ЕМБ агар је селективан и диференцијални медиј користи за изолацију чврстог културу грам негативних бацила, посебно Ентеробацтериацеае и других Грам негативних бактерија незахтевне. Познат је и по акрониму ЕАМ, који означава еозин-метилен плаву боју.
Овај медијум су створили Холт-Харрис и Теагуе 1916. Садржи пептон, лактозу, сахарозу, дикалијум-фосфат, агар, еозин, метилен плаву и воду. Веома је сличан МацЦонкеи Агар-у, посебно када се користи Левине-ов Модификовани ЕМБ Агар који не садржи сахарозу.
Метални сјај Есцхерицхиа цоли на ЕМБ агару Извор: Цармен Морено Гонзалез, из Викимедиа Цоммонс
У ствари, свака лабораторија одлучује да ли ће радити са једном или другом, јер оне обављају исту функцију, иако су биохемијски различите.
Чак има исти недостатак као и класични МацЦонкеи агар у погледу све веће производње рода Протеус. Стога, да би се избегла ова појава, концентрација агара може се повећати до 5%.
Основе
Селективно
ЕМБ агар је суптилно селективан јер садржи анилин боје (еозин и метилен плаво), које делују као инхибитори, спречавајући раст већине грам-позитивних бактерија и неких брзих грам-негативних шипки.
Међутим, овај агар има недостатак што неке Грам позитивне бактерије могу одољети присуству инхибицијских супстанци и расти као мале безбојне пунктатне колоније, као што су Ентероцоццус фаецалис и неки стафилокок.
Такође могу нарасти и одређени квасци, као што је комплекс Цандида албицанс, који ће дати врло мале ружичасте колоније. Кламидоспоре се могу чак развити из овог квасца ако је узорак дубоко сетвен.
Диференцијално
С друге стране, ЕМБ агар је такође диференцијални медијум, јер ова обојена боја (еозин и метилен плави) имају својство стварања талога при киселом пХ, па служе као показатељи његове производње.
Дакле, слабо ферментирајуће бактерије лактозе или сахарозе стварају љубичасте колоније у року од 24 до 48 сати. На пример, родови Клебсиелла, Ентеробацтер и Серратиа.
Оне бактерије које снажно ферментирају лактозу, попут Есцхерицхиа цоли или сахарозе, попут Иерсиниа ентероцолитица или Протеус пеннери, формирају талог зеленкасто црне боје, што даје карактеристичан метални сјај код ових врста.
Треба напоменути да ће се, уколико се користи левински медијум ЕМБ (без сахарозе), Иерсиниа ентероцолитица и Протеус пеннери створити бистре колоније.
Бактерије које не ферментирају лактозу или сахарозу негују се присуством пептона који обезбеђују аминокиселине и азот неопходан за раст бактерија и стварају јасне колоније. На пример, родови Салмонелла и Схигелла, између осталих.
Исто тако, важно је напоменути да род Ацинетобацтер може представљати колоније плаве боје лаванде, иако није фермент лактозе или сахарозе, али има својство фиксирања метилен плаве боје на станичној стијенци. То се може догодити и са другим оксидативним бактеријама.
Припрема
Оригинални дехидрирани медијум је светло беж боје.
Да бисте припремили овај медијум за културу, потребно је извагати 36 грама дехидрираног медијума и суспендовати у тиквицу која садржи један литар дестиловане воде.
Након што оставите смешу да се одмара 5 минута, додајте тиквицу извору топлоте, енергично мешајући и непрестано док не прокључа и не отопи се потпуно.
Након тога, већ растворени медијум за културу мора се стерилизовати коришћењем аутоклава на 121 ° Ц током 15 минута.
На крају времена уклања се из аутоклава и оставља кратко да стоји. Затим се, још топло (45-50 ° Ц), 15-20 мл агара сервира у сваку стерилну Петријеву посуду. Средство треба да буде лакмусно плаво.
Након сервирања тањири се оставе мало открити док се агар мало не охлади. Затим се прекрију и оставе да се потпуно очврсну. Након тога се постављају у обрнути држач за тањире и чувају у фрижидеру (8 ° Ц) до употребе.
Овај поступак се пожељно изводи у поклопцу за ламинарни проток или испред Бунсен горионика како би се избегла контаминација.
Важно је имати на уму да ће свака комерцијална кућа навести количину која ће се одмерити за припрему медија за културу.
Коначни пХ медијума мора бити 7,2 ± 0,2
Апликације
Овај медијум се користи за сјетву урина и фекалија или било које врсте клиничког узорка, посебно ако се сумња на присуство нестремних Грам негативних бацила, попут бацила из породице Ентеробацтериацеае, који на овом медију врло добро расту.
Ентеропатогене бактерије рода Схигелла и Салмонелла одликују се својим безбојним или благо житним колонијама.
Између осталог, расту и друге не-лактозне ферментирајуће бациле, попут Аеромонас, Псеудомонас, Ацинетобацтер.
Исто тако, овај медијум је веома користан у микробиолошкој анализи хране и воде, јер је идеалан за потпуну потврдну фазу одређивања колиформи, односно за потврђивање присуства Е. цоли из мутних ЕЦ бујона из од највероватније технике бројања (МПН).
КА
Да би се проверило да свеже припремљени медијум за културу добро функционише, контролни сојеви се могу засадити да се примете карактеристике колонија и провери да ли дају како се очекује.
За то се могу користити сојеви АТЦЦ или добро идентификовани сојеви Е. цоли, Ентеробацтер аерогенес, Клебсиелла сп, Салмонелла типхимуриум, Схигелла флекнери, Псеудомонас аеругиноса и неке грам-позитивне бактерије, као што је С. ауреус.
Очекује се да ће Е. цоли створити добро развијене плаво-црне колоније са зеленим металним сјајем. Док би Ентеробацтер аерогенес и Клебсиелла сп требало да дају добро развијене плавкасто-црне слузоконије.
Са друге стране, Салмонелла типхимуриум и Схигелла флекнери морају да развију велике колоније, безбојне или са благом јантарном бојом.
Коначно, род Псеудомонас аеругиноса расте као безбојне колоније неправилне величине, док грам-позитивне бактерије треба потпуно инхибирати или ријетко расти са врло малим колонијама.
Последње мисли
Понекад стерилизација доводи до смањења метилен плаве боје, показујући средње наранџасту боју. Да би метилен плава оксидирала и поврати љубичасту боју, мора се лагано мешати док се боја не добије.
Такође, након стерилизације, боја се може исталожити, па је треба добро измешати пре него што послужите Петријеву посуду.
Референце
- Цамацхо А, Гилес М, Ортегон А, Палао М, Серрано Б и Велазкуез О. 2009. Технике микробиолошке анализе хране. 2нд ед. Хемијски факултет, УНАМ. Мексико.
- Царранза Ц, Леон Р, Фалцон Н, Неуманн А, Кромм Ц. Карактеризација и дистрибуција потенцијално патогених сојева Есцхерицхиа цоли изолованих од пилића-броилера из перадарских фарми у Перуу. Рев. инвестига. ветеринар. Перу 2012 23 (2): 209-219. Доступно на: сциело.орг.
- Лабораториос Цонда СА еозин и метилен плави агар. 2010. Доступно на: цондалаб.цом
- Британниа Лабораториес. Левине ЕМБ (са еозином и метилен плавим) 2011. Доступно на: британиалаб.цом
- БД Лабораториес. Агар БД ЕМБ (Еосин метилен плави агар), модификован. 2013. Доступно на: бд.цом
- Конеман Е, Аллен С, Јанда В, Сцхрецкенбергер П, Винн В. (2004). Микробиолошка дијагноза. (5. изд.). Аргентина, уредништво Панамерицана СА
- Форбес Б, Сахм Д, Веиссфелд А. 2009. Микробиолошка дијагностика Баилеи & Сцотт. 12 ед. Аргентина. Редакција Панамерицана СА