ЛАКТОЗИРАНИ ЈУХА: ТЕМЕЉ, ПРИПРЕМА И УПОТРЕБА - БИОЛОГИЈА - 2025

Лактоза чорба је средство за нон - селективној подлози течној култури превасходно користе као као пред-богаћење у изолацију Салмонелла сојева из микробиолошке анализе до прерађене хране, млечних производа или вода. Ово препоручује Међународна комисија за микробиолошке спецификације за храну (ИЦМПФ).

Овај медијум садржи ензимски варење желатине, екстракт меса и лактозу, супстанце потребне за раст бактерија. Даље, лактоза је ферментибилни угљени хидрат, па су је неки од облика колиформа способни разградити производњом гаса.

Лактирани бујони са замућеношћу. Извор: Фотографију направио аутор МСц. Мариелса гил

Из тог разлога, лактазни чорби препоручује Америчко удружење за јавно здравље (АПХА) за претпостављено истраживање укупних и фекалних колиформних бактерија, квалификујући га као одличну алтернативу за замену јуха из триптозе лаурил сулфата у стандардној техници највероватнијег броја (МПН). ), користи се за микробиолошку анализу узорака хране, млека и површинских вода, подземних, рекреативних, кућних и индустријских отпадака.

Основе

За микробиолошку анализу неких узорака, корак претходног обогаћивања је неопходан да би се могао опоравити одређени микроорганизам који може бити у веома малој количини или у неповољним условима који нарушавају или минимизирају његову одрживост.

Такав је случај са осушеном и прерађеном храном, вероватно контаминираном Салмонеллас сп. У тим случајевима, ако су присутне бактерије, претрпеле су физичку и хемијску злоупотребу током процеса производње производа.

На такав начин да су микроорганизми изложени неповољним факторима као што су дехидрација, изложеност инхибиторним или токсичним производима и преклапању насталом присуством других бактерија у већој количини, између осталих.

У том смислу, лактозни бујов има поправљајући ефекат на оштећене структуре микроорганизма, због чега се он опорави и размножава, на начин да се може открити.

Исто тако, лактозни чорб има способност да разблажи инхибиторне супстанце које могу утицати на његову виталност, омогућавајући његов развој. Поред тога, храњиви састав лактозног бујона је стратешки погодан расту Салмонелла сп у односу на друге микроорганизме.

Да би се коначно идентификовала, мора се субкултивирати другим коначним културама.

С друге стране, састав овог медијума такође омогућава откривање микроорганизама који ферментирају лактозу и који производе гас.

Припрема

Да бисте припремили литру лактозне кашике, 13 грама дехидрираног медијума мора се извагати и растопити у 1000 мл дестиловане воде.

Да би се растворио медијум у води, раствор се може мало загрејати, али не превише.

Једном када је хомогена, раствор се припрема на следећи начин: ако се јуха користи за тражење колиформних облика, припрема се сталак за епрувете у који се ставља Дурхамова епрувета за ферментацију наглавачке.

Дурхамова цев је врло важан детаљ, јер ће омогућити откривање формирања гаса, података који имају велику вредност у потрази за колиформама.

Једном када су епрувете спремне, у њих се распршује 10 мл лактозне каше, количина која мора бити довољна да покрије целокупну Дурхам епрувету.

Ако ће се букт лактоза користити као пре-обогаћивач, није неопходно стављати Дурхамову епрувету за ферментацију. У овом случају потребна је већа количина медијума (225 мл) који ће се сервирати у боцама од 500 мл, широких уста и са термо-отпорним вијцима.

Након тога епрувете или тиквице се аутоклавирају на 121 ° Ц током 15 минута.

Медијум мора остати на крајњем пХ од 6,9 ± 0,2 на 25 ° Ц.

Буле се чувају у фрижидеру до употребе.

Пре употребе, бујони се морају довести на собну температуру.

С друге стране, букт лактозе се такође може припремити у двострукој концентрацији.

Неке лабораторије додају бромокресол љубичасти лук лактозе као пХ индикатор, како би показале епрувете у којима је дошло до ферментације лактозе због промене боје. У овом случају, јуха поприми љубичасту боју, а ако ферментација постане жута.

Апликације

У микробиолошким лабораторијама букт лактозе се широко користи, јер је релативно јефтин медијум који нуди поуздане и брзе резултате (24-48 сати).

Може се користити за анализу укупних и фекалних колиформи у храни и води или као бујон за обогаћивање салмонеле.

Пред обогаћивање

Пред обогаћивање је корак пре обогаћивања узорка, што увелико побољшава опоравак бактерија рода Салмонелла у прерађеној храни.

Да бисте то учинили, узорак чврсте хране (25 грама) или течности (25 мл) сеја се у 225 мл лактозне каше, инкубирајући током 24 до 48 сати. Након тога, он ће бити субкултивиран у обогаћеном медијуму, као што је селенитни цистински бујон или тетратионативни јух. Затим пређите на КСЛД и СС селективне медије.

Тотална и фекална колиформна анализа

Одличан је медијум као показатељ фекалне контаминације.

Из тог разлога, лактозни бујоп је идеалан за претпостављену фазу испитивања колиформних облика по методи Највероватнијег броја.

За узорке у којима постоји сумња на велику количину колиформи, мања количина ће се инокулирати (1 мл), док ће се за узорке у којима постоји сумња на мању количину колиформи повећати запремина узорака (10 мл).

За анализу се праве 10 ^-1 , 10 ^-2 , 10 ^-3 разблажења , формирајући батерију од 3-5 епрувета за сваку коришћену концентрацију.

Сваким разблаживањем износе се иста количина у бујон лактозе.

Епрувете се инкубирају током 24 сата. Негативни бројеви се инкубирају током наредних 24 сата.

Интерпретација резултата врши се посматрањем две карактеристике: прва је присуство или одсуство замућености и пошто овај медијум не садржи пХ индикатор, неће бити промене боје.

Други је производња гаса или не. Гас се лако види у Дурхамовој цеви појавом једног или више ваздушних мехурића у њему.

Сматра се позитивним ако се примете обе карактеристике, односно замућеност при производњи гаса. Позитивне епрувете треба поново посијати у потврђујућих медијума (2% Бриљантни зелени лук и ЕЦ бујон).

Контрола квалитета медијума

- Приликом припреме медијума, важно је не заборавити поставити Дурхамсове епрувете, ако је њихова сврха испитивање колиформи.

- Немојте прегревати медијум пре стерилизације.

- Расподелите у епрувети пре стерилизације, никако после.

- Не користите ако је медијум старији од 3 месеца.

- Не користите ако опазите било какве промене уобичајених карактеристика медијума.

- Када припремате шаржу лактозног бујона, тестирајте његов квалитет сетвом познатих сојева попут Есцхерицхиа цоли, Ентеробацтер аерогенес, Цитробацтер фреундии и Клебсиелла пнеумониае. Расте врло добро, уз производњу гаса (позитивна контрола).

- Такође може да укључује Псеудомонас аеругиноса, Салмонелла типхимуриум или Ентероцоццус фаецалис, који добро успевају, али без производње гаса (Негативна контрола).

- Треба напоменути да је изворна боја дехидрираног медијума беж, а боја припремљеног медијума врло светла и провидна жута. Ако се примети промена у боји или изгледу, може се погоршати.

Референце

1. Ацеведо Р, Северицхе Ц, Цастилло М. Биолошка екологија и микробиологија. (2013) 1. издање. Университи оф Цартагенас, Колумбија.
2. Цамацхо А, Гилес М, Ортегон А, Палао М, Серрано Б и Велазкуез О. (2009). Технике микробиолошке анализе хране. 2нд ед. Хемијски факултет, УНАМ. Мексико.
3. Цонда Пронадиса Лабораториес. 2017. Лакозна јуха двострука концентрација (Еуропеан Пхарм.)
4. Фернандез-Рендон Ц, Баррера-Есцорциа Г. Поређење техника екстракције колиформних бактерија из седимента језера Ксоцхимилцо, Мексико. Влч. микробиол. 2013; 45 (3): 180-184. Доступно на: сциело.орг.
5. Сотомаиор Ф, Виллагра В, Цристалдо Г, Силва Л, Ибанез Л. Одређивање микробиолошког квалитета воде артешких бунара у окрузима централних одељења, Кордиллера и главног града. Мем. Инст. Наука. Здравље 2013; 11 (1): 5-14. Доступно од: сциело.иицс.