Агар Хектоен или Хектоен Ентерични агар чврстом медијуму је селективан и диференцијал културе. Кинг и Метзгер су га створили на Институту Хектоен за изолацију ентеропатогених бактерија родова Схигелла и Салмонелла.
Средство се састоји од протеозног пептона, екстракта квасца, жучних соли, лактозе, сахарозе, салицина, натријум-тиосулфата, натријум-хлорида, гвожђа-цитрата, амонијум-цитрата, бромотимол-плавог, киселог фуксина и агара. Ова формулација омогућава разликовање родова Схигелла и Салмонелла од осталих бактерија које могу расти у овом медијуму.
А. Дечак Хектоен агар Б. Сјеме Хектоен агар. Извор: Флицкр.цом/ Оригинални учитавач био је Пхилиппињл на француској Википедији.
Иако постоје и други медији са истом функцијом као Хектоен агар, он има већу предност у односу на друге медијуме, посебно када желите да обновите врсте Схигелла.
Врсте оба пола узрокују тешке гастроинтестиналне проблеме код људи због конзумирања контаминиране хране; стога је преношење фекално - орално. Због тога се употреба Хектоен агара углавном указује у микробиолошкој анализи узорака столице и хране.
Основе
Хектоен Агар садржи пептоне и екстракт квасца као извор хранљивих материја, обезбеђујући битне елементе за развој микроба.
Међутим, он такође има жучне соли које делују инхибирајући раст неких бактерија, посебно грам-позитивних и неких грам негативних. Из тог разлога се сматра селективним медијем.
С друге стране, Хектоен агар је диференцијални медијум. Ово својство се даје присуством ферментибилних угљених хидрата као што су лактоза, сахароза и салицин, заједно са системом пХ индикатора, који су представљени бромотимол плавим и киселим фукссином.
Све бактерије које могу да расту на овом медијуму које не припадају роду Салмонелла и Схигелла развиће колоније лососа или наранџе, осим рода Протеус. То је последица ферментације једног или више присутних угљених хидрата, који закисељује медијум, због чега се пХ индикатор окреће.
Са своје стране, родови Схигелла и Салмонелла нису способни да ферментирају ниједан од присутних угљених хидрата, користећи само пептоне као извор енергије, који алкализује медијум и због тога су њихове колоније плаво-зелене боје.
У овом медијуму се могу разликовати и бактерије способне да формирају водоник сулфид (безбојни гас). Натријум-тиосулфат делује као извор сумпора, док је гвожђе цитрат развијач. Оба једињења омогућавају стварање црног талога гвожђ сулфида који показује реакцију.
Црни талог у центру колоније и прозирни ореол око њега даје изглед рибљег ока. Ова карактеристика сугерише присуство рода Салмонелла.
Коначно, натријум-хлорид одржава осмотску равнотежу и агар даје чврсту конзистенцију медијуму.
Припрема
Извагати 76 г дехидрираног медијума и растворити у литру дестиловане воде. Снажно протресите смешу и затим оставите да се одмара 10 до 15 минута. Може се загревати и кухати, дајући ротационе покрете до потпуног растварања. Овај медиј није аутоклављен.
Када медијум достигне температуру од око 45 ° Ц, запремина од 20 мл сипа се директно у стерилне Петријеве посуде.
Остављено је да се агар очврсне. У то време су спремни за употребу. Препоручује се њихово коришћење одмах. Ако то није могуће, чувајте се у фрижидеру до употребе.
Плоче треба извадити из фрижидера унапред пре сетве да се доведу до собне температуре.
ПХ медијума треба да буде 7,5 ± 0,2. Боја дехидрираног медијума је љубичаста, а припремљени медијум је смеђе-зелена.
Употреба
Употреба Хектоен агарја препоручује се у потрази за бактеријама рода Схигелла и Салмонелла у узорцима столице и хране.
Могућност изолације ових бактерија значајно се повећава ако се узорак претходно обогати посебним бујонима, као што је булет селенита, јуха од цистин селенита, тетратионациони бујот итд.
Инокулум мора бити јак, а сјетва се врши уситњавањем. Плоче се инкубирају на 37 ° Ц током 24 до 48 сати у аеробиози.
Инкубација током 48 сати препоручује се јер су карактеристике колонија јасније за њихову интерпретацију и диференцијацију у овом тренутку.
КА
За контролу квалитета овог медијума користе се сертификовани бактеријски сојеви, као што су: Салмонелла типхимуриум АТЦЦ 14028, Салмонелла ентеритидис АТЦЦ 13076, Схигелла флекнери АТЦЦ 12022 и Схигелла соннеи АТЦЦ 25931.
Очекивани резултати су следећи: Салмонелла типхимуриум и Салмонелла ентеритидис треба да развије плаво-зелене колоније са или без црног центра. Док ће врста Схигелла расти као плаво-зелене колоније.
Такође се могу укључити и сојеви Есцхерицхиа цоли АТЦЦ 29212, Протеус мирабилис, Клебсиелла пнеумониае АТЦЦ 700603, Ентероцоццус фаецалис АТЦЦ 29212 и Стапхилоцоццус ауреус АТЦЦ 25923.
У тим случајевима, уочене карактеристике су следеће: Е. цоли и К. пнеумониае ће развити лососо-наранџасте колоније у овом медијуму, са талогом исте боје око њих. Док ће Протеус развити плаво-зелене колоније са или без црног центра.
Док се С. ауреус и Е. фаецалис морају инхибирати, Е. фаецалис повремено успева да нарасте као врло мале, жуте колоније.
С друге стране, пошто овај медиј није аутоклавиран, важно је проценити стерилност медија. Због тога, из сваке припремљене шарже, једну аеро-инокулирану плочу треба инкубирати на 37 ° Ц током 24 сата у аеробиози.
Очигледно се не очекује раст било које врсте на тањиру.
Ограничења
- Протеус врсте се могу развити у овом медијуму, а карактеристике њихових колонија могу се побркати са врстама салмонеле или шигеле. Из тог разлога, свака сумњива колонија мора бити потврђена биохемијским тестовима.
- Употребу овог медијума треба пратити са другим мање селективним агарима, јер ако се тражени микроорганизам нађе у ниским концентрацијама, он се можда неће развијати у овом медијуму.
-Немојте да се прегрејете током припреме, јер прекомерна топлота мења састав медијума.
-Необично, могу се појавити колоније салмонеле која ферментира лактозу и могу проћи неопажено.
Референце
- Сарадници Википедије Хектоен ентериц агар. Википедија, Слободна енциклопедија. 13. март 2019, 23:38 УТЦ. Доступно на: .википедиа.орг / Приступљено 16. марта 2019.
- БД Лабораториес. БД Хектоен Ентериц Агар (ХЕ Агар). 2013. Доступно на: бд.цом
- Британниа Лабораториес. Хектоен Ентериц Агар. 2015. Доступно на: британиалаб.цом
- Дифцо Францисцо Сориа Мелгуизо Лабораториес. Хектоен агар. Доступно на: ф-сориа.ес
- Дифцо & ББЛ приручник, Хектоен Ентериц Агар. 2нд Едитион Доступно на: бд.цом/еуропе