КРВНИ АГАР: ОБРАЗЛОЖЕЊЕ, УПОТРЕБА И ПРИПРЕМА - БИОЛОГИЈА - 2025

Агар Крв је средње чврста културу обогаћује диференцијал осим неселективни. Користи се за опоравак и раст великог броја микроорганизама из клиничких узорака или за субкултуре.

Класични агар у крви треба бити укључен за сејање већине клиничких узорака примљених у лабораторију; осим узорака столице где није корисно, осим ако нису припремљени са одређеним модификацијама.

Плоча агар крви

Овај медијум културе у основи се састоји од обогаћеног базног агара и 5% крви. База агар може варирати у зависности од потреба, али ће се углавном састојати од пептона, аминокиселина, витамина, екстракта меса, натријум-хлорида, агара, између осталог.

Што се тиче крви, обично је потребан контакт са виваријумом да би се добила крв од животиња, као што су овце, зец или коњ. Међутим, то није увек могуће и понекад се користи људска крв.

Средство за агар у крви може се припремити у лабораторији или се може набавити у специјалним компанијама. Припрема овог медијума је једна од најосетљивијих, свака непажња у припреми резултираће контаминираном серијом.

Зато се морају предузети све могуће мере предострожности и на крају се мора извршити контрола квалитета инкубацијом на 37 ° Ц 1 плочи за сваких 100 припремљених.

Основе

Стапхилоцоццус ауреус узгаја се на крвном агару. Натхан Реадинг на Флицкр-у Натхан Р. на Твиттеру, путем Викимедиа Цоммонса Већ је споменуто да крвни агар има карактеристику да је обогаћени, диференцијални и неселективни медијум. Ниже је објашњена основа сваког од ових својстава.

Крвни агар је обогаћени медијум јер садржи 5-10% крви на бази агара као свог главног адитива. Оба једињења садрже много хранљивих састојака и ово својство омогућава већини бактерија које се могу узгајати у њему.

Тај раст се одвија без ограничења; због тога је неселективна. Међутим, ако се овом медијуму додају једињења која спречавају раст неких микроорганизама и фаворизују друге, он постаје селективан. То је случај ако се додају одређене врсте антибиотика или против гљивица.

Исто тако, крвни агар је диференцијални медијум, јер омогућава разликовање 3 врсте бактерија: бета-хемолитичке, алфа-хемолитичке и гама-хемолитичке.

Бета-хемолитичари су они који имају способност да потпуно лизирају или разграде црвена крвна зрнца, формирајући јасан хало око колоније, па стварају ß или ß-хемолизу, а микроорганизми се називају ß-хемолитични.

Примери ß-хемолитичких бактерија су Стрептоцоццус пиогенес и Стрептоцоццус агалацтиае.

Алфа-хемолитичари су они који спроводе делимичну хемолизу, при чему хемоглобин оксидује у метхемоглобин, стварајући зеленкасту обојеност око колонија. Овај феномен је познат као α или α-хемолиза и бактерије су класификоване као α - хемолитичке.

Примери α-хемолитичких бактерија су Стрептоцоццус пнеумониае и Стрептоцоццус из вириданс групе.

Најзад, постоје такозване гама-хемолитичке или не-хемолитичке бактерије. Они расту на агару без генерисања промена на њему, ефекат познат као γ-хемолиза, а микроорганизми су γ-хемолитични.

Пример γ-хемолитичких бактерија: неки сојеви стрептокока групе Д (Стрептоцоццус бовис и Ентероцоццус фаецалис).

Апликације

Средство за културу агар у крви једно је од најчешће коришћених у лабораторији за микробиологију.

Међу микроорганизмима који могу да расту на медијуму крвног агарја су: строга аеробна, факултативна, микроаерофилна, анаеробна, грам-грам или грам негативна бактерија, брзорастуће или споро растуће бактерије.

Расту и неке нутритивно захтевне или прекомерне бактерије, као и гљивице и квасци. Исто тако, користан је за субкултурацију или реактивацију сојева који су метаболички веома слаби.

Међутим, избор крвне групе и базног агара ће варирати у зависности од вероватног микроорганизма за који се сумња да ће се опоравити и начина на који ће се употребити плоча (култура или антибиограм).

Избор крвне групе

Крв може бити јањетина, зец, коњ или човек.

Највише се препоручује крв јањетине, са изузецима. На пример, за изоловање врста хемофила, где је препоручена крв коњска или зечја крв, јер јагњећа крв садржи ензиме који инхибирају фактор В.

Најмање се препоручује човеку, али се највише користи, можда зато што га је најлакше набавити.

Крв мора бити дефибринирана, добијена без икаквих додатака и од здравих животиња. За употребу људске крви мора се узети у обзир неколико фактора:

Ако крв долази од појединаца који су имали бактеријске инфекције, имаће специфична антитела. Под овим условима ће раст неких бактерија вероватно бити инхибиран.

Ако се добија из банке крви, садржи цитрат и одређене бактерије можда неће расти у његовом присуству. С друге стране, ако крв долази од пацијената који узимају антибиотике, раст осетљивих бактерија може бити инхибиран.

А ако је крв од дијабетичара, вишак глукозе омета правилан развој образаца хемолизе.

Избор типа базног агара

Базни агар који се користи за припремање крвног агара може бити веома широк. Међу њима су: храњиви агар, агар за инфузију срца у мозгу, сојин агар триптилицазе, агар Муеллер Хинтон, агар Тхаиер Мартин, Цолумбиа агар, Бруцелла агар, агар Цампилобацтер, итд.

Употреба агар у крви према основном медијуму који се користи за његову припрему

Храњиви агар

Ова база се најмање користи, јер ће углавном узгајати незахтевне бактерије, попут ентеричких бацила, Псеудомонас сп, С. ауреус, Бациллус сп, између осталих. Не препоручује се изоловање стрептокока.

Инфузија мозга срца Агар (БХИ)

Једна је од најчешће коришћених као база за агар у крви, јер садржи потребне храњиве састојке за раст већине бактерија, укључујући Стрептоцоццус сп и друге захтевне бактерије. Иако није примерено посматрати обрасце хемолизе.

Јагњећа крв се углавном користи са овом базом.

Такође се могу припремити и варијанте агара у крви, где се додају друга једињења за изоловање одређених микроорганизама. На пример, инфаркт мозга за срце Агар допуњен зечјом крвљу, цистином и глукозом може да се користи за изоловање Франциселла туларенсис.

Док је са цистин телуритом корисно за изоловање Цоринебацтериум дипхтериае. Може се користити људска или јањећа крв.

Са првом бета-хемолизом биће посматрана као уски хало, док ће са другом хало бити много шири.

Исто тако, ова база, заједно са бацитрацином, кукурузним шкробом, коњском крвљу и другим додацима за обогаћивање (ИсоВиталеКс), користи се за изолацију рода Хаемопхилус сп из респираторних узорака.

Такође, ако се дода комбинација антибиотика хлорамфеникол - гентамицин или пеницилин - стрептомицин са коњском крвљу, идеална је за изолацију захтевних патогених гљивица, чак и са већим приносом него агар са глубора глукозе. Посебно је користан у изолацији Хистопласма цапсулатум.

Триптицасе сојин агар

Ова база се највише препоручује за боље посматрање узорка хемолизе и за обављање дијагностичких тестова као што су тактоци оптокуина и бацитрацин. То је класични агар у крви који се користи рутински.

Уз ову базу можете припремити и специјални агар у крви за Цоринебацтериум дипхтериае, са цистинским телуритом и јањетином .

Исто тако, комбинација овог агара са јагњећом крвљу, плус канамицин-ванкомицин, идеална је за раст анаероба, нарочито Бацтероидес сп.

Муеллер Хинтон агар

Ова база са крвљу користи се за спровођење антибиограма снажних микроорганизама, попут Стрептоцоццус сп.

Такође је корисна за изолацију бактерија као што је Легионелла пнеумопхила.

Тхаиер Мартин Агар

Овај медијум је идеалан као база за агар у крви када се сумња на род Неиссериа, посебно Неиссериа менингитидис, пошто Н. гоноррхоеае не расте на крвном агару.

Такође се користи за тестирање осетљивости на Неиссериа менингитидис.

Цолумбиа агар

Ова база је одлична за сејање узорака биопсије желуца за Хелицобацтер пилори.

Медијум се припрема додавањем 7% јањеће крви дефибриниране антибиотицима (ванкомицин, триметоприм, амфотерицин Б и цефсулодин) да би се ограничио раст других врста бактерија које могу бити присутне.

Та иста база допуњена људском или јањећом крвљу, налидиксичном киселином и колистиномом је корисна за изоловање Гарднерелла вагиналис. Идеалан је и за процену антимикробне осетљивости на антибиотике истог микроорганизма.

Поред тога, користи се за припрему крвног агара за узгој анаероба, додајући аминогликозиде и ванкомицин.

Ова база омогућава правилно посматрање образаца хемолизе.

Бруцелла агар

Овај медијум који се користи као база за агар у крви заједно са додатком витамина К идеалан је за узгој анаеробних бактерија. У овом случају се препоручује употреба јањеће крви.

Цампилобацтер агар

Цампилобацтер агар допуњен са 5% овчје крви и 5 антибиотика (цефалотин, амфотерицин Б, триметоприм, полимиксин Б и ванкомицин) је медијум који се користи за изоловање Цампилобацтер јејунија у узорцима столице.

Припрема

Свака комерцијална кућа доноси упутства да се на дну посуде припреми литар медијума за културу. Одговарајуће калкулације могу се извршити за припрему жељене количине, зависно од одабраног базног агара.

Измерити и растопити

Базни агар је дехидриран (у праху), па се мора растворити у дестилованој води подешеној на пХ 7,3.

Количина наведена у изабраном базном агару се измери и раствара у одговарајућој количини воде у тиквици, затим се загрева на умереној топлоти и меша ротацијским покретима док се сав прах не растопи.

Стерилизујте

Једном растворен, стерилисати у аутоклаву на 121 ° Ц током 20 минута.

Крвни агрегат

Када напустите аутоклав, тиквица се остави да се охлади док се температура не креће између 40 и 50 ° Ц; То је температура коју људска кожа подржава а истовремено се агар још није очврснуо.

Да бисте то учинили, бочицу додирнете руком, а ако је топлота подношљива, идеална је температура за додавање одговарајуће количине дефибриниране крви (50 мл за сваки литар агара). Лагано измешајте да се хомогенизује.

Пролаз агрегације крви је пресудан, јер ако се то учини када је медијум веома врућ, црвена крвна зрнца ће се разградити, а медијум неће користити за посматрање хемолизе.

Ако се дода превише хладно, скупит ће се и површина медија неће бити глатка да би омогућила правилно бодовање.

Сипајте у Петри посуде

Послужите у стерилним Петријевим посудама одмах након хомогенизације крви. Приближно 20 мл сипа се у сваку Петријеву посуду. Овај поступак се изводи у поклопцу за ламинарни проток или у близини горионика.

Када сервирате агар крви у Петријевим посудама, на површини тањира не би смели остати ваздушни мехурићи. Ако се то догоди, пламен Бунсеновог горионика брзо се преноси преко плоче како би их елиминисао.

Плоче се оставе да се очврсну и чувају у хладњаку (2-8 ° Ц) обрнутог до употребе. Пре употребе плоча са агарима за крв, они се морају темперирати (дозволити да достигну собну температуру) да би се могло садити.

Припремљени тањири трају отприлике 1 недељу.

Референце

1. Баиона М. Микробиолошки услови за културу Хелицобацтер пилори. Рев Цол Гастроентерол 2013; 28 (2): 94-99
2. Гарциа П, Паредес Ф, Фернандез дел Баррио М. (1994). Практична клиничка микробиологија. Универзитет у Кадизу, друго издање. УЦА Публицатион Сервице.
3. "Крвни агар." Википедија, Слободна енциклопедија. 10 дец 2018, 14:55 УТЦ 27 дек 2018, 01:49 ен.википедиа.орг.
4. Форбес Б, Сахм Д, Веиссфелд А. (2009). Баилеи & Сцотт Микробиолошка дијагноза. 12 ед. Аргентина. Редакција Панамерицана СА
5. ЦЕДИВЕТ Лабораторијски ветеринарски дијагностички центар. Гватемала Доступно на: тренса.цом.
6. Конеман Е, Аллен С, Јанда В, Сцхрецкенбергер П, Винн В. (2004). Микробиолошка дијагноза. (5. изд.). Аргентина, уредништво Панамерицана СА