ТСИ АГАР: ОБРАЗЛОЖЕЊЕ, ПРИПРЕМА И УПОТРЕБА - БИОЛОГИЈА - 2025

ТСИ агар или троструку шећер гвожђе агар је добар медиј који служи као као биохемијски тест за усмеравање иницијалну идентификацију грам негативни бацили. Заснива се на приказивању ферментације присутних шећера и производњи водоник-сулфида и гаса.

Његов састав и основа врло су слични Клиглеровом тесту гвожђа, с разликом што последњи садржи само глукозу и лактозу. Умјесто тога, као што му име каже, троструки шећерни агар са шећером садржи три ферментабилна угљикохидрата: глукозу, лактозу и сахарозу.

Слике ТСИ теста са различитим микроорганизмима А. Есцхерицхиа цоли, Б. Схигелла флекнери, Ц) Салмонелла типхимуриум, Д. Псеудомонас аеругиноса. Извор: Витмадрид, из Викимедиа Цоммонс

Поред тога, ТСИ медијум има четири деривата протеина што га чини врло хранљивим агаром: екстракт квасца, екстракт меса, пептон и протеозни пептон. Садржи и жељезни амонијум сулфат, натријум тиосулфат, натријум хлорид, црвени фенол и агар.

Немогућност микроорганизма да ферментира глукозу присутну у медијуму одмах га искључује из припадности породици Ентеробацтериацеае. Стога је овај тест од пресудне важности за одлучивање којим идентификационим путем треба одредити род и врсту.

Свака лабораторија одлучује да ли да ради са ТСИ агаром или са Клиглер-овим гвожђем.

Основе

Свако од једињења испуњава функцију у медијуму.

Натријум-хлорид и агар

Натријум-хлорид је неопходан за одржавање осмотске равнотеже медијума. Док агар даје чврсту конзистенцију.

ПХ индикатор (црвени фенол)

ПХ припремљеног медијума је избалансиран на 7,3, а пХ индикатор (црвени фенол) пожута испод 6,8. То значи да ће мале количине киселина добијених ферментацијом шећера претворити медијум из црвено-наранџасте у жуту.

Ако не дође до ферментације, настаће алкалинизација медијума коришћењем пептона, претварања из црвено-наранџасте у јаку црвену.

Деривати протеина (екстракт квасца, екстракт меса, пептон и протеозни пептон)

Када бактерије метаболишу протеине присутне у ТСИ агару, настају амини који алкалишу медијум (углавном на нивоу конуса), јер реакцији је потребан кисеоник. Амини претварају оквир у јарко црвену боју.

Али то ће зависити од способности бактерија да ферментирају угљене хидрате или не.

Ферментација угљених хидрата (глукоза, лактоза и сахароза)

Проучавање ферментације шећера може дати неколико слика и свака се различито тумачи. Испитна интерпретација дели микроорганизме у 3 категорије: не-ферментори глукозе, не-ферментери лактозе и ферментори лактозе / сахарозе.

Треба напоменути да је количина глукозе у медијуму ограничена, док је концентрација лактозе и сахарозе 10 пута већа.

Бактерије породице Ентеробацтериацеае и други микроорганизми који ферментирају глукозу почеће да ферментирају овај шећер јер је то најједноставнији енергетски угљени хидрат.

Са друге стране, лактоза и сахароза су сложени угљени хидрати који се морају разградити и претворити у глукозу да би могли да уђу у циклус Ембден-Меиерхоф.

- Микроорганизми који не ферментирају глукозу

Када инокулирани микроорганизам не може ферментирати глукозу, још мање ће моћи ферментирати остале угљикохидрате. Дакле, овде се не формирају киселине, али постоји стварање амина у конусу помоћу пептона.

У овом случају, оквир се претвара у јачу црвену боју, а дно епрувете може остати непромењено или се такође алкализује, остављајући целу цев црвену.

Тумачење: К / К означава алкално нагиб / алкално или неутрално дно

На слици на почетку чланка погледајте слику цеви Д.

Овај резултат указује да микроорганизам не припада породици Ентеробацтериацеае.

- Микроорганизми који не ферментирају лактозу / сахарозу

Ако бактерије могу ферментирати глукозу, али не и лактозу или сахарозу, десиће се следеће:

Бактерије ће конзумирати сву присутну глукозу након отприлике 6 до 8 сати, способне закиселити и зуба и блок; то јест, агар ће потпуно постати жут. Али када се глукоза потроши и лактоза и сахароза не могу да се користе, бактерије ће започети метаболизам протеина.

Овој реакцији је потребан кисеоник, па долази до разградње пептона на површини (конус). Произведени амини алкалишу оклопац претварајући се из жуте у црвену. Ова реакција је доказана после 18 до 24 сата инкубације.

Тумачење: К / А значи алкални конус и киселина.

На слици на почетку чланка погледајте слику епрувете Б.

-Микроорганизми који ферментирају лактозу / сахарозу

Микроорганизми који могу ферментирати лактозу и сахарозу очигледно могу ферментирати глукозу. Након што се потроши минимална количина глукозе у медијуму, формирани пируват почиње метаболизирати да би се формирао киселине кроз аеробни Кребсов циклус, а у периоду од 8 до 12 сати сав медијум ће бити жут.

Ако је бактерија способна разградити лактозу или сахарозу, киселине ће се и даље производити, а након 18 до 24 сата цела цев - конус и чеп - и даље ће жути.

Треба напоменути да се употреба глукозе врши на два начина: један аеробно на конусу цеви, а други анаеробно на дну епрувете.

Тумачење: А / А значи кисело смеђе / кисело дно. Може или не мора имати гас.

На слици на почетку чланка погледајте слику цеви А.

Производња гаса

Неки микроорганизми су способни да стварају гас током ферментације шећера. Гас се у епрувети евидентира притиском који врши у агару. Притисак изазива стварање мехурића или померање агара. Понекад стварање гаса може да ломи медијум.

Важно је да се у време сетве ТСИ медија пробијање врши чисто кроз средиште агара све док не досегне дно. Ако се пробој преусмери према зидовима цеви, може изазвати лажне позитивне резултате у производњи гаса, јер ће изаћи кроз погрешно формиран канал.

За производњу гаса, као и за реакције које се догађају у конусу агара, потребан је кисеоник, па се препоручује да се цев покрије памучним чепом, а ако се користи бакелитна капа, не сме бити потпуно уска.

Производња гаса се наводи као позитивна (+) или негативна (-).

Обрасци формирања гаса. Извор: Шема коју је направио МСц. Мариелса Гил. Извор слике: ВееДуннФлицкр.цом/И_тамбе, преко Викимедиа Цоммонс

Натријум-тиосулфат и обојени амонијум сулфат

Бактерије способне да производе водоник сулфид (безбојни гас) преузимају сумпор из натријум тиосулфата присутног у медијуму. Када Х ₂ С формира, реагује са феро амонијум сулфатом, производећи гвожђе сулфида (видљиво црног талога).

Х ₂ С производња пријављена као позитивни (+) или негативним (-).

На слици на почетку чланка погледајте слику цеви Ц.

Припрема

Извагати 62,5 г дехидрираног медијума са троструким шећером од гвожђа (ТСИ) и растворити у једној литри дестиловане воде.

Загревајте док се агар у потпуности не растопи. Кухајте минуту, често мешајући. 4 мл медијума распоредите у 13/100 епрувете са памучним поклопцима.

Стерилизирајте у аутоклаву на 121 ° Ц током 15 минута. Скините из аутоклава и оставите га да се одмори под углом. Треба водити рачуна да подлога и подлога имају исти размак.

Чувати у фрижидеру 2-8 ° Ц. Оставите је да се загреје пре сетве бактеријског соја.

Боја дехидрираног медијума је светло беж, а припремљени медијум је црвено-наранџаста.

Коначни пХ припремљеног медијума је 7,3 ± 0,2.

Апликације

ТСИ тест се широко користи на нивоу микробиолошке лабораторије. Овај тест је неопходан за усмеравање врсте теста који се мора применити како би се идентификовали род и врста. Његово добро извођење и тумачење може уштедети материјал и рад.

Ако је резултат ТСИ К / К и тест цитокром оксидазе позитиван, зна се да се тестови требају користити за идентификацију не-ферментирајућих Грам негативних штапова, као што су Псеудомонас, Алцалигенес, Ацхромобацтер, Буркхолдериа, између осталих родова. Ако је оксидазна негативна, оријентисана је према родовима Ацинетобацтер, Стенотропхомонас итд.

С друге стране, ако се добије ТСИ А / А или К / А и тест цитокром оксидазе је негативан, што више нитрата редукује на нитрите, ми ћемо бити сигурни да је у питању микроорганизам који припада породици Ентеробацтериацеае. У овом случају ће се пут идентификације фокусирати на специфичне тестове за ову групу бактерија.

С друге стране, ако се добије К / А или А / А слика и тест цитокром оксидазе је позитиван, додатни тестови који ће се саставити усмерени ће на идентификацију ферментирајућих сојева који не припадају породици Ентеробацтериацеае, као што су: Аеромонас, Плесиомонас, Вибрио и Пастеурелла.

ТСИ са хидроген сулфидом, оксидазом негативним, водиће идентификацију следећих родова породице Ентеробацтериацеае: Протеус, Цитробацтер, Едвардсиелла, Леминорелла, Прагиа, Трабусиелла или Салмонелла.

ТСИ са мало или умерено водоник сулфида у алкалном косине са алкалном позадином и позитивном оксидазе ће водити коришћење тестова за идентификацију не-ферментацију Х ₂ С- производећи Грам-негативне шипке, као што Схеванелла путрефациенс.

Коначно, ТСИ се може користити за испитивање производње сумпороводика у Грам позитивним бацилима, посебно када се сумња на Ерисипелотхрик рхусиопатхиае.

Засејано

ТСИ медијум мора бити инокулиран чистим колонијама, изолованим у примарним или селективним културама. Ако је колонија узета из селективних медија који су засијани узорцима мешовите флоре, треба водити рачуна да се узима само са површине, јер одрживи сојеви инхибирани у том медијуму могу постојати у доњем делу колоније.

Због тога се петља никада не сме хладити на селективном медијуму и тада се колонија преузме и инокулира са ТСИ медијумом.

Сијање ће се вршити равном петљом или иглом. Направит ће се пробијање, водећи рачуна да се провуче кроз средину до средине, а затим сејање заврши инокулацијом површине у цик-цак облику. Не радите две пробоје.

Инкубирајте на 37 ° Ц у аеробиози током 18-24 сата. Тумачите у овом тренутку, ни пре ни после.

Ограничења

ТСИ тест треба очитати у року од 18 до 24 сата од инкубације. Читање пре овог времена може дати лажно позитивну ферментацију за А / А. Док након читања, читање након овог времена може створити лажно негативну слику не-ферментера, услед потрошње пептона који алкалишу медијум.

Референце

1. Мац Фаддин Ј. (2003). Биохемијска испитивања за идентификацију бактерија од клиничког значаја. 3. изд. Редакција Панамерицана. Буенос Ајрес. Аргентина.
2. Форбес Б, Сахм Д, Веиссфелд А. (2009). Баилеи & Сцотт Микробиолошка дијагноза. 12 ед. Редакција Панамерицана СА Аргентина.
3. Конеман Е, Аллен С, Јанда В, Сцхрецкенбергер П, Винн В. (2004). Микробиолошка дијагноза. 5. изд. Редакција Панамерицана СА Аргентина.
4. "ТСИ агар." Википедија, Слободна енциклопедија. 10 јул 2018, 08:09 УТЦ. 10 фебруар 2019, 03:33 Доступно на: ес.википедиа.орг
5. Британниа Лабораториес. ТСИ Агар (троструки шећерни агар са шећером). 2015. Доступно на: британиалаб.цом
6. БД Лабораториес. Троструки шећерни агар са шећером (ТСИ Агар). 2003. Доступно на: бд.цом