АГАР ОД КУКУРУЗНОГ БРАШНА: ПОЗАДИНА, ПРИПРЕМА И УПОТРЕБА - БИОЛОГИЈА - 2025

Кукурузно брашно агар је средње чврста културу, ниска нутритивни снаге, корисно за субцултуринг одређених гљива и демонстрира цхламидоспорес у сојеви Цандида албицанс цомплек. На енглеском је позната као кукурузни оброк Агар.

Конвенционални мед за кукурузну брашно има веома једноставан састав, садржи кукурузну брашно, агар-агар и воду. Због ниског храњивог нивоа, идеалан је за употребу у одржавању сојева гљива за умерена периода времена, посебно црних гљива.

А. Графички приказ комплекса Цандида албицанс на агару кукурузног брашна. Б. Кламидоспоре комплекса Цандида албицанс које се виде под микроскопом, формиране на агару кукурузне брашне. Извор: А. ГрахамЦолм / Б. Написао: ЦДЦ / Др. Виллиам Каплан, љубазно: Библиотека слика јавног здравља.

У овом медијуму се фаворизује спорулација комплекса Цандида албицанс, ако се током припреме агара додаје 1% Твеен 80. Формирање хламидоспора карактеристично је за ову врсту и практично једину која утиче на људе.

Постоје и друге врсте које формирају кламидоспоре, али мало је вероватно да ће утицати на људе, као што је Цандида аустралис, присутна у измету пингвина, или Ц. цлаусении, што је сапрофит који се ретко среће. Исто тако, изузетно их могу формирати врсте Ц. стеллатоидеа и Ц. тропицалис.

С друге стране, додавање глукозе у медију са кукурузном брашном погодује стварању пигмената у сојевима Трицхопхитом рубрум.

Важно је нагласити да постоје гљиве које не формирају хифе или псеудохифе у агару кукурузне брашне, као што је Цриптоцоццус неоформанс, који се разликују од других родова.

Кукурузни агар може се направити код куће у лабораторији или се могу користити комерцијални медији.

Основе

Кукурузно брашно је супстрат, агар је средство за учвршћивање, а вода растварач.

Кукурузни агар може се надопунити с између 80 (сорбитан моноолеат или полисорбатни полиестер 80). Ово једињење смањује површинску напетост медијума захваљујући својој емулгаторској моћи.

Такође ствара непријатељско окружење које инхибира претерано размножавање ћелија и подстиче раст хифа, такође фаворизујући производњу хламидоспора; потоњи је сматрао структуре отпора. Ова структура помаже у идентификацији врсте Цандида албицанс.

Са своје стране, глукоза у овом медију повећава способност стварања пигмента неких гљивица.

Треба напоменути да мед за кукурузну брашно са глукозом није користан за демонстрацију хламидоспора у комплексу Цандида албицанс.

Припрема

Припрема домаћег ага од кукурузног брашна

Извагати 47 г жутог кукурузног брашна и растворити у 500 мл дестиловане воде. Загревати на 60 ° Ц, уз мешање препарата током отприлике 1 сата. Затим се филтрира кроз комад газе и памука, опционо се може поново филтрирати додавањем препарата кроз Вхатман Но. 2 филтер папир.

Допуните запремину до 1000 мл дестилованом водом. Додати 17 г агар-агара, загревати док се не растопи. Аутоклавите 15 минута на 121 ° Ц.

Сервирајте у стерилним Петријевим посудама. Чувати у фрижидеру.

Боја припремљеног медијума је белкаста са гнојним изгледом.

Ако желите да припремите кукурузно брашно са глукозом горе описаном препарату, додајте 10 г глукозе.

Комерцијални агар кукурузног брашна

Измерити 17 г дехидрираног медијума и растворити у 1 литру дестиловане воде. Смеша се може загрејати, лагано мућкајући да се потпуно растопи. Стерилизирајте у аутоклаву на 121 ºЦ, на 15 лб, током 15 минута.

Сипајте у стерилне Петријеве посуде. Пустите да се учврсти. Окрените и чувајте у фрижидеру до употребе. Темпер пре употребе.

ПХ треба да буде 6,0 ± 0,2 на 25 ° Ц.

Агар од кукурузног брашна са Твеен 80

Да би био у складу са ИСО 18416, агар кукурузне брашне мора бити припремљен на следећи начин:

Измерите 65 грама по литри и додајте 10 мл Твеен 80. Загревајте и кухајте неколико минута док се не отопи, пазећи да се превише не прегреје. Стерилизовати на 121 ° Ц током 15 минута.

Агар од кукурузног брашна са глукозом

Да би се побољшала хромогена снага колонија Трицхопхитон рубрум и разликовала их од Т. ментагропхитес, у оригиналну формулу може се додати 0,2% глукозе. Не морате имати Твеен 80, јер глукоза инхибира стварање хламидоспора.

Употреба

Углавном је употреба агара кукурузног брашна намењена за проучавање сојева Цандида, помажући њиховој идентификацији кроз карактеристично посматрање кламидоспора код врста албицанса. Односно, употреба овог агара служи као помоћна метода идентификације ових квасца.

На овом агару се могу развити и сапрофитне и патогене врсте, али свака формира карактеристичне мицеларне структуре. На пример, врсте рода Торулопсис не стварају мицелијум и размножавају се само бластоконидијом.

Исто тако, врсте Трицхоспорон и Геотрицхум производе артроцонидиа на агару кукурузног брашна и понекад је тешко разликовати једно и друго.

Артхроцонидиа из рода Геотрицхум производе продужетак хифа који подсећа на хокејски штап.

Такође је производња пигмената употребом агара од кукурузног брашна са додатком глукозе корисна у идентификацији Трицхопхитом рубрум.

Засејано

Сумњиве колоније Цандида добијене у медијуму примарне културе - Сабоурауд агар - из клиничких узорака, козметике, тла, између осталог, субкултивиране су на агару кукурузног брашна. Медијум је засијаван и инкубиран на 22 ° Ц током 24 до 48 сати. Вријеме инкубације може се продужити ако је потребно.

Цхламидоспоре демонстрација

У ту сврху, агар кукурузног брашна са Твеен 80 мора се инокулирати техником Далмау. Ова метода се састоји од узимања дела сумњиве колоније платинастом дршком и прављења три паралелна резова у средини, држећи дршку на 45 °. Резови се морају одвојити на удаљености од једног цм један од другог.

Након тога, претходно запаљиви покровни предмет поставља се на засијане пруге, на начин да је половина прекривена, а други непокривен.

Инкубирајте сетвене плоче на 30 ° Ц током 48-72 х, а затим прегледајте под микроскопом кроз поклопац.

Одржавање сојева гљивица

За одржавање сојева, сетвене и узгајане плоче чувају се у фрижидеру (4 до 8 ºЦ). На тај начин могу трајати неколико недеља и користити се у наставне или истраживачке сврхе.

КА

За контролу стерилности плоча се инкубира без инокулације на собној температури, очекује се да неће доћи до раста или промене боје.

За контролу квалитета могу се сијати познати сојеви као што су: Стапхилоцоццус ауреус, АТЦЦ 6538, Есцхерицхиа цоли АТЦЦ 25922, Аспергиллус нигер АТЦЦ 16404, Цандида албицанс АТЦЦ 1023, Саццхаромицес церевисиае АТЦЦ 9763.

Очекивани резултати су делимична инхибиција за С. ауреус и Е. цоли. Док се очекује задовољавајући раст код осталих сојева.

Аспергиллус нигер расте црним и спорулираним колонијама у приближном времену инкубације од 5 дана.

Колоније квасца Цандида албицанс са производњом кламидоспора.

Саццхаромицес церевисиае производе велике ћелије квасца.

Ограничења

На дну плоче формира се жути талог који се не сме мешати са колонијама.

Референце

1. Неоген Лабораториес. Кукурузни оброк Агар. Доступно на: фоодсафети.неоген.цом.
2. Мицрокит за културу. Кукурузни оброк Агар. Доступно на: Медиосцултиво.цом.
3. Линарес М, Водич за идентификацију квасца Солис Ф. Доступно на: хттп: //ввв.гуиа.ревиберо.
4. Урциа Ф, Гуевара М. Рев. Перу Мед.Екп. Јавно здравље, 2002; 19 (4): 206-208. Доступно на: Сциело.цом
5. Цасас-Ринцон Г. Општа микологија. 1994. Друго издање Централног универзитета у Венецуели, издања библиотека. Венезуела Царацас.
6. Форбес Б, Сахм Д, Веиссфелд А. (2009). Баилеи & Сцотт Микробиолошка дијагноза. 12 ед. Редакција Панамерицана СА Аргентина.
7. Конеман Е, Аллен С, Јанда В, Сцхрецкенбергер П, Винн В. (2004). Микробиолошка дијагноза. 5. изд. Редакција Панамерицана СА Аргентина.
8. Цастилло Е. Упоредна студија неких макро и микроскопских метода за изолацију и препознавање рода Цандида. Колумбијски Рев. оф Пхармацеутицал Цхемицал Сциенцес. 1970; 3 (1): 33-57. Доступно на: Циенциас.унал.еду.цо