МАХУНАТ МАХУНА: ТЕМЕЉ, ПРИПРЕМА И УПОТРЕБА - БИОЛОГИЈА - 2025

Малонат чорба је течни медијум културе се користи за дијагностички тест (малонат), се користи за разликовање неки родови породице Ентеробацтериацеае. Леифсон га је створио 1933. године, а касније га је модификовао Евинг, који је у оригиналну формулу додао малу количину екстракта декстрозе и квасца.

Медијум се тренутно састоји од екстракта квасца, амонијум-сулфата, ди-калијум-фосфата, моно-калијум-фосфата, натријум-хлорида, натријум-малоната, декстрозе и бромотидол плаве боје. Овај тест је углавном укључен у батерију за биохемијску идентификацију за Ентеробацтериацеае, што помаже у разликовању одређених родова и врста.

Графички приказ малонатног теста. А. Негативни тест, Б. (закисељавање) Негативни тест, Ц. (Средња алкализација) Позитиван тест. Извор: цијеви у боји публицдомаинпицтурес.нет

Тест малоната заснован је углавном на способности неких микроорганизама да користе натријум малонат као једини извор угљеника, а амонијум сулфат као њихов извор азота.

Малонатни тест је обично позитиван код неких врста рода Ентеробацтер, Клебсиелла и Цитробацтер. Док већина врста родова Есцхерицхиа, Салмонелла, Схигелла, Едвардсиелла, Иерсиниа, Серратиа, Морганелла, Протеус и Провиденциа даје негативне реакције.

Основе

Тест малоната састоји се од приказивања бактерија које су способне да користе натријум малонат као једини извор угљеника и амонијум сулфат као извор азота.

Већина ентеробактерија које не користе малонат у стању је да расте у овом медијуму, узимајући декстрозу и екстракт квасца као храњиве материје.

У овом случају, сваки покушај алкализације употребом пептона спречиће производњу киселина које настају ферментацијом декстрозе. Исто тако, калијум и монокалијум фосфати делују као пуфер, одржавајући пХ на 6,7.

Због тога, када је тест негативан, јуха остаје исте првобитне боје (зелена). У ретким приликама медијум може постати кисео због ферментације декстрозе; без употребе пептона и пХ индикатора претворио би боју медијума у ​​жуту. Да би се то догодило, пХ мора да падне на 6.

Међутим, када је овај тест позитиван, каже се да је микроорганизам користио малонат и амонијум сулфат као изворе угљеника и азота, без употребе осталих компоненти.

У овом случају, средина постаје алкална због ослобађања натријума и последичног стварања НаОХ. У том смислу, пХ индикатор (бромотимол плави) претвара боју медијума у ​​зелену у плаву када је пХ једнак или већи од 7,6. Плава може бити лагана или интензивна (пруско плава).

Коначно, натријум-хлорид одржава осмоларност медијума, а вода је разблаживач свих компоненти.

Тумачење

Бујон исте боје (зелени) - негативни тест

Жути чорб: негативан тест

Светли или тамноплави бујони: тест позитиван

Постоји варијанта названа фенилаланин малонат бујона, која се такође назива мед и Схав и Цларке. У овом случају могу се анализирати два испитивања, употреба малоната као извора угљеника и производња пируичне киселине из фенилаланина.

Припрема

Мало лука од чорбе

Измерава се број грама који је одређен уметком одабраног комерцијалног предузећа (може варирати од једног до другог). Измерени грам се суспендује у литру дестиловане воде. Загревати мало док се потпуно не отопи. Поделите 3 мл медијума у ​​13/100 епрувете са памучним поклопцима.

Стерилизирајте у аутоклаву на 121 ° Ц током 15 до 20 минута.

Охладити пре употребе. Ако се неће одмах користити, чувајте у фрижидеру до употребе. Донесите јуху на собну температуру пре инокулације.

ПХ медијума треба да буде 6,7 ± 0,2. Боја припремљеног медијума је зелена.

Пхенилаланине Малонате бротх

Извагати 11 г дехидрираног медијума и растворити у 1 литру дестиловане воде. Остатак препарата је исти као претходно описан.

Такође се може припремити додавањем 2 г / Л фенилаланина у медијум малонатног бујона пре него што се стерилише.

Употреба

Користи се као део скупа биохемијских тестова који су састављени за идентификацију бактерија из породице Ентеробацтериацеае.

Помаже у разликовању:

-Глав Клебсиелла и Ентеробацтер (+) из рода Есцхерицхиа и Серратиа (-).

-Врсте Салмонелла ентерица ссп аризонае, Салмонелла ентерица ссп саламе и Салмонелла ентерица ссп диаризонае (+), врсте Салмонелла ентерица ссп ентерица (-).

-Од рода Клебсиелла генерално (+) из рода Ацтинобациллус (-).

- Повремено може помоћи у диференцијацији родова и врста бактерија које не припадају породици Ентеробацтериацеае, као што су граматички негативни бацили Алцалигенес фаецалис (+) и Ацинетобацтер сп (-).

Извор: Конеман Е, Аллен С, Јанда В, Сцхрецкенбергер П, Винн В. (2004). Микробиолошка дијагноза. 5. изд. Редакција Панамерицана СА Аргентина.

Процес

Под упаљачем узима се део чистог колоњске воде помоћу правилно стерилизованог и хлађеног платинастог дршка. Узети узорак (лаки инокулум) је растворен у малонатној јухи. Инкубирајте поклопцем који се отвара у аеробиози на 35 ° Ц ± 0,2 током 24 до 48 сати.

Малонатни бујон се такође може инокулирати из културе од 18-24 сата у сојин бујон триптилицазе. У том се случају стерилном пипетом узима 0,01 мл и малонат масти се инокулира. Инкубирајте поклопцем који се отвара у аеробиози на 35 ° Ц ± 0,2 током 24 до 48 сати.

На крају времена резултати се тумаче. Сваки траг плаве боје после 48 сати инкубације треба сматрати позитивним. Тест не треба тумачити као негативан све док не прође 48-сатно време инкубације.

У случају коришћења варијанте бутиле фенилаланин малоната, прво се тумачи малонат, а затим се додаје 5 капи 1Н ХЦл и 3-5 капи 8% -тног флоридног хлорида. Тамно зелена боја се тумачи као позитиван тест за фенилаланин. Ако је с друге стране медиј бледо плав, тест је за фенилаланин негативан.

КА

Да би се извршила контрола стерилности медијума, треба инкубирати једну или две преливе на 35 ° Ц ± 0,2 током 24 сата инкубације. Након овог времена не би требало бити облачности или промене боје.

За контролу квалитета могу се користити познати или сертификовани сојеви, као што су: Ентеробацтер аерогенес АТЦЦ 13048, Клебсиелла пнеумониае АТЦЦ 33945, Салмонелла ентерица ссп аризонае АТЦЦ 13314 и Есцхерицхиа цоли АТЦЦ 25922.

Очекивани резултати су:

• Ентеробацтер аерогенес, Клебсиелла пнеумониае и Салмонелла ентерица ссп аризонае дају позитивну реакцију (средње плаве боје).
• За Есцхерицхиа цоли резултат би требао бити негативан, односно очекује се да неће доћи до промјене боје (зелене) или да ће пожутјети због ферментације глукозе.

Ограничења

Не користите јуху која показује замућеност, талог, промену боје или било какве знакове пропадања.

Референце

1. Педраза Ј, Санандрес Н, Варела З, Агуирре Е, Цамацхо Ј. Микробиолошка изолација Салмонелла спп. и молекуларни алати за његово откривање. Унинорте Хеалтх. Барранкуилла (Цол.) 2014; 30 (1): 73-94. Доступно на: сциело.орг.цо
2. ББЛ. Булат од малоната, Евинг модифициран. 2007. Доступно на: бд.цом
3. Сенна Лабораториес. Јуха од Малоната. Доступно на: циентифицасенна.цом
4. РениЛаб. Јуха од Малоната. 2013.Доступно на: ес.ренилаб.инд.бр
5. Мбиолог Диагностицс. Јуха од Малоната. Доступно на: мбиолог.цом
6. Конеман Е, Аллен С, Јанда В, Сцхрецкенбергер П, Винн В. (2004). Микробиолошка дијагноза. 5. изд. Редакција Панамерицана СА Аргентина.
7. Цонда Пронадиса Лабораториес. Фенилаланин малонат кашика. Доступно на: цондалаб.цом