и позитивним флуоресцеином.
- С. малтофилија и С. ауреус делимично ће се потпуно инхибирати.
- Очекује се да ће Есцхерицхиа цоли бити потпуно инхибирана.
Референце
- Цаллицо А, Цедре Б, Сифонтес С, Торрес В, Пино И, Цаллис А, Еснард С. Фенотипска и серолошка карактеризација клиничких изолата Псеудомонас аеругиноса. ВацциМонитор. 2004; 13 (3): 1-9.
- Цонда Пронадиса Лабораториес. База цетримидног агара. 2014. Доступно на: цондалаб.цом
- Британниа Лабораториес. Цетримидни агар. 2015. Доступно на: британиалаб.цом
- БД Лабораториес. БД Псеудосел агар (Цетримид агар). 2013. Доступно на: бд.цом
- Францисцо Сориа Мелгуизо Лабораторија, ЦА агар Цетримид. 2009. Доступно на: хттп://ф-сориа.ес