Росе Бенгал је лабораторијски тест заснован на реакцији антиген-антитело за дијагнозу бруцелозе. Техника омогућава откривање специфичних антитела против бактерије Бруцелла абортус у узорцима људског серума. Резултат се може извести квалитативно или полуквантитативно.
Квалитативни облик изражава да ли је пацијент позитиван или негативан на тест, односно да ли постоје антитела или не. У међувремену, полу-квантитативни извештај је приказан у ИУ / мл и указује на приближну количину присутних антитела. Треба напоменути да ће се антитела произвести само ако је пацијент био у контакту са микроорганизмом.
Росе Бенгал реакција у плочи са аглутинацијом. Извор: преузето из видеа хттпс://иоуту.бе/игАВК-ГииГИ
Због своје велике једноставности, високе осетљивости и специфичности, једна је од сероаглутинацијских техника која се у медицини највише користи као почетни тест за дијагнозу ове болести.
Неки истраживачи су упоредили ефикасност Росе Бенгал теста са другим техникама, као што је сероаглутинација (фебрилни антигени) и приметили да су, иако постоји добра корелација, видели изоловане случајеве у којима је тест фебрилног антигена био негативан и Росе де Позитивни бљесак.
Добијена разлика је настала због чињенице да су ови пацијенти имали поткласу ИгГ антитела против Бруцелла абортус са бољом способношћу везања на киселом пХ, па су могли да реагују са Росе Бенгал реагенсом, али не и са фебрилним антигенима.
У том смислу, они су предложили да се реагенси технике фебрилног антигена модификују до киселог пХ тако да могу да открију ову врсту случаја.
Основе
Росе Бенгал реагенс се састоји од антигенске суспензије. Састоји се од соја С99 Бруцелла абортус, разблаженог у киселом лактатном пуферу (пХ 3,6), плус фенола и Росе Бенгал боје.
Због тога, у узорку који се тражи су антитела против Бруцелла, ако су присутна, они ће реаговати са антигеном реагенса и биће примећена макроскопски видљива реакција аглутинације. Тест открива или ИгМ антитела или ИгГ антитела.
То значи да може открити болест и у свом акутном стадијуму где преовлађују ИгМ антитела или у хроничном стадијуму где преовлађују ИгГ антитела.
Ово представља предност јер повећава осетљивост теста, али је истовремено и недостатак јер не прави разлику између једне и друге фазе, пошто су реакције са ИгМ и ИгГ антителама идентичне.
Испитивање се увек мора вршити заједно са негативном и позитивном контролом. Негативна контрола садржи животињски серум без антитела, а позитивна контрола садржи серум животињског порекла са 50 ИУ / мл антитела против Бруцелла.
Употреба
Бруцелоза је озбиљна болест која има тенденцију да буде хронична и опасна, па је врло важно да се дијагностикује рано. То је зооноза и људи се могу заразити директним контактом са контаминираним материјалом, а најугроженије особе су ветеринари и неговатељи животиња.
До инфекције може доћи и једењем зараженог сировог меса, између осталих облика инфекције.
Ова болест напада локално или системски. Системски облик је најозбиљнији, јер могу бити погођени различити органи, укључујући ретикулумски ендотелни систем (јетра, слезина, коштана срж), кожа (целулитис и лимфаденопатија), респираторни систем (упала плућа), мишићно-коштани систем (артритис, сакроилиитис и спондилитис), између осталих.
Росе Бенгал тест је веома корисна техника за обављање почетног скрининга, јер је веома јефтин, једноставан за употребу и има велику специфичност и осетљивост.
Случајеви лажних негатива и лажних позитивних делова су веома ретки и могу се јавити код људи са врло ниским титром антитела (<25 ИУ / мл) или изузетно високим (> 1000 ИУ / мл).
Процес
материјали
-Росе Бенгал Кит
-Алутинација бела позадина плоче
-50 µл пипета
-Ротатор (опционо)
-Вортек
Техника (квалитативна метода)
Комерцијални комплети Росе Бенгал долазе са реагенсима који су спремни за употребу.
-Угасите реагенсе пре него што почнете са радом.
-Аглутинационе плочице имају нацртане кругове, сваки за другачији узорак. Користите 3 круга, први за негативну контролу, други за узорак и трећи за позитивну контролу.
- Ставите кап или 50 ул контролера и узорка у одговарајући круг.
-Помешајте Росе Бенгал реагенс користећи вртлог. Ставите кап поред претходно постављених.
-Мешати са дрвеним чачкалицама (користите један за сваки узорак или контролу). Направите кружне покрете и раширите их тако да покријете цео круг.
Извор: слике узете са Видео: хттпс://иоуту.бе/игАВК-ГииГИ. Измењен изглед слике.
- Поставите плочу на аутоматски ротатор на 80 до 100 окретаја у минути или ротирајте 4 минуте. Прочитајте доказ на крају овог времена.
-Увјерите да су контроле дале како се и очекивало. Упоредите реакцију испитног узорка са контролама. Извештавајте као позитивно ако се примети аглутинација и као негативно ако нема аглутинације.
Позитиван тест показује да пацијент има количину једнаку или већу од 25 ИУ / мл анти-Бруцелла антитела.
Тумачење позитивне (са аглутинацијом) и негативне (без аглутинације) реакције. Извор: Цитрулин. Измењена слика.
Техника (полуквантитативна)
Ако је у квалитативној реакцији узорак снажно позитиван, може га се полуквантификовати. За то су направљена серијска двострука разблажења узорка физиолошким физиолошким раствором. Претходно описани поступак се спроводи са сваким разблаживањем.
Он се такође тумачи посматрањем аглутинације макроскопски. Резултат ће бити титар највећег разблажења у којем је примећен позитиван резултат.
Да би се израчунала приближна вредност антитела против Бруцелла, користи се следећа формула:
25 ИУ / мл к титра реакције = ИУ / мл
На пример, ако пацијент током полуквантитативног теста позитиван на разређивање од ½, ¼ и 1/8 и почне да буде негативан од разређивања 1/16 па надаље, то значи да пацијент има титар од 8 .
Примјена формуле:
25 ИУ / мл к 8 = 200 ИУ / мл
КА
- Комплет има рок трајања и мора се поштовати. Не треба користити ако је реагенс истекао.
-У току употребе, водите рачуна да реагенс не садржи чврсте честице, јер је то знак пропадања.
-Државајте између 2 и 8 ° Ц.
-Не замрзавајте, овим чином се штетно реагује на реагенс.
-Увек спроводите тест заједно са негативним и позитивним контролама.
- Техника толерише узорке серума са одређеним степеном липемије и хемолизе, међутим не препоручује се употреба претерано липемичних и хемолизованих серума, оба стања мењају резултате теста.
-Увек додајте реагенсе на собну температуру пре него што започнете анализу.
-Не интерпретирајте реакције које трају дуже од препорученог времена, јер то ствара извештај о погрешном позитивном ефекту, јер се након одређеног времена реагенс исталожи, симулирајући позитивну реакцију.
-Техника је 100% осетљива и има специфичност од 98%.
-Након полуквантитације од 1000 ИУ / мл, постоји могућност посматрања ефекта прозона (лажно негативан због вишка антитела у поређењу са количином антигена).
Референце
- Рубио М, Баррио Б и Диаз Р. Вредност тестова Роса де Бенгал, Цоомбс и контра имуноелектрофорезе за дијагнозу случајева људске бруцелозе у којој је серумска аглутинација негативна. Одељење за микробиологију. Служба за клиничку микробиологију. Универзитетска клиника. Универзитет у Навари. 406-407. Доступно на: елсевиер.ес/ес-ревиста-енфермедадес-инфецциосас
- "Бруцелоза." Википедија, Слободна енциклопедија. 6 дец 2019, 14:37 УТЦ 18 децембар 2019, 18:09 ен.википедиа.орг.
- Монлаб Лабораториес. Монлаб Бенгал Росе - тест. 2016.Доступно на: монлаб.ес/
- Царрилло Ц, Готуззо Е. Бруцеллосис. Влч. Перу. Мед. Публиц Хеалтх 1997; 14 (1): 63-66. Доступно на: сциело.орг
- Моралес-Гарциа Р, Гарциа-Мендез Н, Регаладо-Јацобо Д, Лопез-Мерино А, Цонтрерас-Родригуез А. Клиничка, серолошка и полимеразна ланчана реакција праћења породице са бруцелозом. Рев. цхил. Инфецтол. 2014; 31 (4): 425-433. Доступно на: сциело.цоницит.