МЕДИО: ОБРАЗЛОЖЕЊЕ, ПРИПРЕМА, УПОТРЕБА И ОГРАНИЧЕЊА - БИОЛОГИЈА - 2025

ОФ или глукоза ферментацију медијум је полу-чврсти агар посебно дизајниран за проучавање оксидације и ферментативну метаболизму угљених хидрата у важног групи микроорганизама осим Ентеробацтериацеае, зове нон-ентериц Грам негативни бацили.

Створили су је Хју и Леифсон; ови истраживачи су схватили да конвенционална средства за проучавање производње киселина из угљених хидрата нису прикладна за ову специфичну групу бактерија.

СВЕДОК МАРКОВИЋ - ОДГОВОР: Комерцијални базални ОФ. Б. Епрувете са средњим семеном ОФ. Извор: А и Б Фотографије снимио аутор МСц. Мариелса Гил.

То је због тога што не-ентерички Грам негативни штапови углавном стварају мале количине киселина, за разлику од Ентеробацтериацеае.

У том смислу, ОФ медијум има посебне карактеристике које могу открити мале количине киселине која се формирају, и оксидативним и ферментативним путевима. Ове разлике су повезане са количином пептона, угљених хидрата и агара.

Овај медијум садржи мање пептона и већу концентрацију угљених хидрата, чиме се смањују производи који алкалишу медијум као резултат метаболизма протеина и повећавају производњу киселина услед употребе угљених хидрата.

С друге стране, смањење количине агара погодује дисеминацији киселине која се ствара кроз медијум, осим што нам омогућава да посматрамо покретљивост.

ОФ медијум се састоји од пептона, натријум-хлорида, бромотимол-плаве боје, ди-калијум-фосфата, агара и угљених хидрата. Најчешћи угљени хидрати су глукоза, али могу се користити и други према којима се жели проучавати, попут лактозе, малтозе, ксилозе.

Основе

Као и сваки медијум културе, ОФ медијум мора да садржи хранљиве материје које гарантују раст бактерија; ове супстанце су пептони.

Са своје стране, угљени хидрати обезбеђују енергију и истовремено служе за проучавање понашања микроорганизма против њега, односно омогућава бактеријама да се класификују као оксидативни, ферментативни или не-сахаролитички организам.

ОФ медијум садржи однос 1: 5 пептон / угљени хидрати за разлику од конвенционалног медијума 2: 1. Ово осигурава да количина алкалних амина насталих разградњом пептона не неутралише стварање слабих киселина.

С друге стране, медијум садржи натријум-хлорид и дипоталијум-фосфат. Ова једињења осмотски стабилизују медијум и регулишу пХ респективно. Бромотхимол плава је пХ индикатор, који претвара боју медијума у ​​зелену у жуту са стварањем киселине.

Неки микроорганизми могу користити угљене хидрате путем оксидативних или ферментационих путева, док други не користе ниједан пут.

То зависи од карактеристика сваког микроорганизма. На пример, неки строги аеробни микроорганизми могу да оксидирају одређене угљене хидрате, а факултативни анаероби могу да оксидирају и ферментирају у зависности од окружења око себе, док други не оксидују или ферментирају угљене хидрате (асакаролитичке).

Коначно, постоји модификација ОФ медијума коју препоручује ЦДЦ која садржи специјалну базу ОФ са фенолом црвеним као индикатором.

Процес оксидације

Процес оксидације глукозе не захтева фосфорилацију глукозе, као ни процес ферментације. У овом случају алдехидна група се оксидује у карбоксилну групу, што резултира глуконском киселином. Ово заузврат оксидује до 2-кетоглуконичне.

Потоњи се или накупља или разграђује на два молекула пируичне киселине. Овај систем захтева присуство кисеоника или неког неорганског једињења као крајњег акцелера електрона.

Производња киселина овим путем је слабија од оне добијене ферментацијским путем.

Процес ферментације

Да би ферментација глукозе наступила било којим од расположивих путева, прво је мора фосфорилирати, постајући глукоза-6-фосфат.

Ферментација глукозе може трајати на више путева, главни је пут Ембден-Меиерхоф-Парнас, али они такође могу водити путем Ентнер-Доудорофф, или хексосе монофосфатом Варбург-Дицкенс-а, такође познатим као деградације пентоза.

Одабрани пут зависиће од ензимског система који микроорганизам поседује.

Виа Ембден-Меиерхоф- Парнас

Ферментацијом глукозе путем Ембден-Меиерхоф-Парнас, она се дели на два триозна молекула, да би се касније разградила на разна једињења угљеника, све док се не формира глицералдехид-3-фосфат. Одатле потиче интермедијарна супстанца, а то је пируична киселина.

Одатле ће се формирати различите врсте мешаних киселина које могу варирати од једне до друге врсте.

Овај систем настаје у недостатку кисеоника и захтева му органско једињење као крајњи акцептор електрона.

Пут Ентнер-Доудорофф

Ферментацијом глукозе путем Ентнер-Доудорофф-овог пута, глукозни 6-фосфат постаје глуконо-ᵼ-лактон-6-фосфат и одатле се оксидује у 6-фосфоглуконат и 2-кето-3-дезокси-6- фосфоглуконат, да би коначно формирао пируичну киселину. Овом путу је потребан кисеоник да би се догодила гликолиза.

Пут разградње пентоза или пут Варбург-Дицкенс-овог Хефокса монофосфата

Ова рута је хибрид горе 2. Почиње слично путу Ентнер-Доудорофф, али касније се глицералдехид-3-фосфат формира као прекурсор пируичне киселине, као што се догађа на путу Ембден-Меиерхоф-Парнас.

Припрема

Да одмери:

2 г пептона

5 г натријум хлорида

10 г Д-глукозе (или угљених хидрата који се припремају)

0,03 г бромотхимол блуе

3 гр агара

0,30 г дипоталијум-фосфата

1 литар дестиловане воде.

Помешајте сва једињења осим угљених хидрата и растворите у 1 литру дестиловане воде. Загрејати и мућкати док се потпуно не отопи.

Након хлађења на 50 ° Ц, дода се 100 мл 10% глукозе (филтрирано).

Асептично распоредите 5 мл ОФ медијума у ​​епрувете са памучним поклопцем и аутоклавите на 121 ° Ц, притиском од 15 килограма током 15 минута.

Оставите да се очврсне у вертикалном положају.

ПХ медијума треба да буде 7,1 Боја припремљеног медијума је зелена.

Чувати у фрижидеру.

Апликације

Медијум ОФ је посебан медијум за одређивање метаболичког понашања микроорганизма против угљених хидрата. Нарочито за оне који формирају мало, слабе или никакве киселине.

Засејано

За сваки микроорганизам су потребне две епрувете, а обе морају бити инокулиране микроорганизмом који се проучава. Колонија се узима правом дршком и врши се пробијање у средини цеви без постизања дна; Може се направити неколико пункција све док не постоји интерес за посматрање покретљивости.

Слоју стерилног течног вазелина или стерилно растопљеног парафина (отприлике 1 до 2 мл) додаје се у једну од епрувета и обележи слово "Ф". Друга цев је оригинална и означена са "О". Обе епрувете се инкубирају на 35 ° Ц и посматрају свакодневно у трајању до 3 до 4 дана.

Тумачење

Метаболизам и производња гаса

Табела: Класификација микроорганизама према њиховом понашању у отвореним (оксидативним) и затвореним (ферментативним) епруветама

Извор: Израдио аутор мр. Мариелса гил

Плин се примећује са стварањем мехурића или премештањем агара.

Треба имати на уму да организам који само оксидује глукозу, али је не ферментира, неће моћи ферментирати остале угљене хидрате, у сваком случају само ће је оксидирати. Стога ће у овој ситуацији запечаћена цев за испитивање других угљених хидрата бити изостављена.

Покретност

Уз то, покретност се може видети у медијуму ОФ.

Позитивна покретљивост : раст који није ограничен на подручје инокулације. Постоји раст према странама цеви.

Негативна покретљивост : раст само у почетном инокулату.

КА

Следећи сојеви се могу користити као контрола квалитета: Есцхерицхиа цоли, Псеудомонас аеругиноса и Моракелла сп. Очекивани резултати су:

1. цоли: Глукозни ферментор (обојене жуте и блиставе цеви).
2. аеругиноса: Оксидант глукозе (отворена жута цев и зелена или плава пломба).
3. Моракелла сп: није сахаролитички (зелена или плава отворена цев, зелена заптивена цев).

Ограничења

-Неки микроорганизми не могу расти у ОФ медијуму. У тим случајевима, тест се понавља, али се у медијум дода 2% серума или 0,1% екстракта квасца.

-Оксидационе реакције се често примећују само близу површине, а остатак медијума може остати зелен, на исти начин као што је позитиван.

Референце

1. Конеман Е, Аллен С, Јанда В, Сцхрецкенбергер П, Винн В. (2004). Микробиолошка дијагноза. 5. изд. Редакција Панамерицана СА Аргентина.
2. Форбес Б, Сахм Д, Веиссфелд А. (2009). Баилеи & Сцотт Микробиолошка дијагноза. 12 ед. Редакција Панамерицана СА Аргентина.
3. Мац Фаддин Ј. (2003). Биохемијска испитивања за идентификацију бактерија од клиничког значаја. 3. изд. Редакција Панамерицана. Буенос Ајрес. Аргентина.
4. Францисцо Сориа Мелгуизо Лабораториес. 2009. Глукоза средња. Доступно на: хттп://ф-сориа.ес
5. Цонда Пронадиса Лабораториес. ОФ глукозни медијум. Доступно на: цондалаб.цом
6. БД Лабораториес. 2007. ОФ Басал Медиум. Доступно на: бд.цом