САБОУРАУД АГАР: ОСНОВА, ПРИПРЕМА И УПОТРЕБА - БИОЛОГИЈА - 2025

Агар Сабоурауд , такође познат као Сабоурауд Декстроза агар, је чврста медијум, посебно обогаћен за изолацију и развој гљивица, као што су квасци, плесни и дерматофита.

Због тога овом медијуму не може недостајати лабораторија за микробиологију која би истражила присуство патогених или опортунистичких гљивица, било из клиничких или неклиничких узорака. Исто тако, идеалан је и за раст нитастих бактерија као што су Стрептомицес и Ноцардиас. Његова употреба је веома широка, јер се може користити у људској, животињској, биљној и индустријској микологији.

СВЕДОК ШЕШЕЉ - ОДГОВОР: Несејан агар Сабоурауд. Б. Сабоурауд агар засијан квасцем. Извор: Фотографије снимио аутор МСц. Мариелса гил

Овај медијум је створио 1896. године угледни дерматолог Раимонд Сабоурауд, који је постао светски познати специјалиста за поремећаје власишта, углавном изазване дерматофитима.

Његова израда је била толико важна да се користи од данас и остаје до данас, иако са неким модификацијама.

Иако је посебан за гљивице, бактерије могу расти у овом медијуму, стога је за узорке са мијешаном флором потребно укључити антибиотике у њихову припрему да инхибирају раст бактеријске флоре која може бити присутна.

Избор антибиотика мора се извршити пажљиво и узимајући у обзир врсту гљивице која се мора опоравити, јер је неке инхибирају у присуству одређених супстанци.

Основе

Сабоурауд декстрозни агар је медијум који је у својој оригиналној формулацији слабо селективан, због киселог пХ од 5,6 ± 0,2, међутим, бактерије се могу и даље развијати, углавном у продуженим инкубацијама.

Медијум садржи казеин пептон и пробавну супстанцу панкреаса животињског ткива, који обезбеђују извор угљеника и азота за раст микроорганизама.

Такође садржи високу концентрацију глукозе, која делује као извор енергије, промовишући раст гљивица преко бактерија. Све ово помешано је са агар-агаром, компонентом која му даје праву конзистенцију.

С друге стране, агар Сабоурауд декстрозе може бити селективан ако се додају антибиотици.

Са антибиотицима је посебно корисно у узорцима рана, отворених чирева или било ком узорку у којем се сумња на велико бактеријско загађење.

Најчешће се користе комбинације агода Сабоурауд декстрозе са антибиотицима

-Сабурауд агар са хлорамфениколом: идеалан је за опоравак квасца и нитастих гљивица.

- Сабоурауд агар са гентамицином и хлорамфениколом: готово све нитасте гљивице и квасци расту у овом медијуму, а инхибира велики број бактерија, укључујући Ентеробацтериацеае, Псеудомонас и Стапхилоцоццус.

- Сабоурауд агар са циклохексимидом: посебно је користан за узорке с коже или дисајних путева, под условом да сумња на диморфне гљивице.

Циклохексимид треба користити опрезно; Иако се користи за инхибирање раста непатогених или околишних гљивица и квасаца који могу бити присутни као контаминанти у узорку, он такође инхибира раст неких гљивица као што су Цриптоцоццус неоформанс, Аспергиллус фумигатус, Аллесцхериа боидии, Пенициллиум сп и друге опортунистичке гљиве.

- Сабоурауд агар са хлорамфениколом плус циклохексимидом: користи се углавном за изоловање дерматофита и диморфних гљивица. Има недостатак што инхибира неке врсте опортунистичких гљива као што су Цандида но албицанс, Аспергиллус, Зигомицетес или Ц. неоформанс.

- Сабоурауд агар са хлорамфениколом, стрептомицином, пеницилином Г и циклохексимидом: идеалан је за узорке изузетно контаминиране бактеријама и сапрофитним гљивицама, али има недостатак што инхибира раст Ацтиномицес и Ноцардиас, поред горе наведених опортунистичких гљивица.

Припрема

Ако састојке имате одвојено, могу се припремити на следећи начин:

Сабоурауд декстроза агар

Да одмери:

- 40 гр декстрозе

- 10 г пептона

- 15 гр агар-агара

- Измерите 1000 мл дестиловане воде

Сви састојци су помешани, пХ је подешен на 5,6. Раствори су растворени врелом, 20 мл медијума се дистрибуира у епрувете димензија 25 к 150 мм, без обода и пожељно са памучном капицом.

Цеви са памучном капицом. Извор: Фотографију направио аутор МСц. Мариелса гил

Такође се могу користити и друге величине цеви, у зависности од расположивости.

Аутоклавирани су 10 минута у атмосфери притиска (121 ° Ц). Не треба прекорачити време аутоклавирања. Када напуштају аутоклав, цеви се нагињу уз помоћ носача док се не учврсте у кљуну флауте.

Други начин је да се састојци растварају грејањем док не прокључају. Аутоклавите 10 минута у истој бочици и затим распоредите 20 мл у Петријеве посуде.

Ако имате медијум агар Сабоурауд декстрозе који већ садржи све састојке, наставите да одмерите количину коју је одредила комерцијална компанија за један литар воде. Остали кораци су исти као и горе описани.

Сабоурауд декстроза агар (модификација Еммонса)

Да одмери:

- 20 гр декстрозе

- 10 г пептона

- 17 гр агар-агара

- Измерите 1000 мл дестиловане воде

Сви састојци су помешани, пХ је подешен на 6,9. Поступите на исти начин као у претходном случају.

Постоје комерцијалне куће које нуде медијум са свим састојцима. У том случају изважите и припремите како је описано на уметку.

Сабоурауд декстроза агар (модификација Еммонса) са хлорамфениколом

Хлорамфеникол основни раствор

- Одмјерити 500 мг клорамфениколне базе

- Измерите 100 мл 95% етанола

- Мик

Медијум агар сабоурауд декстрозе (Еммонс) се припрема као што је раније описано и додатно се у сваки литар медијума дода 10 мл основног раствора хлорамфеникола пре аутоклавирања.

Сабоурауд Еммонс Декстроза Агар са циклохексимидом

Цицлохекимиде Стоцк раствор

- Измерити 5 гр циклохексимида

- Измерите 100 мл ацетона

- Мик

Средство агар сабоурауд декстрозе (Еммонс) се припрема као што је већ описано и додатно се у сваки литар медијума дода 10 мл основног раствора циклохексимида пре аутоклавирања.

Сабоурауд декстроза агар (Еммонс) са хлорамфениколом и циклохексимидом

Медијум агар сабоурауд декстрозе (Еммонс) се припрема као што је претходно описано и додатно се у сваки литар медијума дода 10 мл основног раствора хлорамфеникола и 10 мл основног раствора циклохексимида пре аутоклавирања.

Остали антибиотици који се могу додати

20.000 до 60.000 јединица пеницилина по литри медијума.

30 мг стрептомицина по литри медијума.

Обоје се мора уградити након аутоклавирања, лагано хлађења (50-55 ° Ц).

0,04 г неомицина по литри медијума.

0,04 г гентамицина по литри медијума.

Посебна разматрања

Ради сигурности, пожељније је сијати агар Сабоурауд декстрозе у клинове у облику клина (нагнуте у кљун флауте), а не у Петријеве посуде, како би се избегло распршивање и удисање спора.

Важно је да су цеви Сабоураудовог агара прекривене памуком, а не вијчаним поклопцем, јер се показало да полу-анаеробни услови инхибирају стварање спора код неких сојева, на пример Цоццидиоидес иммитис. Такође, већина гљивица је аеробна.

У случају употребе поклопца вијка, не затворите херметички.

КА

Припремљени медији морају проћи контролу квалитета да би се потврдило његово исправно функционисање. За то се посеју одређени контролни сојеви.

За Сабоурауд декстрозни агар са хлорамфениколом могу се користити АТЦЦ сојеви Цандида албицанс, који морају имати одличан раст. Друга плоча је инокулирана сојевима Есцхерицхиа цоли, који морају бити потпуно инхибирани.

Инкубирана је и ненаинокулирана плоча у којој не смеју расти микроорганизми.

Сојеви Трицхопхитон ментагропхитес могу се користити за агар сабоурауд декстрозе са хлорамфениколом и циклохексимидом, и они би требало да се добро развијају. Друга плоча је инокулирана сојем Аспергиллус флавус, у коме мора бити мало или никаквог раста. Поред тога, неинокулирана плоча се инкубира да покаже своју стерилност.

За агар декстрозе Сабоурауд са циклохексимидом користе се сојеви Цандида албицанс, Трицхопхитон рубрум или Мицроспорум цанис, који морају да показују добар раст.

Исто тако, укључен је и сој Аспергиллус флавус, који показује мали или никакав раст. На крају, инкубирајте неинокулирану плочицу за контролу стерилности.

Апликације

Примарна култура

Класични агар декстрозе Сабоурауд садржи 4 грама декстрозе и одличан је као примарни изолациони медијум, јер показује карактеристичну морфологију сваке гљиве.

Такође је одличан за демонстрирање производње пигмената. Међутим, то није најбоље средство за посматрање споралације.

Такође се не препоручује за узгој Бластомицес дерматитидис, који је инхибиран великом концентрацијом присутне глукозе.

С друге стране, за узгој се морају узети у обзир одређена разматрања.

Неке гљиве најбоље расту на собној температури, као што су плијесни, друге успјешно расту на 37 ° Ц, као што су неки квасци, а друге могу расти на обје температуре (диморфне гљивице).

Из тог разлога, понекад је потребно користити неколико плоча са агро Сабоурауд-ом за исти узорак, јер се дупликатно семе често ради за инкубацију једне плоче на собној температури, а друге на 37 ° Ц.

На пример, Споротхрик сцхенцкии се посеје у две плоче; један се инкубира на собној температури да би се добила фаза калупа, а други се инкубира на 37 ° Ц да би се добила фаза квасца, али у последњу је потребно додати 5% крви у медијум.

У другим случајевима, као што су узорци мицетома, посејавају се две плоче са агоуром Сабоурауд, једна са хлорамфениколом, а друга циклохексимидом. Први ће омогућити раст узрочника микотома гљивичног порекла (Еумицетома), а други узрочници мицетома бактеријског порекла, попут актиномицецета.

Спорулација

Еммонс модифицирани сакоурауд декстроза Агар садржи 2 грама декстрозе и не користи се само за изолацију, већ и за спорулацију и очување гљивица.

У овом медијуму, сојеви Бластомицес дерматитидис се могу опоравити.

Очување

Да би се сачувале културе гљива, могу се чувати у фрижидеру (2-8 ° Ц). Време чувања може да варира од 2 до 8 недеља. Након тог времена они морају бити субкултивирани да би се поступак поновио.

Неке гљиве се најбоље одржавају на собној температури, као што су Епидермопхитон фоццосум, Трицхопхитон сцхоенлеиннии, Т. виолацеум и Мицроспорум аудоунии.

Одржавање соја може се продужити да се избегне плеоморфизам ако се декстроза потпуно уклони из агара и ако се количина агара у медијуму смањи да се избегне сувоћа.

Микрокултуре

За идентификацију неких влакнастих гљивица, потребно је вршити микрокултуре користећи агар Сабоурауд или друга специјална средства за посматрање структура сексуалне и асексуалне репродукције.

У људској микологији

Користи се углавном за дијагностику гљивичних обољења, посебно оних која утичу на кожу и њене везове (косу и нокте).

Узорци могу бити секрети, ексудати, кожа, коса, нокти, испљувак, ЦСФ или урин. Најчешћи изоловани патогени су дерматофити, гљивице које изазивају поткожне и системске микозе.

Животињска микологија

Животиње су често погођене гљивичним инфекцијама, па је агар Сабоурауд једнако користан у микологији животиња као и код људи.

На пример, дерматофити могу често утицати на животиње. Такав је случај са Мицроспорум цанис вар дистортум, који често инфицира псе, мачке, коње, свиње и мајмуне. Исто тако, Мицроспорум гипсеум инфицира псе, мачке и стоку.

Птице попут кокоши, пијетла и пилића утјечу на Мицроспорум галлинае.

Остале гљивице, попут Зимонема фарциминосум, такође су узрочници болести код животиња, углавном код коња, мула и магараца, производећи значајне упале на лимфним судовима.

Споротхрик сцхенкии и Хистопласма цапсулатум утичу на домаће животиње и људе.

Еколошка микологија

Много патогених или опортунистичких гљивица може се концентрисати у било ком тренутку у датом окружењу, посебно у операцијским салама и јединицама интензивне неге клиника и болница. Због тога је неопходно извршити контролу над њима.

Остали рањиви простори су библиотеке и старе зграде, на које може утицати концентрација гљивица у окружењу.

У истраживањима заштите животне средине, за изолацију гљивица користи се агар Сабоурауд декстрозе.

Индустријска микологија

Сабоурауд декстроза агар не може изостати за проучавање контаминирајућих гљива у производњи козметике, хране, пића, коже, текстила.

Микологија биљака

Биљке такође пате од болести изазваних гљивицама, које погађају различите делове биљке, што може чак и окончати жетву, узрокујући велике губитке у пољопривреди.

Референце

1. Цуенца М, Гадеа И, Мартин Е, Пеман Ј, Понтон Ј, Родригуез (2006). Микробиолошка дијагноза испитивања микозе и антифунгална осетљивост. Препоруке Шпанског друштва за заразне болести и клиничку микробиологију. Доступно на: цоесант-сеимц.орг
2. ВалтеК Лабораторија. (2009). Сабоурауд декстрозни агар са циклохексимидом. Доступно на: андинамедица.цом.
3. Наварро О. (2013). Ветеринарска микологија. Национални аграрни универзитет. Никарагва.
4. Форбес Б, Сахм Д, Веиссфелд А. 2009. Микробиолошка дијагностика Баилеи & Сцотт. 12 ед. Аргентина. Редакција Панамерицана СА
5. Цасас-Ринцон Г. Општа микологија. 1994. Друго издање Централног универзитета у Венецуели, издања библиотека. Венезуела Царацас.