МУЕЛЛЕР ХИНТОН АГАР: ОСНОВА, ПРИПРЕМА И УПОТРЕБА - БИОЛОГИЈА - 2025

Муеллер Хинтон агар није селективан, чврсти хранљивој подлози се састоји од меса инфузије, Пептон киселина казеина, скроба, агар и дестиловане воде. Овај медијум омогућава одличан раст микроба за већину брзо растућих бактерија.

Првобитно су је креирали Јохн Ховард Муеллер и Јане Хинтон ради изоловања храњивих бактерија као што су Неиссериа гоноррхоеае и Неиссериа менингитидис. Међутим, због својих карактеристика, испоставило се да је идеалан за проучавање осетљивости на антибиотике, што даје поуздане и поновљиве резултате.

Антибиограми (Муеллер Хинтон агар). Извор: Др Грахам Беардс из ен.википедиа

Због тога је Муеллер Хинтон агар медиј културе прихваћен од стране Института за клиничке и лабораторијске стандарде (ЦЛСИ) и Европског комитета за тестирање осјетљивости на антимикробне сврхе, за обављање теста осјетљивости на антимикробне твари дискусијском методом Кирби диска и Бауер.

Основе

Будући да је неселективни хранљиви медијум, изврстан је за раст већине патогених бактерија.

С друге стране, његов једноставан састав чини да се материје лако дифузују на њима, што је суштинска карактеристика за тест осетљивости методом диск дифузије.

Друга његова карактеристика је да садржи малу количину инхибитора, што омогућава ефикасну процену сулфонамида, триметоприма и тетрациклина.

Међутим, треба имати на уму да медиј мора испуњавати одређене услове да би се осигурало његово правилно функционисање, укључујући:

Подешавање пХ, дубине агара и одговарајуће концентрације тимина, тимидина, Ца ⁺⁺ , Мг ⁺⁺ и Зн ⁺⁺ .

Такође морате знати да је методологија стандардизована и због тога морају бити испуњени сви параметри, као што су:

Концентрација инокуулума, концентрација и очување дискова са антибиотицима, постављање одговарајућег броја дискова на агар, удаљеност између једног и другог диска, стратешки пласман одређених антибиотика, атмосфере, температуре и времена инкубација.

Припрема

Извагати 37 г дехидрираног медијума Муеллер Хинтон и растворити у 1 литру дестиловане воде. Загревајте медијум уз мешање да би се помогло растварању. Прокухајте 1 минут.

Аутоклав се стерилизира на 121 ° Ц током 15 минута. Када се уклања из аутоклава, тиквицу треба ставити у водену купељ на 50 ° Ц да се охлади. Сипајте 25 до 30 мл у стерилну Петријеву посуду пречника 10 цм.

Плоче требају бити просјечне дебљине 4 мм (идеално), допуштено је распон од 3-5 мм.

Ако је пожељно припремити агар крви користећи Муеллер Хинтон агар као базу, сипајте 5% стерилну и дефибринирану јањећу крв пре послуживања на тањире.

Коначни пХ медијума би требао бити између 7,2 и 7,4.

Уложите и чувајте у фрижидеру, до употребе. Пре употребе оставите да тањир дође на собну температуру.

Боја припремљеног медијума је светло беж.

Апликације

Користи се за обављање теста антибиотика или осетљивости на најбрже растуће не захтевне патогене.

Ако је агар допуњен крвљу, користи се за примену антибиограма захтевних микроорганизама као што су: Стрептоцоццус пнеумониае, Хаемопхилус сп, Неиссериа менингитидис, између осталих. Такође се користи за изоловање Легионелла пнеумопхила.

Антибиограмска техника

Пре спровођења антибиограма мора се припремити бактеријски раствор еквивалентан 1,5 к 10 ⁸ ћелија.

За то се узму 3 до 4 колоније чисте културе и суспендирају у соју са триптицазом од соје или у бујону Муеллер Хинтон, инкубирају 2 до 6 сати, а концентрација се подеси стерилним физиолошким раствором, упоређујући то са стандардом Мац Фарланда од 0,5%.

Ако су захтевни микроорганизми, колоније се могу суспендовати директно до концентрације од 0,5% Мац Фарланда. Након тога, Муеллер Хинтон плоча посеје се брисом импрегнираним припремљеним бактеријским раствором.

Да бисте то учинили, брис је уроњен у раствор, а затим се вишак течности уклања притиском на зидове цеви. Одмах након тога, брис се провлачи по целој површини, не остављајући ниједно место нетакнутим, затим се плоча лагано окреће и поново семе. Операција се понавља још 2 пута.

Оставите да стоји 10 минута, а затим уметните дискове са антибиотицима стерилним пинцетама, остављајући међу њима размак од 24 мм. Након што сваки диск ставите на агар, притисните сваки диск лаганим пинцетама како бисте били сигурни да се добро лепе.

Једном када је процес завршен, плоча је инвертирана и инкубирана на 35-37 ° Ц у аеробиози 16 до 18 сати. Ако се ради о захтевном микроорганизму, може заслужити микроаерофилију, а ако антибиограм садржи дискове оксацилина, требало би их прочитати после 24 сата.

Равнатељ се користи за мерење пречника сваког халоа. Резултати се бележе у мм. Накнадно, добијене вредности се повезују са табелама тачака пресека које је објавио тренутни ЦЛСИ приручник.

Мерење хало инхибиције. Извор: УСЦДЦП, Пикнио.цом

Извештавајте као осетљиви (С), средњи (И) или отпорни (Р), овисно о случају.

Антибиотици се бирају према изолованом микроорганизму и врсти инфекције коју производе.

Понекад се мора имати на уму стратешки пласман антибиотика да би се открили фенотипски обрасци резистенције.

Стратешко постављање диска на Муеллер Хинтон агар

За ентеробактерије диск од клавуланске киселине треба поставити против цефалоспорина треће и четврте генерације. Проширење у облику јајета указује да је сој бета-лактамаза проширеног спектра (ЕСБЛ). То значи да пацијент не треба да се лечи цефалоспоринима.

Фенотипска експресија продукције бета-лактамазе проширеног спектра (ЕСБЛ) у соју Есцхерицхиа цоли. Извор: Фотографију направио аутор МСц. Мариелса гил

Код стафилокока је важно да се диск еритромицина или азитромицина постави испред диска клиндамицина (Д-тест).

Отпоран хало у еритромицину и спљоштавање у халоу клиндамицина указује да сој поседује резистентност на клиндамицин (ИЦР). То значи да лечење клиндамицином неће бити ефикасно.

Да би се пронашли индуцибилни сојеви АМП Ц код Ентеробацтериацеае и неких не-ферментирајући Грам-негативни штапови, дискови тазобактан цефтазидиме, цефокситин или пиперацилин су окренути према имипенем диску, на удаљености од 27 мм.

Исплован хало у једном од дискова окренут имипенему указује на присуство индуцибилног АМП Ц.

За тражење конститутивног Ц-АМП, 500 µг клоксацилин диск суочен је с цефтазидимом (30 µг) и цефотаксимом (30 µг), на удаљености од 25 мм. Проширени хало у било којем од цефалоспорина указује на позитивност.

Цлокациллин диск се такође може заменити диском од 9 мм филтера Вхатман Но. 6, импрегнираног фенил борном киселином (400 µг) са растојањем од 18 мм. Тумачи се исто као и претходна.

Коначно, за испитивање производње металобеталактамаза, посебно код Псеудомонас аеругиноса, користи се диск импрегниран са 10 ул етилендиаминетеросирћетне киселине (ЕДТА 750 µг) и тиогликолне киселине (СМА 300 µг), који је суочен са имипенемом и дисковима меропенема на удаљености од 15 мм.

Тест је позитиван ако постоји ширење хало имипенема или меропенема према ЕДТА / СМА диску. Овај резултат мора бити потврђен модификованим Ходге тестом.

Овај поступак се састоји од инокулације соја Есцхерицхиа цоли АТЦЦ 25922 на плочицу Муеллер Хинтон. Диск имипенема је постављен у средину плоче, а затим се од диска до обода ствара трака са сумњом на сој П. аеругиноса. На плочу се могу тестирати до 4 соја.

Тест ће бити позитиван ако постоји зона изобличења имипенем хало око стрије.

Узроци погрешних резултата

- Лоше сачувани антибиотски дискови могу произвести лажну отпорност. На пример, оксацилински диск је веома рањив на промене температуре.

-ПХ пХ медијума испод наведеног (киселог) ствара мање халоге у аминогликозидима и макролидима (ризик од лажне резистенције), а веће халогене у пеницилину, тетрациклини и новобиоцину (ризик од лажне осетљивости).

-Ако је пХ изнад наведеног (алкални) горе описани ефекти су обрнути.

-Медија са високим концентрацијама тимина и тимидина има утицај, значајно смањујући хало инхибиције сулфонамида и триметоприма.

-Високе концентрације калцијума и магнезијума стварају лажну отпорност аминогликозида, полимиксина Б и тетрациклина против сојева Псеудомонас аеругиноса.

-Неке концентрације калцијума и магнезијума производе лажне осетљивости на аминогликозиде, полимиксин Б и тетрациклине против сојева Псеудомонас аеругиноса.

- Присутност цинка утиче на резултате карбапенемских дискова (имипенем, меропенем и ертапенем).

- Дебљина медија испод 3 мм ће произвести лажне резултате осетљивости, док дебљина изнад 5 ће произвести лажни отпор.

-Мобилизацијом дискова у антибиограму настаће деформисани ореол, јер је пражњење антибиотика тренутно.

- Веома слаби инокулуми утичу на резултате, јер неће бити једноликог или спојеног раста у агару, што је неопходан услов да се могу мерити инхибициони халои, поред чињенице да халоси могу да дају већи од нормалног.

-Незаузето оптерећен инокула може да створи халове мање од нормалних.

-Не поштујући удаљеност између дискова проузрокује да се један хало преклапа са другим и они се не могу тачно прочитати.

- Инкубација са ЦО ₂ повећава величину халоа тетрациклинских и метицилинских дискова.

-Икубирање на температурама испод 35 ° Ц ствара веће ореолице.

- Додавањем крви смањује се величина халогена сулфа.

Ограничење

Осетљивост антибиотика која је демонстрирана на антибиограму против микроорганизма (ин витро) није гаранција да ће деловати ин виво.

КА

Да бисте знали да ли медијум садржи адекватну количину тимина, мора се засадити сој Ентероцоццус фаецалис АТЦЦ 29212 и подложити испитивању осетљивости на триметоприм сулфаметоксазол (СКСТ), мора дати хало једнак или> 20 мм да би био задовољавајући.

Референце

1. "Муллер-Хинтон агар." Википедија, Слободна енциклопедија. 16 новембар 2018, 12:23 УТЦ 27 јануар 2019, 04:22
2. Форбес Б, Сахм Д, Веиссфелд А. (2009). Баилеи & Сцотт Микробиолошка дијагноза. 12 ед. Редакција Панамерицана СА Аргентина.
3. Цона Е. Услови за добру студију осетљивости агар дифузијским тестом. Рев Цхил Инфецт, 2002; 19 (2): 77-81
4. Дифцо Францисцо Сориа Мелгуизо Лабораторија. Муеллер Хинтон агар са 5% овчје крви. 2009. Доступно на: хттп://ф-сориа.ес
5. БД Муеллер Хинтон ИИ Агар Лаборатори. 2017. Доступно на: .бд.цом
6. Британниа Лабораториес. Муеллер Хинтон агар. 2015. Доступно на: британиалаб.цом
7. Конеман Е, Аллен С, Јанда В, Сцхрецкенбергер П, Винн В. (2004). Микробиолошка дијагноза. 5. изд. Редакција Панамерицана СА Аргентина.
8. Мартинез-Ројас Д. беталактамазе типа АмпЦ: Опште и методе за фенотипску детекцију. Влч. Мицробиол. 2009; 29 (2): 78-83. Доступно на: сциело.орг.
9. Перозо А, Цастеллано М, Линг Е, Арраиз Н. Фенотипска детекција металобеталактамаза у клиничким изолатима Псеудомонас аеругиноса. Касмера, 2012; 40 (2): 113-121. Доступно на: сциело.орг.