- Основе
- Припрема
- -Селенитски чорб
- - Припрема комерцијалног окружења
- Варијанта булета селенит-цистин
- Апликације
- Засејано
- КА
- Ограничења
- Референце
Селените је селективни течни медијум културе. Дизајнирао га је Леифсон за обогаћивање узорака код којих се сумња на присуство ентеропатогених бактерија рода Салмонелла.
Овај медијум је у складу са захтевима Америчког удружења за јавно здравље (АПХА), па је прихваћен ради испитивања присутности салмонеле у узорцима измета, урина, течне или чврсте хране, воде, између осталог.
Јуха од селенита. Извор: Фотографију направио аутор МСц. Мариелса гил
Његов хемијски састав погодује опоравку ових микроорганизама и заузврат, инхибира раст других. Првенствено је отровна за већину бактерија из породице Ентеробацтериацеае. Међутим, такође омогућава опоравак сојева Схигелла и не инхибира раст Псеудомонас и Протеуса.
Састоји се од безводног натријум хидроген селенита, безводног натријум фосфата, пептона и лактозе. Постоји и варијанта којој се додаје цистин, отуда и његов назив селенит-цистински прелив.
Тренутно се преферира употреба селенит-цистинског бујона, јер се добија већи проценат опоравка салмонеле, еквивалентни оном који је примећен са другим селективним медијумима исте сврхе, као што је натријум-тетратионатни бујон.
Основе
Пептони садржани у јухи служе као храњиве материје за правилан развој микроорганизама. Сојеви салмонеле користе пептоне као извор азота, витамина и аминокиселина.
Лактоза је ферментирајући угљени хидрат, док је натријум селенит инхибиторна супстанца која зауставља раст грам-позитивних бактерија и већине бактерија присутних у цревној флори, нарочито из породице Ентеробацтериацеае. Натријум-фосфат је пуфер који стабилише пХ медијума.
У случају варијанте селенитне јухе која садржи Л-цистин, ово додатно једињење је редукционо средство које минимизира токсичност селенита, повећавајући опоравак салмонеле.
Припрема
-Селенитски чорб
Ако имате компоненте смеше, можете вагати:
4 г безводног натријум хидроген селенита.
10 г безводног натријум-фосфата.
5 г пептона.
4 грама лактозе.
Растворите једињења у 1 литру стерилне дестиловане воде. Може се мало загрејати да се потпуно отопи.
Неке лабораторије излажу медијум 10 минута у течну пару да би га стерилизирале, јер се аутоклав не треба користити. Ако се медијум стерилизира, може се чувати у фрижидеру до употребе.
Такође се може припремити нестерилно и сервирати директно 10 до 15 мл у стерилне епрувете.
У том случају треба га оставити да се одмори и одмах употребити. Како медијум није стерилан, не може се чувати у фрижидеру за каснију употребу.
- Припрема комерцијалног окружења
Ако је комерцијални медијум доступан, изважите 23 г дехидрираног медијума и растворите га у једној литри стерилне дестиловане воде. Кратко загрејати да се заврши растварање. Не аутоклавирајте. Асептично сервирајте 10 или 15 мл у стерилним епруветама.
Коначни пХ медијума треба да буде 7,0 ± 0,2.
Треба напоменути да је боја дехидрираног медијума беж, а препарат је лаган и провидан амбер.
Варијанта булета селенит-цистин
Садржи иста једињења као и јуха из селенита, али се додаје 10 мг цистина. Остатак поступка је потпуно исти као што је горе описано.
Апликације
Овај медијум је посебан за употребу у епидемиолошким студијама, у случајевима када болест није у акутном стадијуму, код асимптоматских болесника или здравих носилаца.
Изолација рода Салмонелла је углавном тешка, јер су обично само слабо контаминирани узорци. Будући да је у малим количинама, лако се прекрива растом других бактеријских родова који се налазе у већој количини.
С друге стране, сировине од којих се прави прерађена храна често су изложене топлоти, дехидрацијским процесима, употреби дезинфекцијских средстава, зрачења и конзерванса, између осталог.
Због тога се салмонеле присутне у сировинама малтретирају подвргавањем производа горе наведеним индустријским поступцима. Слично томе, у случају клиничких узорака као што су измет, сојеви могу бити слаби ако долазе од пацијената који су лечени антибиотицима.
Због тога, сваки узорак за који се сумња у присуство салмонеле треба претходно обогатити бујоном лактозе, а потом обогатити селенитним бујоном како би се оптимизирао њен опоравак у селективним медијумима, као што су СС агар, ксилозни агар, лизин деоксихолат (КСЛД ), ентерички Хектоен агар (ХЕ) и јарко зелени агар, између осталих.
Засејано
За узорке столице узмите 1 г узорка и суспендирајте у епрувети са 10 до 15 мл селенитне кашике. Ако су столице течне, узмите 1 мл и суспендирајте у јухи. За ректалне брисеве испустите материјал из бриса у бујон.
У узорцима чврсте хране узима се 1 гр и суспендује у јухи селенита.
У течној храни се мешају у једнаким деловима са буленом селенита у двострукој концентрацији.
За узорке урина центрифугирајте, одбаците супернатант, узмите сав седимент и суспендирајте га у јуху селенита.
Бујони се инкубирају на 37 ° Ц током 24 сата инкубације. Раст бактерија доказује замућеност. Додатна епрувета по узорку такође се може укључити за инкубацију на 42 ° Ц. Потом је сејање селективног чврстог медијума из селенитног бујона.
КА
Да би се контролирала стерилност, бујони из селенита из сваке неинокулиране шарже инкубирају се на 37 ° Ц током 24 сата. Очекује се да нема замућења или промене боје медијума.
Познати сојеви се могу користити за контролу правилног функционисања медијума, као што су:
Салмонелла ентеритидис АТЦЦ 13076, Салмонелла типхимуриум АТЦЦ 14028, Салмонелла цхолераесуис АТЦЦ 12011, Есцхерицхиа цоли АТЦЦ 25922 и Протеус мирабилис АТЦЦ 43071.
Очекивани резултати су:
- За прва три соја бактерија раст мора бити задовољавајући.
- За делимичну инхибицију Есцхерицхиа цоли.
- За Протеус умерен раст.
Ограничења
Средство булета из селенита токсично је за људску кожу, па би требало избегавати директан контакт.
Референце
- Флорес-Абукапкуи Ј, Пуц-Францо М, Хередиа-Наваррете М, Вивас-Росел М, Францо-Монсреал Ј. Поређење медијума културе натријум-селенита и натријум-тетратионата, оба инкубирана на 37 ° Ц и 42 ° Ц за изолација Салмонелла спп из измета носача. Рев Биомед 2003; 14 (4): 215-220
- Британниа Лабораториес. Булен Селенито. 2015. Доступно на: британиалаб.цом
- Неоген Лабораториес. Јуха од селенита. Доступно на: фоодсафети.неоген.цом
- Гонзалез -Педраза Ј, Переира -Санандрес Н, Сото -Варела З, Хернандез -Агуирре Е, Вилларреал-Цамацхо Ј. Микробиолошка изолација Салмонелла спп. и молекуларни алати за његово откривање. Здравље, Барранкуилла 2014; 30 (1): 73-94. Доступно са: хттп://ввв.сциело.орг.
- Форбес Б, Сахм Д, Веиссфелд А. (2009). Баилеи & Сцотт Микробиолошка дијагноза. 12 ед. Редакција Панамерицана СА Аргентина.