ВОДА ОД ПЕПТОНА: ОБРАЗЛОЖЕЊЕ, ПРИПРЕМА И УПОТРЕБА - БИОЛОГИЈА - 2025

Пептон Вода је течно обогаћивање медијум, неселективни, углавном користе као разблаживачем узорака хране или других материјала. Овај хемијски медијум са хемијског аспекта је врло једноставан, садржи месни пептон, натријум хлорид и воду.

Има одређену хранљиву вредност, омогућава обогаћивање узорка. Ако постоје злоупотребљене бактерије, овај медиј има моћ да поправи одрживост. Посебно је корисна за опоравак бактерија из породице Ентеробацтериацеае.

Пептоне вода у боцама. Извор: МСц Мариелса гил

У случају опоравка салмонеле, препоручује се употреба варијанте воде са пептином водом; Ово служи као средство за пред обогаћивање узорка, у овом случају садржи друге елементе као што су динатријум фосфат и дикалијум фосфат.

Обично се пептонска вода припрема при неутралном пХ, али постоје и друге варијанте где је неопходно да пХ ​​буде 8,5 ± 0,2 (алкална), јер је бактерија коју треба изоловати алкална, као што је Вибрио колере.

Поред тога, овај медијум се може користити као основни медијум за тестове ферментације угљених хидрата.

Основе

Пептони обезбеђују хранљиве материје потребне за раст бактерија, нарочито азот и кратке ланце аминокиселина, док натријум хлорид одржава осмотску равнотежу.

Надаље, медијум омогућава ширење, хомогенизацију и поправљање бактеријских ћелија које су оштећене индустријским процесима.

Као разрјеђивач је идеалан, ефикасно замјењујући физиолошки раствор (ССФ) или раствор фосфатног пуфера (ПБС).

Раст бактерија је видљив посматрањем његове замућености.

Припрема

Домаћа припрема (није комерцијална)

Измерити 1 г пептона и 8,5 г натријум-хлорида, растворити у 1 литру дестиловане воде. ПХ треба подесити на 7,0. За то се може користити 1Н натријум хлорид.

Припрема помоћу комерцијалног медијума

Одмрзните 15 г дехидрираног медијума и растворите у литру дестиловане воде. Хомогенизирати смешу. Ако је потребно, смеша се кључа 1 минут, како би се помогло потпуно растварање. Послужите у бочицама од 100 мл или епруветама од по 10 мл. Аутоклавите на 121 ° Ц током 15 минута.

Охладите и користите или чувајте у фрижидеру. Крајњи пХ медијума је 7,2 ± 0,2.

Боја дехидрираног медијума је светло беж, а припремљени медијум је светло амберна.

Припрема за ферментационе тестове

Претходном препарату - пре стерилизације - треба додати угљени хидрат до крајње концентрације од 1%, плус Андраде индикатор (кисели фуксин) или фенол црвени (0,018 г / Л). Цеви треба да буду опремљене звоном Дурхам како би се посматрало стварање гасова.

Остале варијанте воде са пептоном

Пуферирана или пуферирана пептонска вода

Садржи ензимски хидролат казеина, натријум хлорида, дихидроген калијум фосфата и натријум хидроген фосфат додекахидрата. Коначни пХ је 7,0 ± 0,2.

За његову припрему изважите 20 г дехидрираног медијума и растворите у 1 литру дестиловане воде. Оставите да одстоји око 5 минута. Загревајте 1 минут док се потпуно не отопи.

Сипајте у одговарајуће тегле по потреби. Стерилизовати помоћу аутоклава на 121 ° Ц током 15 минута.

-Алкална пептонска вода

Измерити 25 г дехидрираног медијума и растворити у 1 литру воде. Поступак као што је горе описано. ПХ се креће од 8,3 до 8,7.

Употреба

Инокуулум се врши постављањем узорка директно.

Користи се за разблаживање узорака, посебно када се сумња да постоји оштећена бактерија. Обично су разблажења 1:10 и 1: 100.

Инкубирајте 24 сата у аеробиози на 35-37 ° Ц.

Узорци столица

За узорке столице за салмонелу препоручује се употреба пуфериране или пуфериране воде као средства за обогаћивање.

Да бисте то учинили, поступите на следећи начин:

Ако се формира столица, узмите 1 г узорка. Ако су течне, узмите 1 мл измета и суспендирајте у епрувети са 10 мл воде са пефтоном. У случају ректалних бриса, материјал који се налази у брису испустите у епрувету са пуферираном пептонском водом.

У свим случајевима, узорак се добро измеша и хомогенизује.

Инкубирајте на 37 ° Ц током 18 до 24 сата. Потом се субкултура у бујон за обогаћивање, као што је сеститни цистински бујон или тетратионати јуха на 37 ° Ц у трајању од 18-24 сата више. Коначно, култивисати у селективним медијима за салмонелу, као што су СС агар, КСЛД агар, Хектоен агар, између осталих.

Узорци хране

Пептоне вода се користи као средство за обогаћивање или као обичан разблаживач, али ако се траже врсте салмонеле, користи се као средство за пред обогаћивање, као што је већ описано.

У храни поступите на следећи начин:

За чврсте хране тежите 25 г узорка, а за течну храну одмерите 25 мл. Поставите наведени део у боце које садрже 225 мл воде пептона. Мешати и хомогенизовати узорак.

Ако се сумња да је оптерећење микробиома велико, може се извршити серијска или децимална разблажења да би се олакшало бројање јединица које формирају колонију (ЦФУ).

Број разблаживања зависиће од врсте узорка и искуства аналитичара.

Ако се, напротив, сумња да је оптерећење микробиома врло мало, није неопходно вршити разблаживања. Након тога, субкултура на селективним медијима.

У случају морске хране, као што су шкољке, рибе, између осталог, у потрази за колерицама Вибрио или другим врстама Вибрио, треба користити воду пептона подешену на пХ 8,5 (алкална пептонска вода).

КА

Из сваке припремљене шарже треба инкубирати једну до две епрувете без инокулације током 24 сата у аеробиози на 37 ° Ц. На крају времена не треба посматрати замућеност или промену боје.

Познати контролни сојеви се такође могу користити за процену њихове ефикасности:

За то се могу користити следећи бактеријски сојеви: Есцхерицхиа цоли АТЦЦ 25922, Есцхерицхиа цоли АТЦЦ 8927, Стапхилоцоццус ауреус АТЦЦ 6538, Псеудомонас аеругиноса АТЦЦ 9027, Салмонелла типхимуриум АТЦЦ 1428, Салмонелла ентеритидис АТЦЦ 13076.

У свим случајевима се очекује задовољавајући развој микроба, што се примећује замућеношћу медијума.

Ограничења

- Дехидрирани медијум је врло хигроскопан, па га треба чувати даље од влаге.

- Средство се не сме користити ако се примети било какво оштећење.

- Дехидрирани медијум за културу треба чувати на температури од 10 до 35 ° Ц

-Припремљени медијум се мора чувати у хладњаку (2-8 ° Ц).

Референце

1. Цамацхо А, Гилес М, Ортегон А, Палао М, Серрано Б и Велазкуез О. Технике микробиолошке анализе хране. 2009, 2. изд. Хемијски факултет, УНАМ. Мексико. Верзија за администратора приручника и докумената (АМиД) Хемијског факултета УНАМ 1. Доступно на: хттп://депа.фкуим.унам.мк
2. Британниа Лабораториес. Водена пептонска вода. 2015. Доступно на: британиалаб.цом
3. Неоген Лабораториес. Пептоне вода. Доступно на: фоодсафети.неоген.цом
4. Британниа Лабораториес. Пептоне вода. 2015. Доступно на: британиалаб.цом
5. Мерцк Лабораториес. Пуферирана пептонска вода. Доступно на: мерцкмиллипоре.цом
6. Цонда Пронадиса Лабораториес. Алкална вода пептона. Доступно на: цондалаб.цом
7. Форбес Б, Сахм Д, Веиссфелд А. (2009). Баилеи & Сцотт Микробиолошка дијагноза. 12 ед. Редакција Панамерицана СА Аргентина.