ЛИА (ЛИЗИН ГВОЖЂЕ) АГАР: ОСНОВА, ПРИПРЕМА И УПОТРЕБА - БИОЛОГИЈА - 2025

Агар ЛИА (Лизин Гвожђе) је биохемијски тест се користи за идентификацију бактерија из фамилије Ентеробацтериацеае. Овај медијум су креирали Едвардс и Фифе, на основу Фалкокове формуле.

Првобитно је овај тест био јуха која садржи пептоне, екстракт квасца, глукозу, Л-лизин, бромокресол љубичасту и дестиловану воду. Едвардс и Фифе додали су агар-агар, железов амонијум цитрат и натријум тиосулфат.

Позитиван и негативан тест за лизин декарбоксилацију. Извор: Својства фотографија и дијаграма аутора маг. Мариелса гил

Тест се у основи састоји од доказивања присуства ензима лизин декарбоксилаза, способног да реагује са карбоксилном групом аминокиселине Л-лизина. Деаминација аминокиселине може се такође догодити због присуства ензима лизин деаминаза.

Поред тога, композиција медијума показује способност неких бактеријских рода да производе водоник сулфид. Коначно, такође је могуће посматрати стварање или не гаса у медијуму.

Основе

Пептони и екстракт квасца

Као и већина медијума културе, Лизин Гвозден Агар садржи компоненте које обезбеђују извор хранљивих материја неопходних за раст бактерија. Ове компоненте су представљене пептонима и екстрактом квасца.

Глукоза

Исто тако, овај агар садржи глукозу као ферментабилни угљени хидрат. Познато је да све бактерије из породице Ентеробацтериацеае ферментирају глукозу.

Овај корак је пресудан, јер ће бити одговоран за закисељавање медијума, што је суштински услов да ензим ликаркарбоксилаза - ако постоји - делује на његов супстрат.

У неким бактеријским родовима може се посматрати производња гаса услед ферментације глукозе.

Плин се евидентира када долази до премештања агара у епрувети, остављајући празан простор на дну епрувете или преломом медијума у ​​два или више делова.

Л-лизин

Једном када се лизин декарбоксилира, формирају се диамин (кадаверин) и угљен диоксид.

Декарбоксилација се јавља у присуству коенцим пиридоксал фосфата. Ова реакција је неповратна.

ПХ индикатор (бромокресол љубичаста)

Све промене пХ које настају у медијуму различитим реакцијама откривају се љубичастим бромокресолским индикатором пХ.

У том смислу, када долази до закисељавања, медиј постаје жут, а када долази до алкализације, медијум се враћа првобитној љубичастој или љубичастој боји.

Када долази до деаминације лизина услед присуства ензима лизин деаминаза, на површини се формира црвенкаста боја, типична за родове Протеус, Провиденциа и неке врсте Морганелла.

То је због чињенице да се током процеса деаминације формира алфа-кето-угљенска киселина, која реагује са амонијум цитратом у присуству кисеоника, изазивајући горе поменуту боју.

Фертилан амонијум цитрат и натријум тиосулфат

С друге стране, бактерије које производе хидроген сулфид ће доказати присуством натријум тиосулфата (извор сумпора) и гвожђе амонијум цитрат, који је програмер Х ₂ С.

Бактерије које имају ензим тиосулфата редуктазе имају способност да делују смањујући натријум-тиосулфата поклон, формирајући сулфит и хидроген сулфид (Х ₂ С).

Последњи је безбојни гас, али када реагује са сољу гвожђа, формира железов метални сулфид, који је нерастворљиво једињење (видљив црни талог).

Међутим, способност да формира Х _2. С овим медијумом није баш поуздан, јер неке лизин декарбоксилаза негативне бактерије способне да произведу Х ₂ С неће формирати црну талог, као киселости медијума умеша. Због тога се препоручује проверити са другим медијумима који садрже гвожђе.

Тумачење теста

Декарбоксилација лизина

Епрувете треба очитати после инкубације од 24 сата, јер у супротном постоји ризик од погрешног тумачења реакције, пријављивања лажних негатива.

Мора се имати на уму да ће прва реакција бити ферментација глукозе, па ће све епрувете након 10 до 12 сати пожутети.

Ако се на крају времена инкубације (24 сата) примети жута позадина са љубичастом или љубичастом површином, реакција је негативна. Љубичаста боја површине одговара алкализацији медијума употребом пептона.

Позитивна реакција је она код које су дно и површина цеви потпуно љубичасте боје, односно враћа се првобитној боји.

Према томе, ко одређује позитивност теста је основа или позадина медијума. Ако имате сумње у боју, може се упоредити са инокулираном цевком ЛИА.

Деаминација лизина

Епрувета која показује размножавање лизином имаће црвенкасту боју боје боје и жуту (киселинску) позадину, или ће цела цев имати црвенкасту боју боје.

Ова реакција се тумачи као негативна на декарбоксилацију лизина, али позитивна на деаминацију лизина.

Ова реакција је дефинисана и интерпретирана на плочи.

Производња водоник сулфида (Х

Позитивна реакција је примећена појавом црног преципитата у целости или делу медијума. Обично између ивице конуса и базе.

Ако се талог појави у цевици, неће открити остале реакције које се јављају у средини.

Запис резултата

Када се интерпретира тест, резултати се бележе на следећи начин:

Прво бевел чита, затим дно или блок, затим производња Х ₂ С, и коначно производњу гаса.

Пример: К / А + (-). Ово значи:

• К: Алкални оквир (љубичаста боја)
• О: Кисела позадина (жута), тј. Негативна реакција декарбоксилације и негативна деаминација.
• +: Производња водоник сулфида
• (-): Без гаса.

Припрема

Извагати 35 г дехидрираног медијума гвозденог агар лизина и растворити га у литру дестиловане воде.

Загревајте док се агар потпуно не растопи, па то оставите да вре неколико минута, често мешајући. 4 мл медијума распоредите у 13/100 епрувете са памучним поклопцима.

Стерилизирајте у аутоклаву на 121 ° Ц током 15 минута. Уклоните га из аутоклава и оставите да стоји под углом тако да постоји дубока основа и кратки конус.

Чувати у фрижидеру 2-8 ° Ц. Оставите је да се загреје пре сетве бактеријског соја.

Боја дехидрираног медијума је беж, а припремљени медијум је црвенкасто љубичаста.

Крајњи пХ припремљеног медијума је 6,7 ± 0,2

Средство постаје жуто при пХ 5,2 или мање, а љубичасто је код пХ 6,5 и више.

Апликације

Овај тест, заједно са другим биохемијским тестовима, користи се за идентификацију бацила из породице Ентеробацтериацеае.

Медијум се засијава равном петљом или иглом, раде се једна или две пробоје на дну цеви, а затим се површина медијума у ​​цик-цаку.

Инкубирајте 24 сата на 35-37 ° Ц у аеробиози. Ако је потребно, инкубирајте наредна 24 сата.

Користи се углавном за разликовање врста Цитробацтера од негативних лактозе од Салмонеллас сп.

Извор: Конеман Е, Аллен С, Јанда В, Сцхрецкенбергер П, Винн В. (2004). Микробиолошка дијагноза. 5. изд. Редакција Панамерицана СА Аргентина.

Референце

1. Мац Фаддин Ј. (2003). Биохемијска испитивања за идентификацију бактерија од клиничког значаја. 3. изд. Редакција Панамерицана. Буенос Ајрес. Аргентина.
2. Форбес Б, Сахм Д, Веиссфелд А. (2009). Баилеи & Сцотт Микробиолошка дијагноза. 12 ед. Редакција Панамерицана СА Аргентина.
3. Конеман Е, Аллен С, Јанда В, Сцхрецкенбергер П, Винн В. (2004). Микробиолошка дијагноза. 5. изд. Редакција Панамерицана СА Аргентина.
4. Британниа Лабораториес. Лизин гвоздени агар. 2015. Доступно на: британиалаб.цом
5. БД Лабораториес. ББЛ Лисине Ирон Агар Слантс. 2007. Доступно на: бд.цом
6. Валтек Лабораториес. Средња ЛИА 2009. Доступно на: андинамедица.цом