- Технике изолације микроорганизама
- Огреботине или пруге
- Фузија са медијумом или премазом
- Серијска разблажења
- Поступак обогаћивања
- Јединствена или ексклузивна техника
- Прилагођене технике
- Значај
- Референце
Изолација микроорганизама обухвата скуп техника које се користе за добијање и раздвоји врста микроба интереса из њиховог природног станишта у ин витро станиште. Ове технике су скуп многих основних и потребних алата за микробиолошке студије.
Већина микроорганизама који су познати и које је наука дефинисала су они које је било могуће изоловати и држати у контејнерима, који делом симулирају унутрашња стања места у коме живе.
Типична слика колонија микроорганизама сличних бактеријама изолованих на чврстом медијуму унутар Петријеве посуде (Слика надиа_ил на ввв.пикабаи.цом)
Можда је један од првих људи који су практиковали изолацију микроорганизама био Антон Ван Лееувенхоек (1632-1723), који је сакупљао и изоловао узорке микроба из великог броја места и екосистема да би их пажљиво посматрао под стотинама микроскопа које је он дизајнирао. .
Међутим, тек у време научника Луја Пастера и Роберта Коцха, током 19. века, почеле су се примењивати строге праксе које су служиле за изоловање одређених микроорганизама, а све у циљу да их детаљно проуче. .
За разлику од Лееувенхоека, ови истраживачи су се фокусирали на изоловање дефинисаних врста од осталих врста микроба у окружењу. Поред тога, били су заинтересовани да их сачувају што дуже изван свог природног окружења.
Данас су развијене прецизне технике за изолацију и раст многих различитих микроорганизама који се добијају из скоро било којег окружења на биосфери.
Технике изолације микроорганизама
Све изолације микроорганизама почињу прикупљањем узорка у природи где се налазе микроорганизми који су од интереса. На тим местима могу бити ране у животињским или биљним ткивима, на тлима или супстратима, локвама, морима, површинама попут коже итд.
Узорак се узима додиривањем или наношењем спремника који садржи медијум са одговарајућим захтевима за раст микроорганизама на површини са које се жели изоловати. У овом контејнеру добићете оно што је познато као "култура" микроба.
Генерално, први усев који је добијен из природних станишта несумњиво је „мешовити усев“, односно онај који се састоји од великог броја различитих врста микроба.
Међутим, већина врста микроорганизама може се изоловати једна од друге у лабораторији, желећи добити културе микроорганизама у којима расту само оне интересантне врсте или, другим речима, добити „чисте културе“.
У суштини, поступак који се спроводи ради добијања „чистих култура“ је оно што је познато као „изолација микроорганизама“.
Постоји велики број техника за изолацију микроорганизама, а постоје чак и неке специфичне за одређену врсту микроорганизма. У осталим случајевима, чисту културу је могуће добити само прикупљањем узорка из природне средине.
Међу најчешће коришћене технике изолације за одвајање врста интереса које се налазе у мешовитим културама културе су:
Огреботине или пруге
Можда је ово најчешће коришћена метода за изоловање микроорганизама. Ова техника се састоји од припреме стерилног чврстог медијума са свим храњивим једињењима потребним за раст микроорганизма у стакленој посуди, попут Петријеве посуде.
Помоћу финог инструмента, обично наглашеног, додирује се микроорганизам који се изолише у мешовитој култури, а затим се у стерилном чврстом медијуму врх врха инструмента којим је додиран микроорганизам почиње клизати са стране на страну по целој. регистарске таблице.
То се врши интензивно напред-назад по површини чврстог или агаризованог медијума, као да је цик-цак. Обично се ради све док се не покрије око трећине пречника агара на плочи.
Фузија са медијумом или премазом
За ову методу, разблаживање медијума у коме живе сакупљени микроби се врши до тачке у којој остаје само неколико стотина ћелија за сваки милилитер медијума у коме су разређене.
Из овог разблаживања узме се неколико милилитара и помеша се са медијумом који ће се додати у посуду пре него што се очврсне. Пошто се направи смеша између агаризованог медијума и течног медијума где су микроорганизми, они остају уроњени у медијум и видљиви су само док се не размножавају као колонија.
Како се развијају као колонија, лакше их је раздвојити од осталих микроорганизама другим методама, попут гребања, на пример.
Серијска разблажења
Ова метода се састоји од прављења серијских разблаживања подлоге у којој се налазе микроорганизми. Пример за то су разблажења која су направљена за пречишћавање Лацтоцоццус лацтис или Лацтобациллус ацидопхилус, бактерија одговорних за производњу сира и јогурта.
Отприлике 1 милилитара је узето из епрувете која садржи кисело млеко или претходно ферментирани јогурт и тај се милилитер инокулира у стерилно млеко без микроорганизама. Касније се узима отприлике милилитра поменутог млека и поступак се понови.
То се понавља отприлике три или четири узастопна пута, због чега је врло вероватно да ће се добити Лацтоцоццус лацтис или Лацтобациллус ацидопхилус у медијуму изолованом од контаминаната који могу представљати друге микробе.
Детаљна фотографија локације и типични материјали за изоловање микроорганизама (Слика Синтије Валуцка на ввв.пикабаи.цом)
Поступак обогаћивања
Ова методологија се постиже узгојем микроорганизама у културама са условима који подстичу или олакшавају раст врста које су од интереса и у многим случајевима под условима који инхибирају раст других загађујућих микроорганизама.
Бактерије рода Салмонелла расту у култури која је обогаћена селенитом, пошто ови микроорганизми трансформишу селенит у селен како би га метаболизовали. Селенит у медијуму тешко асимилира храњиве састојке за микроорганизме који нису салмонеле.
Јединствена или ексклузивна техника
Ово је можда најтежа и најмање ефикасна техника изолације микроба. Ово укључује стављање капи медијума (узорка) где су микроорганизми смештени на стерилном покривачу, а затим постављање на станицу микроскопа.
Касније, током посматрања, једна ћелија се уклања стерилном микро-пипетом. Кап се ставља на други стерилни покривач који се инкубира на одговарајућој температури за микроорганизам. Коначно, поново је посматрано под микроскопом да покаже раст.
Ако су нове ћелије нарасле из једне ћелије која је узета на поновном посматрању, додају се у стерилни медијум за добијање потпуно изоловане чисте културе.
Прилагођене технике
На планети Земљи постоји безброј различитих микроба који су разбацани по скоро свим познатим екосистемима. Неки микроорганизми су познати као екстремофили и за њих су потребни јединствени услови за њихов развој и раст.
Ови екстремни услови су и повољни и неповољни за изолацију, јер иако омогућују раст ових микроорганизама, ин витро их је тешко створити.
Значај
Изолација микроорганизама представљала је један од најважнијих напретка у области науке и медицине. Ово је омогућило човечанству да проучи и развије ефикасне третмане против различитих патогена микроба.
Данас је сигурно познато да микроорганизми чине битан део свих екосистема, па постизање изолације неких од њих који имају релативан значај за човека омогућава истраживачима да их интензивно проучавају, како би дубински разумели његову улогу у сваком екосистему.
Референце
- Де Круиф, П. (1996). Ловци на микробе. Хоугхтон Миффлин Харцоурт.
- Лопез, МЈ, Ницхолс, НН, Диен, БС, Морено, Ј., и Ботхаст, РЈ (2004). Изолација микроорганизама за биолошку детоксикацију лигноцелулозних хидролизата. Апплиед Мицробиологи анд Биотецхнологи, 64 (1), 125-131.
- Спигно, Г., Трамелли, Л., Галли, Р., Пагелла, Ц., и Де Фавери, ДМ (2005). Биофилтрација пара дихлорометана: изолација микроорганизама.
- Треснер, ХД, Хаиес, ЈА (1970). Побољшана методологија за изоловање микроорганизама у тлу. Аппл. Енвиронмент. Мицробиол. , 19 (1), 186-187.
- Виллеи, ЈМ, Схервоод, Л., и Воолвертон, ЦЈ (2009). Пресцоттови принципи микробиологије. Бостон (МА): МцГрав-Хилл високо образовање.