ТХАИЕР МАРТИН АГАР: ОСНОВА, ПРИПРЕМА И УПОТРЕБА - БИОЛОГИЈА - 2025

Агар Тхаиер Мартин је веома хранљива и чврста селективна подлога за изоловање Неиссериа менингитидис и Неиссериа гоноррхоеае; обе познате као патогене или клинички важне Неиссериас.

Једна од најважнијих специјалних карактеристика Тхаиер Мартин Агар је његов високи садржај додатака прехрани. Ово својство је од суштинског значаја, јер су Неиссерије веома хранљиви микроорганизми са нутритивне тачке гледишта и зато не расту у уобичајеним медијима.

Тхаиер Мартин / Агар Тхаиер Мартин пословни медиј. Изворна слика 1: Снимио аутор МСц. Мариелса Гил, слика 2. Пикинио.цом бактеризиране, модификоване, Тхаиер, Мартин, агар.

С друге стране, пошто се ови микроорганизми обично налазе у нестерилним областима, додавање инхибитора је неопходно да се спречи раст пратеће флоре, а да то не утиче на развој рода Неиссериа.

Овај агар се састоји од базног агара ГЦ, хемоглобина, додатних додатака исхрани и комплекса инхибиторних супстанци (антибиотика и антифунгалних лекова). Комерцијалне куће продају сваки додатак посебно.

Узорак који ће сејати у овом медију зависиће од микроорганизма који се тражи. За Неиссериа гоноррхоеае идеални узорци су вагинални и уретрални секрет. Док су за Неиссериа менингитидис узорци најчешће коришћени ЦСФ, фарингеални и назофарингеални ексудати.

Основе

Неиссерије су микроорганизми класификовани као досадни и зато је њихова изолација тешка. Стога је Тхаиер Мартин сложен медиј и свака његова компонента испуњава функцију која је објашњена у наставку:

ГЦ базни агар

ГЦ агар садржи протеозни пептон, кукурузни скроб, натријум хлорид, калијум-фосфат, моно-калијум фосфат и агар-агар. Његове компоненте пружају основне хранљиве материје за развој микроба, неутрализирају отровне масне киселине, помажу у одржавању осмотске равнотеже, дефинирању пХ и медију дају чврсту конзистенцију.

Хемоглобин

Хемоглобин обезбеђује факторе В и Кс (никотинамид аденин динуклеотид НАД и хемин респективно). Из овог разлога, у овој средини расте и врста Хаемопхилус. Хемоглобин се може комерцијално добити у дехидрираном облику или се у медијум може додати свежа дефибринирана говеђа крв.

Додатак обогаћивању

С друге стране, додатак за обогаћивање мора се додати и у медију Тхаиер-Мартин, јер храњиве материје садржане у базном агару нису довољне за потребе рода Неиссериа.

Најчешћи додатак обогаћивању назива се исовиталек. Садржи глутамин, аденин, НАД, кокарбоксилазу, гванин, ферит нитрат, п-амино бензојеву киселину, витамин Б12, тиамин и глукозу. Сва ова једињења неопходна су за правилан развој патогених неиссерија.

Инхибитори

Како се ради о високо хранљивом медијуму, морају се користити инхибитори који спречавају раст микроорганизама из уобичајене флоре подручја и на тај начин погодују изолацији рода Неиссериа.

Инхибиторски комплекс састоји се од ванкомицина, колистина и нистатина. Ванкомицин инхибира раст грам-позитивних бактерија, колистин спречава раст грам-негативних бактерија као што су псеудомонас и неке сапрофитне неиссерије, а нистатин делује на квасце као што је Цандида албицанс.

Међутим, Тхаиер Мартин Агар је касније модификован; промене су се састојале од додавања триметоприма, повећања количине агара и додавања додатне глукозе. Ове промене значајно су побољшале опоравак врста Неиссериа гоноррхоеае.

Треба напоменути да триметоприм инхибира раст рода Протеус и његово последично формирање. У том смислу, антибиотици дају селективни карактер медију Тхаиер Мартин.

Припрема

Оригинал Тхаиер Мартин агар

-ГЦ агар

Извагати 8,2 г дехидрираног ГЦ медија и суспендовати у 100 мл. Помијешајте и кухајте 1 минуту уз често мијешање да се потпуно не отопи. Стерилизовати смешу у аутоклаву на 121 ° Ц током 15 минута.

- 2% хемоглобина

Суспензовати 2 г дехидрираног хемоглобина у 2 или 3 мл вруће дестиловане воде док се не формира једнолика смеша. Додајте мало по мало воде да бисте испунили запремину од 100 мл. Суспензија мора бити хомогена пре стерилизације.

Стерилисати у аутоклаву 15 минута.

- Додатак за обогаћивање

Реконституирајте комерцијалну бочицу са разблаживачем које нуди иста комерцијална компанија. Добро промешати. Количина разблаживача која се користи биће наведена у упутствима за комплет.

Додатак инхибиције ВЦН (ванкомицин, колистин, нистатин)

Реконституирајте бочицу са разблаживачем који је пружила комерцијална компанија. Добро промешати. Количина разблаживача која се користи биће наведена у упутствима за комплет.

-Припремљен

За сваких 100 мл ГЦ агара поступите на следећи начин:

Када ГЦ агар напусти аутоклав, оставите га да се охлади на температуру од приближно 50 ° Ц и додајте 2 мл припремљене отопине ​​хемоглобина, 2 мл додатка за обогаћивање (изобиталек или бриталек) и 2 мл додатка инхибиције. Помешати и сервирати у стерилним Петријевим посудама.

Оставите да се очврсне и чувајте у фрижидеру до употребе.

Боја припремљеног медијума је трешња-црвена. Крајњи пХ медијума је 7,2 ± 0,2

Измењени Тхаиер Мартин агар

Извагати 8,2 г дехидрираног ГЦ медија и суспендовати у 100 мл. Додајте 1 г агар-агара и додајте 0,3 г глукозе. Помијешајте и кухајте 1 минуту уз често мијешање да се потпуно не отопи. Стерилизовати смешу у аутоклаву на 121 ° Ц током 15 минута.

Припремите додатак хемоглобину и обогаћивању како је раније описано.

Употребљени додатак супресије је ВЦНТ (ванкомицин, колистин, нистатин, триметоприм).

-Припремљен

Наставите како је описано за оригинални агар Тхаиер Мартин.

Употреба

Тхаиер Мартин Агар треба оставити да се загреје пре узорка. Уобичајени узорци су фарингеални брис, брис носа, вагинални, уретрални и / или ректални исцједак и ЦСФ.

Користите свеже узорке и направите снажне инокуле на агару. Узорци се полажу директно избацивањем материјала, а затим се исцрпљеност исцеди на површину.

Плоче су инкубиране на 35-37 ° Ц током 24 до 48 сати у микроаерофилних теглу (5% ЦО ₂ ). На крају времена инкубације, плоче се испитују на мале, сиве и понекад мукоидне колоније.

Извршите Грам и потврдне биохемијске тестове на сумњивим колонијама.

КА

Следећи микробни сојеви могу се користити за контролу квалитета Тхаиер Мартин Агар.

Неиссериа гоноррхоеае АТЦЦ 49226 и Неиссериа менингитидис АТЦЦ 13090; очекује се задовољавајући развој у оба соја.

Следећи сојеви такође треба да буду укључени: Стапхилоцоццус епидермидис АТЦЦ 14990, Есцхерицхиа цоли АТЦЦ 25922, Протеус мирабилис АТЦЦ 43071 и Цандида албицанс АТЦЦ 10231. У свим њима се очекује потпуна или делимична инхибиција у овом медијуму.

Ограничења

-Морамо имати на уму да бактерије које су резистентне на инхибиторе могу да расту у медијуму.

- Постоје сојеви Неиссериа гоноррхоеае који могу бити осетљиви на концентрацију ванкомицина који се користи. Из тог разлога, препоручује се употреба чоколадног агара са додатком исовиталек, али без инхибитора.

- Постоје сојеви квасца отпорни на нистатин који могу расти у овом медијуму и ометају изолацију патогених Неиссерија, посебно гонокока.

Референце

1. Валтек дијагностичке лабораторије. Тхаиер-Мартин Агар, 2016. Доступно на: цом
2. Британниа Лабораториес. Тхаиер Мартин Медиум Модифиед. 2010. Доступно на: британиалаб.цом
3. Сарадници Википедије Тхаиер-Мартин агар. Википедија, Слободна енциклопедија. 26. октобар 2017, 16:33 УТЦ. Доступно на: википедиа.орг 4. Приступљено 28. фебруара 2019.
4. Британниа Лабораториес. ГЦ агар. 2010. Доступно на: британиалаб.цом.
5. Лабораторији ББЛ ™ средње обогаћивање хитрих микроорганизама. 1999. Доступно на: бд.цом
6. Форбес Б, Сахм Д, Веиссфелд А. (2009). Баилеи & Сцотт Микробиолошка дијагноза. 12 ед. Редакција Панамерицана СА Аргентина.