ЦЗАПЕК АГАР: ОБРАЗЛОЖЕЊЕ, ПРИПРЕМА, УПОТРЕБА И ОГРАНИЧЕЊА - БИОЛОГИЈА - 2025

Цзапек (ЦЗА) је селективни чврста медиј специјално дизајниран за раст сапрофитске бактерије и гљивице. Створили су га ботаничар Фриедрицх Јоханн Франз Цзапек, пољског порекла, и амерички хемичар Артхур Ваиланд Док; због тога је овај агар познат и као Цзапек-Док медијум.

Првобитни медијум је био течан, али је касније додан агар да би постао чврст медијум. Цзапек медијум се састоји од натријум-нитрата, бико-калијум-фосфата, магнезијум-сулфата, калијум-хлорида, железовог сулфата, сахарозе, агара и дестиловане воде.

Цзапек агар А. Аспергиллус параситицус Б. Аспергиллус фумигатус Извор: А. Медмицо / Б. Фото: др Давид Мидглеи. Википедиа.цом

ПХ Цзапековог агара је 7,3, али постоји варијанта у коју се додаје 10% млечне киселине, чији пХ остаје на 3,5. Овај кисели медијум се користи за узгој ацидофилних микроорганизама.

Са друге стране, неке комерцијалне куће модификовале су састав Цзапековог агара мењајући магнезијум сулфат и бико калијум фосфат глицерофосфат; ова модификација спречава да се формира талог магнезијум-фосфата који је примећен уобичајеном формулом. Исто тако, постоји и друга варијанта којој се додаје екстракт квасца.

Коначно, агар Цзапек препоручује Америчко удружење за јавно здравље АПХА за проучавање Ацтиномицетес сп, Аспергиллус сп, Паециломицес сп и Пенициллиум сп. Ове врсте карактеришу микроорганизми из околине и опортунистички патогени.

Основе

Овај медијум садржи сахарозу; овај угљени хидрат служи као извор угљеника, док је натријум нитрат извор азота, али за разлику од других медијума, обезбеђени азот је неоргански.

Из тог разлога, Цзапеков медијум се сматра селективним, јер могу расти само микроорганизми који могу да користе неорганска једињења као једини извор азота.

Као регулациона супстанца осмоларности овог медијума налази се бипоталијум фосфат. Са своје стране, магнезијум сулфат, калијум хлорид и железов сулфат обезбеђују есенцијалне минерале за раст сапрофитних (слободно живи) микроорганизама. Ова формула формира талог магнезијум-фосфата.

Коначно, агар-агар је једињење које пружа чврсту конзистенцију медијуму, а вода је растварач за све компоненте.

Са модификованом формулом Цзапек агар-а, не настаје талог и побољшава перформансе раста неких гљивица.

Изузетна киселост Ацид Цзапек Агар чини га селективнијим средством, омогућавајући само раст ацидофилних микроорганизама, способних да користе неоргански азот. У међувремену, Цзапек-квасни агар побољшава перформансе појединих гљива.

Припрема

Средњи Цзапек-Док

Извагати 49 г дехидрираног медијума за раствор и растворити у дестилованој води. Поднесите топлоту до кључања. Мешајте смешу често док се потпуно не отопи.

-Цзапек Агар Клинови

Растворјену смешу распоредите у епрувете и аутоклавите на 121 ° Ц током 15 минута. Када га уклањате из аутоклава, хомогенизујте пре полагања епрувета и оставите да се учврсти.

-Цапек плоче са агарима

Аутоклавите растворену смешу на 121 ° Ц током 15 минута и оставите да се охлади на 50 ° Ц, хомогенизујте и улијте 20 мл у стерилну Петријеву посуду. Оставите да се стврдне, преокрените и чувајте у фрижидеру до употребе.

ПХ треба да остане на 7,3 ± 0,2. Боја дехидрираног медијума је бела, а припремљени медијум је светло амбер, благо замућен због присуства талога са флокулацијом.

Цзапек медијум киселог пХ

Припремите се као што је већ описано, али додавањем 10 мл стерилне 10% млечне киселине за сваки литар припремљеног медијума. Модификовани Цзапек медијум треба да буде на пХ 3,5 ± 0,2.

Модификовани Цзапек Медиум

Извагати 45,4 г дехидрираног медијума и растворити у 1 литру воде. Остатак препарата је исти као што је горе описано. Боја дехидрираног медијума је бела, а припремљени медијум је белкаста. Крајњи пХ медијума је 6,8 ± 0,2.

Цзапек-квасац мед

Такође се назива и екстракт квасца Агар Цзапек (ЦИА). Садржи елементе класичног Цзапековог агара плус екстракт квасца.

Употреба

Цзапек медијум се користи за тражење сапрофитних микроорганизама у узорцима земље, поврћа, житарица, ваздуха, инсеката, између осталог.

Цзапеков агар на киселом пХ користи се за раст ацидофилних микроорганизама, док је модификовани Цзапеков агар посебно користан за стварање кламидоспора код врста комплекса Цандида албицанс.

Коначно, Цзапек-квасни агар је врло користан за изолацију Аспергиллуса и Пенициллиум-а.

Засејано

-Цзапек агар

За тражење Ацтиномицета у тлу, поступите на следећи начин: узорак се третира фенолизованом водом у трајању од 30 минута, а затим се сипа 1 мл суспензије на Цзапек агар. Инкубирајте на 28 ° Ц током 5 до 7 дана.

За узорке поврћа, житарица и инсеката постављају се директно на агар. Такође можете да направите разблажења и поспите 0,1 мл на површини агара.

-Модифицирани Цзапек агар

За сејање се користи равна петља или игла, импрегнира се брисом и агар се инокулира пробијањем све док не дотакне базу плоче. Инкубирајте током 24 сата на 28 ° Ц и прегледајте под микроскопом изнад и испод плоче да бисте видели да ли су кламидоспоре настале.

Температура и време инкубације

Температура и време инкубације варирају у зависности од типа микроорганизма који треба да буде изолован. Плоче се углавном инкубирају током једне до две недеље у температурном опсегу од 20 до 25 ° Ц.

Међутим, постоје специфични услови за неке сојеве. На пример, већина врста рода Аспергиллус оптимално расте на 30 ° Ц; међутим А. фумигатус расте на 50 ° Ц.

Што се тиче времена инкубације једно или две недеље је нормално, међутим, Цандида албицанс се може развити за 24 до 48 сати на 25 ° Ц.

Карактеристике неких колонија на овом медијуму

-Пенициллиум атровенетум

Развија се у 12 дана инкубације на 27 ° Ц. Њихове колоније су мале (25 мм).

Колоније су баршунасте појаве, са дефинисаном белом обрубом и плаво-зеленом нијансом у центру која се с временом сива. Наличје колоније је наранџасте боје, чинећи средину истом бојом због стварања пигмента.

-Аспергиллус нигер

Развија се са белим до жутим мицелијем и црним спорама.

-Цандида албицанс

Развијају се кремасте светло беж колоније. У модификованом Цзапековом агару ствара кламидоспоре.

-Аспергиллус параситицус

Тамнозелени мицелијум развија се за 7 дана на 25 ° Ц.

КА

Да би се оценио квалитет медијума за културу, могу се засадити сертификовани контролни сојеви, као што су: Аспергиллус нигер МКТА 16404, Цандида албицанс МКТА 10231.

Аспергиллус нигер развије бели до жути мицелијум и црне споре за око 5 дана, док ће Цандида албицанс имати задовољавајући раст за 24 сата инкубације на 25 ° Ц; колоније су крем боје.

Ограничења

Неке студије су откриле да је за опоравак актиномицета агар с најбољим приносом агар декстрозе кромпира, а на другом месту је агар Цзапек, али за опоравак Аспергиллус и Пенициллиум, Цзапек агар је онај који обезбеђује највећу стопу опоравка.

Референце

1. Давила М, ет ал. Антагонистички актиномицети против фитопатогених гљива од пољопривредног значаја. Вл. Мек. Наука. Агриц 2013, 4 (8): 1187-1196. Доступно на: сциело.орг.
2. Луна М, Лозада И, Пшенице А. Изолација сојева Аспергиллус нигер, који производе охратоксин А, у чуваној зеленој кафи (Цоффеа арабица). Вл. Мек. Миц. 2010; 32: 63-68. Доступно на.сциело.орг.
3. Сарадници Википедије Цзапек медиум. Википедија, Слободна енциклопедија. 13. јануар 2019. 20:30 УТЦ. Доступно на: ен.википедиа.орг
4. Цонда Пронадиса Лабораториес. Измењени Цзапек-Док Агар. Доступно на: цондалаб.цом
5. Мицрокит за културу. Цзапек-Док Агар. Диоспонибле у: Медиосцултиво.цом