ТРАЖЕНИ АГАР: ОБРАЗЛОЖЕЊЕ, УПОТРЕБА И ПРИПРЕМА - БИОЛОГИЈА - 2025

ЦЛЕД агар (цистин-Лактоза-електролита-Недовољно) је добар култивирани медиј диференцијал се користи за дијагнозу инфекција уринарног тракта. Састав медијума за културу осмишљен је за добар раст мокраћних патогена и идеалан је за квантификацију јединица које формирају колонију (ЦФУ).

Медиј за културу ЦЛЕД је неселективан, јер у њему могу расти Грам негативни и Грам позитивни микроорганизми. Али то није проблем, јер је већина УТИ узрокована само једном врстом микроорганизама.

ЦЛЕД агар

У случају полимикробних инфекција могу се добити 2 или 3 различите бактерије, али то је врло ретко и већином су то контаминирани узорци.

Међу Грам негативне бактерије које могу расти у овом медију су бацили који припадају породици Ентеробацтериацеае и други ентерички бацили, при чему су уропатогени најчешће изоловани у узорцима урина: Есцхерицхиа цоли, Клебсиелла пнеумониае, Протеус мирабилис, Морганелла моргании, Псеудомонас аеругиноса, између осталих.

Исто тако, међу грам-позитивне бактерије које могу расти у овом медијуму могу се развити Стапхилоцоццус ауреус, Стапхилоцоццус сапропхитицус, Ентероцоццус фаецалис, Стрептоцоццус агалацтиае, Цоринебацтериум сп, Лацтобациллус сп, па чак и квасци, као што је комплекс Цандида албицанс, могу расти.

Међутим, због хемијског састава медијума, он не дозвољава раст неких захтевних генитоуринарних патогена, као што су Неиссериа гоноррхоеае, Гарднерелла вагиналис, између осталих.

ЦЛЕД Агар Ратионале

Медијум за културу ЦЛЕД садржи енергетски екстракт меса, панкреасни хидролат казеина и хидролат желатине. Обезбеђују хранљиве материје за развој незахтевних бактерија.

Такође садржи цистин, аминокиселину која омогућава раст колиформи, разликовавши се по њиховој малој величини.

Исто тако, садржи лактозу као ферментирајући угљени хидрат, због чега је овај медијум диференциран; способност разликовања ферментацијских бактерија од не-лактозног ферментације.

Ферментирајуће бактерије узрокују промену пХ медијума производњом киселина, развијајући жуте колоније, док бактерије које не ферментирају не стварају промене у медијуму, па попримају боју оригиналног агара, зелену.

Реакција ферментације се открива захваљујући присуству пХ индикатора, који је у овом медијуму бромотимол плав.

С друге стране, ниска концентрација електролита у медијуму инхибира типични инвазивни раст рода Протеус, зван ефект ровања. Ово ствара предност у односу на друге медије, јер омогућава бројање ЦФУ-а, укључујући и ако је присутан род Протеус.

Међутим, ниска концентрација електролита инхибира раст неких врста рода Схигелла, што представља недостатак у поређењу са другим медијумима.

Образложење за ЦЛЕД агар (Бевис)

Постоји варијанта или модификација овог медијума коју је направио Бевис, који је у оригинални састав убацио киселински фуксин (Андрадеов индикатор). Дјелује у комбинацији са бромотхимол плавим да разликује ферментацију од не-ферментинг бактерија.

Разлика између конвенционалног и модификованог медија је боја коју колоније попримају. У случају бактерија које ферментирају лактозу, колоније попримају црвено-наранџасту боју са ружичастим или црвеним хало, док су оне које не ферментирају плавкасто-сиву.

Апликације

ЦЛЕД агар се користи искључиво за сејање узорака урина. Употреба овог медијума је посебно честа у европским лабораторијама, док се у Америци мање користи.

Прикупљање узорака мора задовољити одређене параметре да би се добили поуздани резултати, укључујући:

• Не узимати антибиотике пре узорковања.
• Пожељно прво узети урин ујутро, јер је концентрованији, када није могуће узети узорак инвазивним методама.
• Оперите гениталије добро пре узимања узорка.
• Одбаците први ток мокрења, а затим ставите посуду.
• Сакупите 25 до 30 мл урина у добро означеној стерилној посуди.
• Одведите одмах у лабораторију окружену ледом.
• Мора бити обрађен у року од 2 сата од издавања или у хладњаку на 4 ° Ц највише 24 сата.

Семе узорака урина

Узорак урина треба разблажити у 1:50.

За разблаживање ставите 0,5 мл пацијента у урину и разблажите 24,5 мл стерилног физиолошког раствора.

Измерите 0,1 мл разблаженог урина и површинског намаза помоћу дригалски лопатице на ЦЛЕД медијуму. Ово је најбољи метод сетве за бројање колонија. Из тог разлога се користи у узорцима урина, јер се резултати морају изразити у ЦФУ / мл.

Да бисте квантификовали добијене колоније, поступите на следећи начин: бројите колоније на плочи и помножите са 10, а затим са 50. То вам даје количину ЦФУ / мл урина.

Тумачење

Број преко 100.000 ЦФУ / мл -– Указује на мокраћну инфекцију

Броји испод 1000 ЦФУ / мл- Без инфекције

Броји између 1000-10 000 ЦФУ / мл - сумњива, могућа контаминација, поновљено узорковање.

ИД

Колоније које су узгајане на ЦЛЕД агару требало би да имају Грам и у зависности од морфотинториалних карактеристика микроорганизма врши се одређена субкултура.

На пример, ако се ради о Грам негативном бацилу, посејат ће се на агар МацЦонкеи, где се потврђује ферментација или не лактоза. Поред тога, везан је храњиви агар за обављање теста оксидазе.

У случају да Грам открива грам-позитивне коке, може се субкултурати на сланом манитарском агару и на хранљивом агару. У последњем се врши тест каталазе. Коначно, ако се примете квасци, посејат ће се на агар Сабоурауд.

Многе лабораторије избегавају употребу ЦЛЕД медијума и радије користе агар крви, МацЦонкеи и хранљиви агар за узорке семена урина.

Припрема

У тиквици са литром дестиловане воде раствори се 36,2 г ЦЛЕД ага праха. После 5 минута стајања загрејајте поново суспендовани агар, непрестано мешајући да кључа 1 минут.

Затим се стерилизује на 121 ° Ц током 15 минута у аутоклаву. На крају времена уклања се из аутоклава и оставља да се охлади до температуре од 45 ° Ц. Након тога се у сваку стерилну Петријеву посуду пије 15-20 мл.

Поступак сервирања плоча мора се извести унутар поклопца за ламинарни проток или испред Бунсен горионика како би се избегла контаминација.

Послужени тањири се оставе да се стврде, поредају се у обрнути сталак и чувају у фрижидеру (2-8 ° Ц) до употребе.

Коначни пХ припремљеног медијума треба да буде 7,3 ± 0,2.

Референце

1. Препоруке за микробиолошку дијагнозу уринарне инфекције. цхил. инфектол. 2001; 18 (1): 57-63. Доступно на: сциело.орг.
2. Панцхи Ј. Идентификација микробног агенса који изазива инфекцију мокраћних путева у пацијентима који су под катетеризацијом мокраћног мјехура. 2016. Преддипломски рад како би се квалификовао за титулу дипломираног клиничког лабораторија. Технички универзитет Амбато. Еквадор
3. Британниа Лабораториес. ЦЛЕД медиј. Доступно на: британиалаб.цом.
4. Ренилаб Лабораториес. Упутство за употребу, ЦЛЕД Агар. 2013 Доступно на: ес.ренилаб.инд.бр.
5. Цултимед Лабораториес. Основни приручник микробиологије. Доступно на: ицтсл.нет.
6. Муноз П, Церценадо Е, Родригуез-Цреикемс М, Диаз МД, Виценте Т, Боуза Е. Опција ЦЛЕД агар у рутини културе урина. Могућа и упоредна процена. Диагн Мицробиол Инфецт Дис. 1992; 15 (4): 287-90.
7. Гарциа П, Паредес Ф, Фернандез дел Баррио М. (1994). Практична клиничка микробиологија. Универзитет у Кадизу, друго издање. УЦА Публицатион Сервице.