ЧОКОЛАДНИ АГАР: ОСНОВА, УПОТРЕБА И ПРИПРЕМА - БИОЛОГИЈА - 2025

Чоколада агар је средње чврста културу, обогаћене, нон - селективни и не - диференцијал. Користи се углавном за изолацију микроорганизама који захтевају са нутритивног становишта, мада у њему могу расти било које врсте бактерија.

Из тог разлога, његова корисност расте нарочито код сејања узорака који су нормално стерилни, као што су ЦСФ и зглобна течност. Иако је такође укључен у изабрани начин за сјетву полимикробних узорака, али је у тим случајевима потребно додати антибиотике који инхибирају пратећу флору.

Чоколадни агар са растом бактерија

Овај медијум има карактеристичну смеђу боју врло сличну чоколади, отуда и његово име. Препарат је веома сличан ономе у крвном агару, само што се у том случају крв мора загрејати да би се црвена крвна зрнца разградила.

Његова припрема, попут крви агар је врло деликатна, јер се лако контаминира. Из тог разлога, многе лабораторије радије набављају овај медијум који су већ припремиле комерцијалне компаније, а који гарантују његов квалитет.

Основе

Овај медијум се састоји од агарне базе богате храњивим материјама и загрејане крви. Хемолиза црвених крвних ћелија обезбеђује фактор Кс (хемин) и фактор В (НАД), неопходне за раст неких микроорганизама, као што је род Хаемопхилус. Такође је веома корисно за изолацију бактерије Неиссериас сп.

Као и крвни агар, различити медији се могу користити као базни агар, овисно о потреби. Међу коришћеним медијима су инфузија мозга срца и сојин агар триптилицазе, мада су највише препоручени Цолумбиа агар, Муеллер Хинтон, ГЦ агар и Тхаиер Мартин агар.

Неке варијанте чоколадног агара укључују и комерцијално доступан обогаћени додатак зван Исовиталек или Поливитек.

Ови додаци садрже витамин Б ₁₂ , Л-глутамин, аденин, гванин хлорид, п-аминобензојеву киселину, никотинамид аденин динуклеотид (НАД), тиамин пирофосфат, ферит нитрат, тиамин хидрохлорид, цистеин хидрохлорид, Л-цистин и глукозу.

Важно је напоменути да је чоколадни агар обогаћенији од крвног агара, али не омогућава посматрање образаца хемолизе.

Апликације

Извор: пикнио.цом. Аутор:
Пете Сеидел, Аманда Мооре, МТ, др Тодд Паркер, Аудра Марсх, УСЦДЦП

Чоколадни агар припремљен са агрумом Цолумбиа

Овај медијум садржи варење панкреаса казеина и срца, пептички варење меса, натријум хлорид, агар, екстракт квасца и кукурузни скроб. Такође је богата витаминима, минералима и есенцијалним аминокиселинама.

Ова загрејана крвна база идеална је за изолацију бактерија из рода Неиссериа. С друге стране, ако се додатак Бруцелла дода у медијум, поменути микроорганизам се може изоловати. Резултати се побољшавају употребом коњске крви.

Чоколадни агар припремљен са ГЦ базним агарима (за гонококе)

Овај медијум садржи пептоне, кукурузни шкроб, монобазне и двомасне пуфере, натријум хлорид и агар.

Већина комерцијално припремљених чоколадних агар презентација долази са овом базом и не садрже загрејану крв, већ синтетичку мешавину хемина и хемијски додатак фактора раста, витамина, минерала, аминокиселина, фактора В и глукозе.

Чоколадни агар припремљен са Муеллер Хинтон агаром

Користи се за тестирање антимикробне осетљивости опипљивих микроорганизама, попут Стрептоцоццус пнеумониае, помоћу 5% загрејане овчје крви.

Такође се користи за примарну изолацију Неиссерија и хемофила, али у посебном случају изолације хемофила пожељна је употреба коњске крви, јер је богат извор фактора Кс и В.

С друге стране, ако узорак за сјетву долази са нестерилног подручја, препоручује се додавање антибиотика да се инхибира нормална флора тог подручја.

Пример за респираторне узорке код којих се сумња на присуство бактерија рода Хаемопхилус, бацитрацин се користи да инхибира раст стафилокока, микрокока, стрептокока и сапрофитских Неиссерија.

У случају узорака гениталног шанкеа, код којих се сумња на хемофилус дуцреии, успешно је коришћен чоколадни агар припремљен на следећи начин: Муеллер - Хинтон агар са 5% чоколадном коњском крвљу, 1% обогаћивање Исовиталек-ом и 3 µг / мл ванкомицина.

Чоколадни агар припремљен са Тхаером Мартин агар

Овај медијум је посебан за изолацију бактерије Неиссериа гоноррхоеае. Мора да садржи антибиотике да инхибира пратећу флору. Користи се јањећа крв.

Припрема

Требали бисте видети индикације за припрему базног агара који ће се користити. Налазе се на задњој страни посуде дехидрираног медијума. Они генерално описују колико морате тежити да бисте припремили литар медијума за културу.

Тачна количина потребне за припрему може се припремити у лабораторији, може бити већа или мања од литра.

Калкулације

Правило три користи се за израчунавање колико вагати за припрему жељене запремине. Пример:

Ако је за литру потребно вагати 40 гр, а лабораторија треба 800 мл, каже се:

1000 мл ----------- 40 гр

800 мл -----------– Кс

Формула ће бити следећа:

Кс = 32 гр (количина која се одмерава за 800 мл).

Измерити и растопити

Потребна количина се измери и стави у тиквицу са водом.

Загрејати на умереној топлоти и лагано мешати ротирајућим покретима док се дехидрирани медијум потпуно не растопи, остављајући да кључа 1 минут.

Стерилизујте

Тиквица се постави у аутоклав да се медијум стерилизује на 121 ° Ц током 20 минута.

Крвни агрегат

Када напустите аутоклав, дозвољено је да стоји све док температура медијума не буде приближно између 56 до 70 ° Ц, да би се крв ставила и мешала док се медијум не смеди.

Ако додајете суплементе, време је да то учините. Након тога измијешајте и сервирајте 20 мл у сваку стерилну Петријеву посуду.

Цео поступак треба обавити у поклопцу за ламинарни проток или око Бунсен горионика.

Оставите да стоји док се не стврдне и чувајте обрнуто у фрижидеру.

Још један начин да се припреми чоколадни агар без употребе крви

Базни медијум се припрема као што је горе описано, комерцијално добијени дехидрирани хемоглобин је растворен и стерилисан у аутоклаву.

Обе растворе се оставе да се охладе на 50 ° Ц, сједине и дода се додатак. Мешајте у асептичним условима, а затим сервирајте у стерилним Петријевим посудама.

КА

Важно је да се крв постави на наведену температуру, јер је идеална за лизацију црвених крвних зрнаца и истовремено одржавање фактора В, који је осетљив на температуру.

На површини агара не смеју остати мехурићи. Из сваке шарже од 100 плоча, једну или две плоче треба инкубирати у рерни на 37 ° Ц током 24 сата да би се потврдила њихова стерилност.

За најбоље резултате, чоколадни агар треба користити убрзо након припреме.

Контролни бактеријски сојеви треба да се држе у лабораторији да би се проценила ефикасност свежег медијума за раст главних лепршавих микроорганизама од клиничког значаја.

Референце

1. Гарциа П, Паредес Ф, Фернандез дел Баррио М. (1994). Практична клиничка микробиологија. Универзитет у Кадизу, друго издање. УЦА Публицатион Сервице.
2. Форбес Б, Сахм Д, Веиссфелд А. (2009). Баилеи & Сцотт Микробиолошка дијагноза. 12 ед. Аргентина. Редакција Панамерицана СА
3. Конеман Е, Аллен С, Јанда В, Сцхрецкенбергер П, Винн В. (2004). Микробиолошка дијагноза. (5. изд.). Аргентина, уредништво Панамерицана СА
4. Лланес Р, Реиес А, Родригуез Ц, Гузман Д, Ллоп А. Изводљивост употребе медијума за базну културу ГЦ-Биоцен Агар у микробиолошкој лабораторији. Рев Кубана Мед Троп, 2004; 56 (3): 237-238. Доступно на: сциело.слд.
5. Сарадници Википедије Чоколадни агар. Википедија, Слободна енциклопедија. 17. децембар 2018, 19:54 УТЦ. Доступно на: ен.википедиа.орг.