БИУРЕТ: ОБРАЗЛОЖЕЊЕ, РЕАГЕНСИ, ПОСТУПАК, УПОТРЕБЕ - БИОЛОГИЈА - 2025

Биурет је реагенс се користи за одређивање протеина дугог ланца и кратког ланца. Посебно се користи у области аналитичке хемије и анализе мокраће за испитивање концентрације укупних протеина у серуму, плазми и урину.

Вриједности протеина могу се повећати или смањити код одређених патологија. Симптоми хипопротеинемије обично се јављају код пацијената са бубрежном болешћу, код неухрањених и код хроничних инфекција.

Хемијска структура комплекса формирана у позитивном тесту Биурета на реакцију. Извор: Иикразуул / флицкр

Док се хиперпротеинемија примећује код патологија као што су мултипли мијелом, системски еритематозни лупус, бактеријски ендокардитис, бактеријски менингитис, Валденстромова макроглобулинемија, између осталих.

С друге стране, присуство протеина у урину последица је филтрирања албумина у бубрезима. Ово је патолошко понашање које се мора проучити.

У том смислу, биурет је веома користан, јер омогућава квантификацију присуства протеина у серуму, плазми, урину, међу многим другим узорцима.

Чак се и Биурет може користити за испитивање присуства и концентрације протеина у слабо истраженим узорцима или узорцима непознатог састава. Због тога се широко користи у истраживачком подручју.

Биуретов тест заснован је на откривању пептидних веза. Испитивање се одвија у алкалном медијуму. Узорак мора да садржи најмање две пептидне везе да би се формирао љубичасто-љубичасти комплекс. Комплекс настаје спајањем веза и јона бакра.

Основе

Биуретов реагенс се састоји од калијум хидроксида, куријум сулфата, натријум и калијум тартарата. Натријум хидроксид се користи за алкализацију медијума, јер је ово стање битно за одвијање реакције.

Супстанце које реагују са протеинима су каприов сулфат, док натријум-тартарат има функцију да не дозволи стварање бакар-хидроксида, који има тенденцију таложења и ометања реакције.

Ако се у узорку нађу супстанце са пептидним везама (полипептиди или протеини), тест ће бити позитиван.

Реакција се тумачи као позитивна када раствор постане љубичаст. Боја се добија формирањем комплекса између најмање две пептидне везе које имају ЦО-НХ групу и катионе кукуруза.

Љубичасти комплекс може се формирати на два начина: један је губитком протона из амидних група које се везују за метал (депронотација), а други спајањем електрона кисеоника и азота који су слободни и везују се са бакром.

Ова реакција може варирати у интензитету и боји у зависности од врсте протеина.

Тест се може извести квалитативно или квантитативно. У квалитативном облику извјештава се као позитивно или негативно. Док се у квантитативном облику концентрација може мерити спектрофотометријском методом.

Реакција се очитава између 540-560 нм. Интензитет боје је директно пропорционалан концентрацији пептидних веза у узорку.

Реагенси

-20% натријум хидроксида (НаОХ)

-Цуприц сулфат пентахидрат 1% (ЦуСО _4. 5Х ₂ О)

-Микед натријум и калијум тартрат тетрахидрат (КНаЦ ₄ Х ₄ О ₆ · 4Х ₂ О)

Стабилност реагенса биурета

- Мора се држати у хладњаку.

Процес

Техника

-Ставити 100 ул узорка или стандарда који се анализира у епрувети.

-Додајте 2 мл натријум хидроксида.

- Добро се мијешај.

-Додајте 5 мл биуретског реагенса.

-Месити и оставити да се одмара 25 минута на собној температури, покрити и заштитити од светлости.

- Запазите формирање или не боје и мерите спектрофотометријски.

Калибрациона крива

Албуми говеђег серума могу се користити као стандард за обављање калибрационе кривуље. Из њега се припремају различите концентрације. На пример 25, 50, 75, 100, 125 и 150%.

Реакција је постављена са свим овим познатим концентрацијама и апсорбанција се очитава на таласној дужини од 540 нм. Помоћу података познатих концентрација и очитавања апсорбанције израђује се калибрациона крива.

За свако одређивање или серију обрађених узорака препоручује се постављање стандарда. Албум од говеђег серума 0,1-2 мг / мл може се користити као стандард за калибрацију.

Мерења су извршена на спектрофотометру на 540 нм.

Линеарност је задовољена до концентрације од 12 г / дл.

Сметање

Супстанце које ометају Биуретов тест

Иако није веома чест, треба имати на уму да неке материје могу ометати током извођења овог теста. На пример, присуство амонијака може инхибирати стварање боје.

Исто тако, и друге супстанце могле би да апсорбују исту таласну дужину, као што су одређени пигменти.

С друге стране, сметње се могу створити када супстанца која није пептидна веза формира комплекс са сољу курира. Пример: неки угљени хидрати и одређени липиди.

Ако узорак који се анализира садржи неку врсту талога, мора се филтрирати или центрифугирати пре постављања теста.

Супстанце које не ометају Биуретов тест

На тест не утиче присуство:

-Билирубин до концентрације 20 мг / дл.

-Хемоглобин до концентрације од 750 мг / дл.

-Декстран до концентрације од 30 г / Л.

-Триглицериди до концентрације 4000 мг / дл.

Предност

-То је једноставан начин извршења.

-То је економски тест.

-Има високу специфичност за протеине.

-Мало сметње.

Недостаци

Има слабу осетљивост на откривање ниских количина протеина. Рад који су извршили Фуентес и др. Потврђује да метода биурет теста има границу детекције од 1 мг / мл протеина и границу квантификације од 3 мг / мл.

Међутим, друга истраживања спроведена на Универзитету у Амазонији наводе много ниже вриједности. Граница детекције коју је пријавила студија износи 0,020 мг / мл, а граница квантификације је 1,33 мг / мл.

Апликације

Биуретов реагенс или тест користи се за одређивање протеина у клиничким и неклиничким узорцима у рутинским и истраживачким лабораторијама.

Патологије које се јављају са повећањем или смањењем

У многим патологијама важно је одредити концентрацију укупних протеина у клиничким узорцима, која може бити повећана или смањена.

Они су повишени у:

-Мултипли мијелом,

-Системски еритематозни лупус,

-Бактеријски ендокардитис,

-Бактеријски менингитис,

Валденстромова макроглобулинемија, између осталих.

Смањује се у:

-Бубрежна инсуфицијенција,

-Људи са тешким степеном неухрањености,

- Пацијенти са хроничним инфекцијама, између осталог.

Клинички узорци

Најчешћи клинички узорци су серум, плазма и урин. Нормална вредност протеина у серуму или плазми је 6,0-8,8 гр / дл.

Концентрација протеина у урину код одраслих не прелази цифру од 150 мг / 24 сата.

Омјер протеина у урину / креатинин у урину нормална вриједност

Дојенчад: <0,50 мг

Деца 2 године и старији: индекс: 0,20 мг

Одрасли: <0,2 мг

Неклинички узорци

Реакција Биурета може се користити за многе врсте неклиничких узорака, као што су млечни производи, антивеном или било која непозната супстанца за коју желите да истражите присуство протеина.

Референце

1. Вазкуез Ј, Гуерра Л, Куинтана Ј, Рамирез Ј, Фернандо Ри Вазкуез И. (2014). Физичко-хемијска карактеризација и садржај протеина у течним екстрактима острига мангрове (Црассостреаризопхорае). Кубански часопис за хемију, 26 (1), 66-74. Преузето 26. јуна 2019. са хттп: //сциело.слд
2. Цхапарро С, Лара А, Сандовал А, Соса С, Мартинез Ј, Гил Ј. Функционална карактеристика бадема семенки манга (Мангифера индица Л.) Ревиста Циенциа ен Десарролло. 2015; 6 (1): 67-75
3. "Биурет." Википедија, Слободна енциклопедија. 19 јун 2019, 16:37 УТЦ 26 јун 2019, 22:18
4. Фуентес Ф, Куиспе И, Гарциа Ј. Стандардизација биуретске методе за квантификацију укупних протеина у поливалентном антиботропном серуму произведена у Националном центру за биолошке производе ИНС. Бол - Инст Нац Салуд 2012; 18 (11-12). Доступно на: репоситорио.инс.гоб.пе
5. Винер Лабораториес. Укупни протеини. Колориметријска метода за одређивање укупних протеина у серуму и плазми. Доступно на: виенер-лаб.цом.ар