АГАР КРУМПИРА ДЕКСТРОЗЕ: РАЦИОНАЛНОСТ, ПРИПРЕМА И УПОТРЕБА - БИОЛОГИЈА - 2025

Кромпир декстроза агар је медиј, солид нон - селективни нутриент цултуре. У њему могу расти бактеријске и гљивичне врсте, али његова употреба је посебно индицирана за изолацију влакнастих гљивица и квасца. Такође је познат и као ПДА медијум за енглески израз Потато Дектросе Агар.

Посебно је корисно за изоловање фитопатогених гљивица, односно оних које делују на биљке. За сјетву узорака из зараженог поврћа могу се користити друга средства попут Сабоурауд агар или малта-агар, међутим, за рутинску употребу, агар кромпир-декстрозе се преферира због добијања веће спорпорације.

Аспергиллус нигер и Синемас на агару кромпира декстрозе. Извор: Алектревелиан 006 на енглеском Википедији / Јоселројас

Такође се користи за бројање гљивичних колонија у узорцима козметике, фармацеутских производа и неке млечне хране. Исто тако, погодно је за сјетву узорака отпадака коже у потрази за дерматофитима, који у овом медију врло добро расту, развијајући своје карактеристичне пигменте.

Средство за кромпир декстрозу је врло једноставан и лак медијум за припрему у лабораторији. Садржи, као што му име каже, инфузију кромпира, декстрозе и агар-агарја. Поред тога, могу се додати инхибиторне супстанце ради спречавања раста бактерија и повећања селективности за гљивичне врсте.

Основе

Акт кромпир декстрозе је медијум за културу који обезбеђује хранљиве елементе неопходне за развој влакнастих гљивица и квасца.

Комбинација инфузије кромпира са глукозом пружа савршен извор енергије за задовољавајући раст гљивица. Док је агар онај који даје конзистенцију медијуму.

Сам медијум не инхибира раст бактерија, стога је неселективни медијум. Да би био селективан, потребно му је додавање инхибицијских супстанци попут винске киселине или антибиотика.

Припрема

-Домаћа (некомерцијална) припрема агар кромпир декстрозе

Петри посуде

Припрема се на следећи начин:

На првом месту, кромпир се добро опере, уклањајући земљиште које поседује. Сече се на танке кришке са свиме и љуском. 200 грама кромпира се извагава и куха у литри дестиловане воде пола сата.

На крају, филтрирајте или проциједите сав приправак преко гаће.

Добијена течност се допуњује дестилованом водом до литра. Додајте 20 г агар-агара и 20 г декстрозе у инфузију, добро измешајте и аутоклавите на 121 ° Ц, под притиском од 15 килограма током 15 минута.

Оставите на 50 ° Ц и послужите у стерилним Петријевим посудама. Припремљени тањири чувају се у фрижидеру.

Клинови

Такође се могу припремити клинови агрума од кромпира декстрозе.

У овом случају пре стерилизације у аутоклаву 12 до 15 мл медијума се стави у епрувете, касније се аутоклавира и када се оставе леже на посебним носачима док се не очврсне. Чувати у фрижидеру.

Медијум остаје на пХ од 5,6 ± 0,2, међутим, неке лабораторије додају 10% винску киселину да би снизиле пХ на 3,1 ± 0,1 како би инхибирале раст бактерија.

У том истом смислу, друге лабораторије радије додају антибиотике да би биле селективне за узгој гљивица и спречиле раст бактерија.

-Комерцијална припрема агента кромпир-декстрозе

Одмјерити 39 г комерцијално доступног дехидрираног медијума и растворити у литри дестиловане воде. Оставите да одстоји 5 минута.

Смеша се загрева уз често мешање, док се потпуно не растопи. Након тога се стерилизира у аутоклаву на 121 ° Ц током 15 минута.

Плоче или клинови се могу припремити. Поступак као што је горе описано.

ПХ остаје на 5,6 ± 0,2. Ако се жели пХ од 3,1, пре сервирања у тањире треба додати 14 мл стерилне 20% винске киселине.

Сирови медијум је беж, а припремљени медијум је светло јантарне боје са благо замућеним или опалесцентним изгледом.

Апликације

Поступак за сјетву биљних узорака на агар кромпир декстрозе

-За мрље лишћа

Листови се секу на комаде.

У чашу од 50 ццм са 50% алкохола ставите делове лишћа (обојене и здраве делове), да дезинфикујете површину 20 до 30 секунди. Баците алкохол и додајте 20% натријум хипохлорита 40 до 50 секунди ако су танки листови и повећајте време на 80 секунди ако су кора и трупци.

Одбаците натријум-хипохлорит и узмите дезинфициране комаде стерилним пинцетама и ставите их на површину медијума (највише 10 комада). Подесите датум и инкубирајте на 20-30 ° Ц.

-За воће и гомоље

Ако је плод меснат, отворите плод захваћен гљивицом и извадите комаде стерилним скалпелом, и са оболелих и здравих делова, и ставите их на површину агара.

Ако је воће цитрусно, попут лимуна или поморанџе, мора се отворити и сејати семе.

Када је површина плода погођена и примећене споре, идеално је употреба решеткасте методе на тањиру; Ово се састоји од додиривања спора стерилисаном и охлађеном лопатицом у облику слова „Л“, а затим прављење цик-цака 2 до 3 пута на агару.

-За зрно

Дезинфицирају се како је описано у лишћу и касније се стављају на агар.

-За гране и стабљике

Кора се оструже и касније се одвоји здрави и болесни делови и сеје директно на агар.

Засејане плочице се инкубирају аеробно на 20-30 ° Ц током 72 сата.

Поступак за сјетву узорака коже, косе или ноктију на агару кромпира декстрозе

Узорковање треба обавити сечивом скалпелом број 11, било да се режу погођене длаке, љускице коже или нокти у потрази за дерматофитима. Пре узимања узорка, површину треба дезинфиковати 70% алкохола.

-Узорак коже

Код љускавих лезија ивицу лезије треба исећи, јер је гљива тамо вероватнија.

Код ексудативних лезија узорак се узима сувим или влажним брисом. Сејте одмах на агар кромпир-декстрозе или на агар Сабоурауд. Избегавајте превозна средства.

Друга метода узорковања је кроз технику квадратних тепиха Мариат и Адан Цампос. У том случају захваћено подручје се трља 5 пута комадом стерилне вуне за накнадно узгој.

Узорак се може сместити директно у медијум за културу.

-Узорак косе

У зависности од патологије, захваћени део може бити одсечен или искоријењен. Поставите узорак у медијум за културу.

- Узорак за нокте

Специфични део погођеног нокта може се стругати или сећи. Зависиће од врсте повреде.

Резати узорак на комаде од 1 мм пре сетве да би се повећала вероватноћа контакта гљивице са медијумом за културу.

Поступак идентификације

Колоније добијене на плочи су изоловане у епруветама које садрже агар кромпир декстрозе да би се извршила макроскопска студија колонија (изглед, боја, конзистенција, степен развоја.

Микроскопска студија (посматрање структура и њихових формирања) може се обавити микрокултурама или директно посматрање под микроскопом између клизача и клизача.

Број колонија

Овај медијум се такође може користити за одређивање оптерећења гљивице и квасца присутног у узорцима биљака, хране, козметике или лекова. У ту сврху користи се агар декстрозе кромпира са додатком антибиотика, као што су: (хлорамфеникол, хлоротетрациклин или оба).

Сипајте 1 мл узорка - по могућности разблаженог - у стерилну и празну Петријеву посуду, затим растопите јастучић од агар кромпир декстрозе и оставите да се охлади на 45 ° Ц. Сипати на Петријеву посуду и ротирати док се хомогенизује. Оставите да почива док се не очврсне.

Инкубирајте аеробно на 20-25 ° Ц (плијесни) или 30-32 ° Ц (квасци) током 5 до 7 дана или више, у зависности од врсте гљиве и врсте узорка. Две плоче се могу користити за инкубацију у оба температурна опсега.

Број гљивичних колонија у узорку хране. Агар крумпира декстрозе са додатком антибиотика. Извор: Пкхере.цом фото / 777267

Одржавање сојева гљивица

Агар кромпир-декстрозе може се користити за одржавање одрживих сојева гљивица неколико година.

За то се гљивица узгаја на клиновима агарја декстрозе кромпира и када једном гљива нарасте, прекрива се минералним уљем. Уље треба стерилизовати у аутоклаву 45 минута и имати вискозитет од око 300 до 330 Саиболт. Уље треба бити 1 до 2 цм изнад врха наклона.

КА

Из сваке припремљене шарже узмите 1 или 2 плоче и инкубирајте их на 25 ° Ц током 48 сати или на 20 ° Ц током 96 сати. Добра контрола стерилности је она у којој се не примећује развој колоније.

Такође се могу користити познати или сертификовани контролни сојеви као што су:

Саццхаромицес церевисиае АТЦЦ 9763, Цандида албицанс АТЦЦ 10231, Аспергиллус брасилиенсис АТЦЦ 16404, Трицхопхитон ментагропхитес АТЦЦ 9533. Очекује се добар раст у свим случајевима.

Референце

1. Британниа Лабораториес. Кромпир са глукозним агарима. 2015. Доступно на: британиалаб.цом
2. Неоген Лабораториес. Агар кромпир-декстрозе Доступно на: фоодсафети.неоген.цом
3. Инсумолаб Лаборатори. Агар крумпира декстрозе Доступно на: инсумолаб.цл
4. Форбес Б, Сахм Д, Веиссфелд А. (2009). Баилеи & Сцотт Микробиолошка дијагноза. 12 ед. Редакција Панамерицана СА Аргентина.
5. Цасас-Ринцон Г. Општа микологија. 1994. Друго издање Централног универзитета у Венецуели, издања библиотека. Венезуела Царацас.
6. Ацеитуно М. Процена микробиолошког квалитета у сјени, компактни тип праха националне производне лабораторије, према референтној методи Пхармацопеа Усп 2005. Теза се квалификује за звање фармацеутске хемичарке. Универзитет Сан Карлос из Гватемале.
7. Цуетара М. Обрада површинских узорака. Ибероамерицан часопис за микологију. 2007; пп. 1-12