Агар Ендо или Ендо медијум је чврста медиј, диференцијални и са извесним степеном селективности културе. Оригиналну формулу креирао је Ендо 1904. године како би разликовао ферментацију лактозе од не-ферментацијских бактерија. У почетку је дизајниран за изолацију Салмонелла типхи, али касније се циљ овог медија усмерио у потрагу за колиформама.
Принцип Ендо Агара је остао, али његова формулација је доживела безброј промена током година. Тренутно се медијум састоји од пептичног варења животињског ткива, лактозе, дикалијум хидроген фосфата, натријум-сулфита, основног фуксина и агара.
О: Виргин Ендо Агар Б: Семе Ендо Агар, у средини агара можете приметити метални сјај соја Е. цоли. Извор: А: Стролцх1983 / Б: ЛенкаМ
Главна употреба медијума била је повезана са изолацијом и диференцијацијом грам негативних бацила који припадају породици Ентеробацтериацеае и другим блиским породицама.
Дуго се користила за откривање колиформних узорака у узорцима воде, млека и хране, али данас су употребу овог медијума раселили други са сличним функцијама. Међутим, неке микробиолошке лабораторије користе овај агар за изолацију Ентеробацтериацеае из узорака клиничког порекла.
Основе
Ендо агар садржи пептоне који служе као извор аминокиселина, азота, угљеника и енергије, неопходне за раст незахтевних микроорганизама.
Са друге стране, благо селективан карактер агара је обезбеђен додатком натријум-сулфита и базног фуксина; обе компоненте делимично или у потпуности инхибирају раст већине грам-позитивних бактерија.
Диференцијални карактер даје присуство ферментирајућег угљеног хидрата, који је у овом случају лактоза и базични фуксин, који такође служи као показатељ пХ.
Грам-негативне бактерије које расту на овом агару и способне су да ферментирају лактозу формираће јаке ружичасте колоније; као патогномонија Есцхерицхиа цоли формирање тамноцрвених колонија са иридесцентним зеленкастим металним сјајем. То је због велике производње киселина из ферментације угљених хидрата.
Треба напоменути да и медиј око колоније такође претвара јаку ружичасту боју. Док ферментација без лактозе Грам негативне шипке формирају бледо ружичасте колоније сличне средњим или безбојним.
Дикалијум хидроген фосфат уравнотежује пХ медијума, а агар је компонента која даје чврсту конзистенцију.
Припрема
Ендо агар
Извагати се 41,5 г дехидрираног медијума и растворити у 1 литру дестиловане воде. Загревајте смешу уз често мешање док не дође до потпуног растварања медијума. Стерилизујте у аутоклаву на 121 ° Ц, притиском од 15 лб, током 15 минута.
Када је извадите из аутоклава, оставите да се охлади на температуру од приближно 45-50 ° Ц, промешајте смешу да се хомогенизује пре послуживања. Сипајте 20 мл у стерилну Петријеву посуду.
Оставите да се тањири очврсну, преокрените и чувајте у плочи или омотајте тамним папиром пре него што га чувате у фрижидеру. Веома је важно заштитити припремљени медијум од директне светлости. Најбоља пракса је да припремите тачан износ који ће вам требати.
Ако се чувају у фрижидеру, плоче треба оставити да се загреју пре употребе.
ПХ медијума треба да буде између 7,2 и 7,6, а боја припремљеног медијума је бледо роза.
Варијанта М-Ендо агар
Постоји још једна верзија Ендо агара (м-Ендо) која следи формулу МцЦартхија, Деланеиа и Грассо-а, која садржи више једињења и варира у облику препарата.
Ова варијанта садржи: лактозу, триптозу, ензимски варење казеина, ензимски варење животињског ткива, натријум хлорид, калијум фосфат калијум, натријум сулфит, екстракт квасца, монобазични калијум фосфат, базични фуксин, натријум деоксилат, лаурил сулфат натријум и агар.
У овом случају, 51 г дехидрираног медијума се изваже и суспендује у 1 литру дестиловане воде која садржи 20 мл етанола.
Загревајте мало мешајући док се медијум потпуно не растопи. Не би требало да се прегрева и не треба да се аутоклавира. Једном када је смеша хомогена, послужите у стерилним Петријевим посудама и оставите да се очврсне.
Употреба
У неким се земљама још увек користи укупни и фекални колиформ у узорцима хране и воде, посебно присуство Есцхерицхиа цоли као главног показатеља фекалне контаминације.
М-Ендо Агар препоручује Америчко удружење за јавно здравље (АПХА) за надгледање и контролу програма дезинфекције и пречишћавања отпадних вода, као и за процену квалитета воде за пиће.
Најчешће коришћена метода је мембранска филтрација, након што је узорак обогаћен лаурил сулфатном бујоном у трајању од 2 до 4 сата.
Такође се може користити као замена за ЕМБ агар у микробиолошкој анализи хране и воде помоћу вероватније технике бројања (МПН), тачније у потпуној потврдној фази за потврђивање присуства Е. цоли из облачних ЕЦ бујона.
КА
Познати или сертификовани контролни сојеви се посеју за процену квалитета припремљене шарже Ендо агар.
Међу сојевима који се могу користити у ову сврху су: Есцхерицхиа цоли АТЦЦ 25922, Есцхерицхиа цоли АТЦЦ 11775, Ентеробацтер цлоацае АТЦЦ 13047, Клебсиелла пнеумониае АТЦЦ 13883, Салмонелла типхимуриум АТЦЦ 14028, Схигелла флекнери АТЦЦ 12022, Протеус мирацалЦЦТЦЦЦ 1415, Протеус мирацалисцус АТЦЦ 12022, Протеус мирацалЦЦТЦЦЦ 1415, 1115 .
Сојеви су засијани исцрпљењем и инкубирају се на аеробиози током 24 сата на 37 ° Ц.
Очекивани резултати су:
- За Есцхерицхиа цоли: јаке црвене колоније, с металним сјајем.
- За Е. цлоацае и К. пнеумониае колоније би требале бити ружичасте мукоиде.
- У случају С. типхимуриум, С. флекнери и П. мирабилис, колоније су обично бледо розе или безбојне.
- Коначно, очекује се да ће Е. фаецалис бити делимично инхибиран, па његов раст мора бити слаб са врло малим, јаким ружичастим колонијама.
Ограничења
-Ендо медијум има малу селективну снагу, па је могуће да неки Грам позитивни микроорганизми, попут стафилокока, ентерокока, па чак и квасца, могу расти.
-Остали бацили који не припадају породици Ентеробацтериацеае могу се развити у овом медијуму, попут Псеудомонас сп и Аеромонас сп. Карактеристике ових сојева су безбојне неправилне колоније.
-Овај припремљени медијум је врло осетљив на светлост, па продужено излагање њему погоршава систем индикатора, неповратно оштећујући медијум.
- Компоненте овог медијума се сматрају канцерогеним, па треба избегавати директан контакт.
- Дехидрирани медијум је врло хигроскопан и мора се чувати у оригиналној амбалажи на собној температури, добро затворен и у сувом окружењу.
Референце
- БД Лабораториес. Ендо Агар 2013. Доступно на: бд.цом
- Неоген Лабораториес. М Ендо Агар. Доступно на: фоодсафети.неоген.цом
- Ендо Агар Википедија, Слободна енциклопедија. 7 сеп 2017, 08:27 УТЦ 28 фебруар 2019, 22:55 Доступно на: ен.википедиа.
- МерцК Лабораторија. Ендо агар. 2019. Доступно на: мерцкмиллипоре.цом
- Лабораторији техничког листа М –Ендо Агар ЛЕС. 2015. Доступно на: лиофилцхем.нет