Агар Симмонс цитрат је чврста медиј користи као биохемијских идентификацију тест микроорганизама, нарочито грам - негативни бацили. Оригинални медијум је створио Косер 1923. године.
Медиј Косер-цитрата састојао се од бујона који садржи натријум-фосфат, амонијум-фосфат, моно-калијум-фосфат, магнезијум-сулфат и натријум-цитрат.
А. Дехидрирани комерцијални медијум лимунског сирћета Симмонс Б. Припремљени Симмонс цитратни агар. Извор: А. Фотограф МСц. Мариелса Гил Б. Рото2есдиос, са Викимедиа Цоммонс
Као што се може видети, једини извор угљеника у медијуму је цитрат, а азота је амонијум-фосфат, изостављајући протеине и угљене хидрате као извор ових елемената, они су обично присутни у другим медијумима.
Стога се бактерија инокулирана у овом медијуму може размножавати само ако је способна да преузме угљен из цитрата. Тест је био позитиван ако је у медијуму било замућење, али је имало недостатак што се може појавити неспецифична замућеност.
Овај проблем је решио Симмонс додавањем бромотхимол плаве боје и агара у Косерову оригиналну формулу. Иако је принцип исти, тумачи се различито.
Основе
Неке бактерије имају способност преживљавања у недостатку ферментације или производње млечне киселине, при чему је потребно да добијају енергију употребом других супстрата. У овом тесту једини понуђени извор угљеника је цитрат.
Бактерије које су способне да преживе у овим условима брзо метаболишу цитрат, алтернативно традиционалном путу, користећи циклус трикарбоксилне киселине или циклус ферментације цитрата.
Катаболизам цитрата од стране бактерија укључује ензимски механизам без интервенције коензима А. Овај ензим је познат и по називу цитрицаза (цитратна оксалоацетат-лиза) или цитратна десмолаза. Реакција захтева присуство двовалентног катиона који се у том случају снабдева магнезијумом.
Реакцијом се стварају оксалоацетат и пируват, који затим стварају органске киселине усред алкалног пХ формираног коришћењем извора азота. Ове органске киселине се користе као извор угљеника који ствара карбонате и бикарбонате, додатно алкалишући животну средину.
Режим сетве
Медијум Симмонс цитрата треба лагано инокулирати у рибље месо помоћу равне петље или игле и инкубирати током 24 сата на 35-37 ° Ц. Након времена, посматрају се резултати.
Семе се врши само на површини агара. Не бушите.
Тумачење
Ако медијум остане првобитне боје (зелене) и нема видљивог раста, тест је негативан, али ако медиј постане плав, указује на присуство алкалних производа, што се открива пХ показатељем. У овом случају тест је позитиван.
Цитрате (+) и (-). Извор: МСц Мариелса гил
То се дешава зато што ако бактерија користи угљен цитрата, такође је способна да узме азот амонијум фосфат са којим ослобађа амонијак, алкалишући медијум.
С друге стране, ако се раст бактерија примети у медијуму, али нема промене боје, тест се такође мора сматрати позитивним, јер ако постоји раст, то значи да је бактерија могла да користи цитрат као извор угљеника, иако за сада нема промене пХ (понекад може потрајати).
Ако постоји сумња у интерпретацији коначне боје, може се упоредити са не инокулираном епруветом од цитрата.
Припрема
На литру воде се одмери 24,2 г дехидрираног медијума. Мешајте и оставите да се одмара око 5 минута. Завршите растварање медијума загревањем 1 или два минута, често мућкајући.
Сипајте 4 мл у епрувете и аутоклавите на 121 ° Ц током 15 минута. Када напуштате аутоклав, нагните се уз помоћ носача на начин да се агар очврсне у облику кљуна флауте са малим блоком или дном и више нагиба.
Коначни пХ цитратног медијума је 6,9 (зелена боја). Овај медијум је веома осетљив на промене пХ.
При пХ 6 или нижем, медиј постаје жут. Ова боја се не примећује на тесту на бактерије.
А при пХ 7,6 или више, медијум постаје дубоко пруско плав.
Употреба
Симмонс Цитрате Агар користи се за идентификацију одређених микроорганизама, посебно бацила који припадају породици Ентеробацтериацеае и других бацила који ферментирају без глукозе.
Извор: Конеман Е, Аллен С, Јанда В, Сцхрецкенбергер П, Винн В. (2004). Микробиолошка дијагноза. 5. изд. Редакција Панамерицана СА Аргентина.
Последње мисли
Симмонс Цитрате Медиум је врло деликатан тест, јер се могу добити лажни позитивни резултати ако се направе одређене грешке.
Треба обратити пажњу на следеће:
Иноцулум
Не треба правити веома густ или оптерећен бактеријски инокулум, јер може проузроковати да се на месту сетве развије бакрено жута боја, а да то не утиче на остатак медијума, али може довести до веровања да постоји раст. То не значи позитивност теста.
Такође, густи инокулум може да произведе лажно позитиван резултат, јер органска једињења формирана унутар ћелијских зидова умирућих бактерија могу да ослободе довољно угљеника и азота да би претворили пХ индикатор.
Стога је идеално сејати иглом уместо платинске ручке да не би дошло до сувишног материјала.
Засејано
С друге стране, када се батерија биохемијских тестова за идентификацију дотичног микроорганизма засија, важно је да се цитратни тест први пут инокулише, како би се избегло преношење протеина или угљених хидрата са другог медијума.
Под овом околношћу могуће је добити лажни позитив, јер ће се било која од ових супстанци која се унесе грешком, метаболизирати и проузроковати промену пХ.
Други начин да се избегне преношење супстанци је да се петља добро изгоре и узме нови инокулум између једног и другог теста.
Такође се мора водити рачуна о додиривању колоније да би се извршио инокулум, јер треба избегавати да се део агара извлачи из културе из које долазе бактерије, због горе наведеног.
У том смислу, Матсен, Схеррис и Брансон препоручују разблаживање инокулума у физиолошком раствору пре инокулације цитратним тестом да би се избегло преношење других извора угљеника.
Интензитет боје
Треба узети у обзир да интензитет боје добијене када је тест позитиван може варирати у зависности од комерцијалне куће.
Поред тога, постоје микроорганизми који тестирају позитивност у року од 24 сата, али постоје и други сојеви којима је потребно 48 сати или више да би произвели промену пХ.
Референце
- Мац Фаддин Ј. (2003). Биохемијска испитивања за идентификацију бактерија од клиничког значаја. 3. изд. Редакција Панамерицана. Буенос Ајрес. Аргентина.
- Форбес Б, Сахм Д, Веиссфелд А. (2009). Баилеи & Сцотт Микробиолошка дијагноза. 12 ед. Редакција Панамерицана СА Аргентина.
- Конеман Е, Аллен С, Јанда В, Сцхрецкенбергер П, Винн В. (2004). Микробиолошка дијагноза. 5. изд. Редакција Панамерицана СА Аргентина.
- БД Лабораториес. ББЛ Симмонс Цитрате Агар Слантс. 2015. Доступно на: бд.цом
- Британниа Лабораториес. Симмонс Цитрате Агар. 2015. Доступно на: британиалаб.цом
- Валтек дијагностичке лабораторије. Симмонс Цитрате Агар. 2016. Доступно на: андинамедица.цом.