ТЦБС агар је средство за високо селективан и диференцијалног чврстом културу, користе за изолацију и култивацију бактерија из рода Вибрио, посебно Вибрио цхолерае, В. парахаемолитицус и В. вулнифицус као главних патогена ове врсте.
ТЦБС акроним означава Тхиосулфате Цитрате Биле Суцросе. Овај агар је такође познат као селективни медијум за Вибриос. Оригиналну формулу је креирао Наканисхи, а касније модификовао Кобаиасхи.
Комерцијална ТЦБС плоча и ТЦБС агар плоча посејана са Вибрио колером. Извор: фотографија 1: снимио аутор МСц. Мариелса Гил / Фото 2: Мицрорао, ЈЈММЦ, Давангере, Карнатака, Индија
Састоји се од екстракта квасца, месног пептона, триптеина, натријум-цитрата, натријум-тиосулфата, окс жучи, сахарозе, натријум-хлорида, ферит-цитрата, бромотимол-плаве боје, тимол плаве боје и агарја.
Овај састав омогућава адекватан развој врста Вибрио из узорака воде, хране и измета; с изузетком Вибрио холлисае, који не расте на овом медијуму. Надаље, ТЦБС медиј је способан да инхибира раст других пратећих бактерија, посебно колиформних.
Због озбиљних гастроинтестиналних и ван-цревних проблема које производе неке врсте рода Вибрио, његова дијагноза је веома важна. Људи се углавном заразе једењем сирове или подхлађене хране из мора или загађених вода, али и инфекцијом рана.
Због тога клиничке лабораторије морају укључити ТЦБС агар у студију културе столице узорака течних столица, посебно са појавом пиринчане воде. Нарочито ако пацијент изјави да је био у контакту с морском водом или да је конзумирао шкољке или рибу.
Основе
Екстракт квасца, месни пептони и триптеин су прехрамбени извор овог медијума. Међутим, ТЦБС агар је неугодан медијум за већину бактерија.
Његова велика селективност је дата додатком натријум-цитрата и биксера; оба су инхибиторна средства која такође обезбеђују алкални пХ медијуму, ограничавајући раст пратеће флоре и фаворизујући раст В. цхолерае, између осталих врста. Треба напоменути да је Вибрио колера врло осетљива на киселост.
Натријум хлорид са своје стране осмотски уравнотежује медијум. Даље, пошто је његова концентрација велика, он делује и као инхибиторно средство, погодујући расту халофилних бактерија.
Сахароза је ферментабилни шећер који заједно са бромотхимол плавим и тимол плавим пХ индикаторима дају медијуму свој различит карактер. Из овог разлога, помоћу овог медијума, могуће је разликовати ферментацијске сојеве сахарозе од оних који не ферментирају.
Колоније сојева ферментације сахарозе развијају жуту боју и претвориће медијум из зелене у жуту због стварања киселине. Не-ферментори постају прозирни, а медијум остаје изворне боје (зелене).
Исто тако, овај медијум садржи натријум тиосулфат као извор сумпора и феритни цитрат као средство за развијање. Обе показују бактерије способне да производе водоник сулфид (безбојни гас). Х 2 С је формирана од тиосулфата и потом после реаговања са гвожђе цитрата видљивом црних талог.
Коначно, агар је оно што пружа чврсту конзистенцију медијуму.
Припрема
Извагати се 89 г дехидрираног медијума и растворити у једној литри дестиловане воде. Помаже растварању загревањем и честим мешањем. Смеша се може кувати највише 2 минута.
Овај медиј није аутоклављен. Након растварања, сервира се директно на стерилним тањирима. Кад се стврдну, они се поредају на обрнути начин на тромбоцитима и чувају у фрижидеру (2-8 ° Ц) до употребе.
Средство после припреме мора остати на пХ 8,6 ± 0,2.
Боја дехидрираног медија је светло беж или зеленкасто-беж, а боја медијума је шумско зелена или плавкасто зелена.
Важно је да се плоче загреју пре сетве узорака.
Употреба
Најчешћи узорак за изолацију Вибриоса је столица против пролива.
Ако се узорци столице не могу одмах сетти на селективни медијум, треба да се транспортују на медијум Цари Блаир.
Да би се повећала осетљивост културе, измет се може пропустити кроз пептонску воду при пХ 8,4 као средство за обогаћивање у трајању од највише 8 сати, одакле се субкултура у медијум ТЦБС.
Такође се мора узети у обзир да неки сојеви вируса могу изазвати септикемију код пацијената са имуносупресијом, па се могу изоловати из крвних култура. Исто тако, узорци воде и хране из мора могу се анализирати када постоје епидемије епидемије колере.
Засејано
Инокулум узорка мора бити истакнут, сјетва се врши методом уклањања исцрпљивањем. Плоче се инкубирају 24 сата на 37 ° Ц у аеробиози.
Претпостављене колоније Вибрио колере средње су величине, глатке, непрозирне, танких обруба и жуте боје због ферментације сахарозе.
Врсте В. алгинолитицус, В. флувиалис, В. хареии, В. цинциннатиенсис, В. фурниссии, В. метсцхниковии и неки В. вулнифицус расту на сличан начин. Остале клинички важне врсте вибриоса, попут В. парахаемолитицус, не ферментирају сахарозу, развијајући се као маслиново зелене колоније.
Плоча ТЦАР агар посејана са Вибрио парахаемолитицус. Извор: исис325 Флицкр
С друге стране, мора се имати на уму да неки сојеви Аеромонаса и Плесиомонаса који су оксидаза (+) могу расти у овом медијуму, развијајући жуте колоније које могу збунити клиничара. Док неки сојеви Псеудомонас такође оксидазе (+) расту као зелене колоније попут В. парахаемолитицус.
Ограничење
Тест оксидазе који је позитиван за род Вибрио никада се не сме изводити из колонија добијених из ТЦБС агара, јер ће добијени резултат бити лажно негативан. Једињења у средини снажно ометају овај тест. Стога се мора начинити од субкултура на крвном агару.
КА
Да би се доказало да је медијум у добром стању, препоручљиво је посејати познате или сертификоване контролне сојеве и проматрати да ли раст задовољава очекиване карактеристике.
За ово можете користити сојеве:
-Вибрио колере - задовољавајући раст (жуте колоније, прозирна граница).
-Вибрио парахаемолитицус - задовољавајући раст (колонија са зеленим центром и прозирном границом).
-Вибрио алгинолитицус АТЦЦ 17749 - задовољавајућег раста (жуте колоније са ореолима исте боје око колоније).
-Ентероцоццус фаецалис АТЦЦ 29212 - потпуна или делимична инхибиција (мале жуте или прозрачне колоније).
-Псеудомонас аеругиноса АТЦЦ 27853- - делимична или потпуна инхибиција (плаве колоније).
-Есцхерицхиа цоли АТЦЦ 25922 - Потпуно инхибирано.
-Протеус мирабилис АТЦЦ 43071 -– Потпуна или делимична инхибиција. (Мале колоније прозирне границе зеленог центра).
Инкубација неинокулираног медијума треба да буде непромењена.
Референце
- Дифцо Францисцо Сориа Мелгуизо Лабораториес. ТЦБС агар. 2009. Доступно на: ф-сориа.ес
- БД Лабораторија. БД. ТЦБС Агар 2003. Доступно на: бд.цом
- Британниа Лабораториес. ТЦБС Медиум. 2015. Доступно на: британиалаб.цом
- Ацумедиа Лабораториес. ТЦБС Агар. 2016. Доступно на: фоодсафети.неоген.цом
- Форбес Б, Сахм Д, Веиссфелд А. (2009). Баилеи & Сцотт Микробиолошка дијагноза. 12 ед. Редакција Панамерицана СА Аргентина.
- Конеман Е, Аллен С, Јанда В, Сцхрецкенбергер П, Винн В. (2004). Микробиолошка дијагноза. 5. изд. Редакција Панамерицана СА Аргентина.