МЕДИО МИО: ОСНОВА, ПРИПРЕМА И УПОТРЕБА - БИОЛОГИЈА - 2025

МИО медијум је биохемијски тест се користи да помогну у идентификацији врста бактерија припадају породици Ентеробацтериацеае. Прилично је храњива и састоји се од глукозе, екстракта квасца, пептона, триптеина, Л-орнитин хидрохлорида, бромокрезола љубичасте боје и агара.

Значење његових иницијала (МИО) описује сваки од параметара који могу да се примете у овом медијуму; покретљивост, индол и орнитин. Покретљивост је способност микроорганизма да се креће услед присуства флагела. Да би се ово својство приметило, конзистенција медијума мора бити получврста, тако да препарат садржи мање агарја.

Преглед интерпретације резултата у МИО медијуму. Извор: Припремио аутор мр. Мариелса гил

Производња индола показује присуство ензима триптофаназе који делује на аминокиселину триптофана, због чега је неопходно употријебити откривајући реагенс како би производња индола била видљива.

Најзад, орнитин одређује да ли је бактерија способна декарбоксилати аминокиселину, односно да ли садржи ензим оринитин декарбоксилаза.

Основе

Пептон, екстракт квасца и триптеин

Ови елементи доприносе нутритивној снази овог медијума. Служе као извор хранљивих састојака и есенцијалних аминокиселина за развој бактерија.

Поред тога, триптеин је извор триптофана који показује присуство ензима триптофаназе, који разграђује триптофан редуктивним деаминацијом, ослобађајући индол, пируичну киселину, амонијак и енергију.

Индоле је безбојан, па се његово присуство открива додавањем пет капи Ехрлицховог или Ковацсовог реагенса, обе са п-диметиламинобензалдехидом.

Алдехидна група овог једињења реагује са индолом, стварајући прстенаст производ фуксије црвене боје на површини агара.

Било који траг боје треба сматрати позитивним тестом. Доказ треба прочитати одмах, јер с временом боја пропада.

Надаље, овај тест треба открити након што су примијећени резултати покретљивости и декарбоксилације орнитина.

Тумачење

Позитиван тест: стварање фуксио црвеног прстена додавањем капи Ковацсовог реагенса.

Негативни тест: нема формирања прстена.

Покретност

Способност бактерија да се креће биће евидентна ако се примети замућен медијум или ако се око почетне инокулације прошири густа линија раста.

Негативни тест покретљивости ће се доказати посматрањем танке линије раста и све око њега ће бити без раста.

Важно је да се покретљивост очита пре откривања индола, јер додавање реагенса замућује цео медијум.

Код мобилних, али споро растућих бактерија, тешко је демонстрирати њихову покретљивост овим медијумом. У овом случају, препоручује се употреба других тестова или метода, као што су средња покретљивост или метода на чекању.

Глукоза

Глукоза је ферментабилни угљени хидрат који, поред тога што обезбеђује енергију, закисељује животну средину, неопходан услов да се догоди декарбоксилација аминокиселине орнитин.

Ферментација глукозе мора се увек одвијати полазећи од принципа да све бактерије које припадају породици Ентеробацтериацеае ферментирају глукозу.

Л-Орнитин

У случају да бактерије производе ензим орнитин декарбоксилаза, то може деловати након што је мед закисељен ферментацијом глукозе.

Ензим орнитин декарбоксилаза делује на карбоксилну групу аминокиселине стварајући амин зван путресин који поново алкализује медијум.

Овај тест треба прочитати након инкубације од 24 сата, јер ако покушате да прочитате пре него што погрешно протумачите тест, лажни негатив.

Треба имати на уму да је прва реакција ферментација глукозе, па средина постаје жута у почетној фази (првих 10 до 12 сати). Ако се након тога догоди декарбоксилација орнитина, медиј ће постати љубичаст.

Важно је протумачити тест декарбоксилације орнитина пре откривања индола, јер додавање Ковацсовог реагенса мења боју медијума.

Тумачење

Негативни тест: средњи са жутом бојом или са жутом позадином.

Позитиван тест: средње потпуно љубичаст.

ПХ индикатор

У овом случају се користи бромокресол љубичаста; онај који је задужен за откривање када дође до промене пХ у медијуму. Након закисељавања, индикатор постаје жут, а након алкализације постаје љубичасти.

Техника сејања и развијања

За сјетву МИО медија користи се равна петља или игла, а са њом се сакупља и дио колоније који се проучава.

У средини МИО-а прави се дубоки пробој, равно. Двоструко пробијање није препоручљиво, јер може дати лажну слику покретљивости ако се пробоји не изводе на истом месту.

Инкубирајте 24 до 48 сати на 37 ° Ц у аеробиози. Погледајте резултате овим редоследом: покретљивост, декарбоксилацију орнитина и коначно откријте индол.

Препоручљиво је асептично уклонити 2 мл медијума, пребацити га у стерилну епрувету и тамо извршити тест индола, тако да ако је негативан, остатак оригиналне епрувете може се инкубирати током наредна 24 сата, да би се индол поново открио.

Развој индола се изводи на следећи начин: 3 до 5 капи Ковацсовог реагенса се додају у МИО медијум и снажно мешају. Примећује се да ли се појављује прстен од црвене фуксије или не.

Припрема

МИО медиј

Извагати се 31 г МИО медијума и растворити у једној литри дестиловане воде.

Загревати док се смеша не кључа током једног минута, често мућкајући док се агар у потпуности не растопи. 4 мл медијума распоредите у 13/100 епрувете са памучним поклопцима.

Стерилизирајте у аутоклаву на 121 ° Ц током 15 минута. Скините из аутоклава и оставите да стоји равно у сталак на такав начин да се формира получврсти блок.

Чувати у фрижидеру 2-8 ° Ц. Оставите је да се загреје пре сетве бактеријског соја.

Боја дехидрираног медијума је беж, а боја припремљеног медијума благо опалесцентно љубичаста.

Крајњи пХ припремљеног медијума је 6,5 ± 0,2

Средство постаје жуто код киселог пХ и љубичасто је код алкалног пХ.

Ковацс реагенс (Индоле тест програмер)

Овај реагенс се припрема на следећи начин:

Измери се 150 мл амилног, изоамилног или бутил алкохола (било ког од три). У њему је растворено 10 г п-диметиламинобензалдехида. Након тога полако се додаје 50 мл концентроване хлороводоничне киселине.

Припремљени реагенс је безбојан или светло жут. Треба га чувати у амбре боци и чувати у фрижидеру. Тамно смеђа боја показује његово пропадање.

Такође Ковацсов реагенс може бити замењен Ехрлицховим реагенсом. Потоњи, што је осетљивији, преферира се да открива индол у бактеријама које га производе у малим количинама, као што су на пример неке не-ферментирајуће Грам негативне шипке и одређени анаероб.

Употреба

Овај медијум представља тест који допуњује батерију биохемијских тестова за идентификацију бактерија из породице Ентеробацтериацеае.

Подаци о декарбоксилацији орнитина служе за разликовање Схигелла соннеи који тестира позитивност од Схигелла боидии, Схигелла флекнери и С. дисентериеае који имају негативан тест.

Такође разликује род Клебсиелла који тестира негативност од рода Ентеробацтер, где се већина његових врста позитивно тестира.

Извор: Конеман Е, Аллен С, Јанда В, Сцхрецкенбергер П, Винн В. (2004). Микробиолошка дијагноза. 5. изд. Редакција Панамерицана СА Аргентина.

КА

Сваки пут када се припреми серија МИО медија, може се извршити контролни тест. За то се користе познати или сертификовани сојеви за посматрање понашања медија.

Сојеви који се могу користити су Есцхерицхиа цоли, Морганелла моргании, Клебсиелла пнеумониае, Ентеробацтер аерогенес и Протеус мирабилис.

Очекивани резултати су Е. цоли и М. моргании. Дан М: +, И: + и О: +.

Клебсиелла пнеумониае је негативна (М: -, И: -, О :-). Протеус мирабилис и Ентеробацтер аерогени дају М: + И: - и О: +.

Референце

1. Мац Фаддин Ј. (2003). Биохемијска испитивања за идентификацију бактерија од клиничког значаја. 3. изд. Редакција Панамерицана. Буенос Ајрес. Аргентина.
2. Форбес Б, Сахм Д, Веиссфелд А. (2009). Баилеи & Сцотт Микробиолошка дијагноза. 12 ед. Редакција Панамерицана СА Аргентина.
3. Конеман Е, Аллен С, Јанда В, Сцхрецкенбергер П, Винн В. (2004). Микробиолошка дијагноза. 5. изд. Редакција Панамерицана СА Аргентина.
4. Британниа Лабораториес. МИО Медио 2015. Доступно на: британиалаб.цом
5. БД Лабораториес. Медиум ББЛ Мобилити Индоле Орнитхине (МИО). 2007. Доступно на: бд.цом
6. Валтек Лабораториес. Средња МИО покретљивост, Индоле, Орнитин. 2010. Доступно на: андинамедица.цом