НЕУБАУЕРОВА КОМОРА: ИСТОРИЈА, КАРАКТЕРИСТИКЕ, НАМЕНЕ - БИОЛОГИЈА - 2025

Неубауер комора , хематометер или хемоцитометер, је лабораторија инструмент се састоји од посебног дебелом стаклене плоче. Ова камера користи се за бројање неких типова ћелија, као што су црвена крвна зрнца, бела крвна зрнца и тромбоцити, мада се може користити за бројање спора, сперме, паразита итд.

Представља неке врло осебујне карактеристике, јер се састоји од 3 зоне, централне за бројање и две потпорне зоне. Свака комора има две зоне бројања или пречке, једну на врху и једну на дну.

Неубауерова комора. Извор: СантиБадиа. Измењена слика.

Они имају више одељења у облику решетке. Подручја за бројање су средњи квадратићи који се налазе у 4 угла обе решетке, плус средишњи трг.

Састављање камере мора се обавити с великом пажњом, јер било који детаљ утиче на број ћелија. Могуће је много грешака, али ако се нека од њих догоди, камеру морате раставити, очистити и поново саставити. Главне грешке укључују следеће:

Препуњавање коморе или недовољно пуњење, оставља комору да се осуши, покушај уклањања вишка течности газом, нагињање коморе приликом транспорта, пуњење прљаве или мокре коморе, не мешање разблаживања или узорка, између осталог. Све ове грешке резултираће нестварном вредношћу.

Историја

Неубауерова комора је прецизан инструмент, а процес производње пролази строгу контролу квалитета. Створен је за прецизно бројање честица или формираних елемената по мм ³ , попут ћелија у разним течностима. Његова деликатна графика уклесана је дијамантском оловком.

Карактеристике Неубауерове коморе

Цела комора је величине нормалног тобогана, тако да се може поставити на микроскопски ниво.

Комора се састоји од три централне правоугаоне површине (а, б, ц). У зони „б“ налази се Р зона или зона бројања, која се такође назива ретикулум. Једна са сваке стране камере, одвојена зоном "д".

Графички дијаграм Неубауерове коморе. Извор: Практични водич за хематологију. Школа биоанализе Универзитета у Царабобо-у, Венецуела.

Свака решетка је полирано подручје које садржи угравирано подручје за бројање. Састоји се од квадрата са површином од 9 мм ² и интерно је подељен на 9 квадрата са површином од 1 мм ² . Четири угласта квадрата подељена су на 16 мањих квадрата ( површине 0,0625 мм ² ).

Ове решетке формиране су низом милиметарских линија које се пресијецају једна са другом, а чине савршено грабљене решетке ограничене на специфицирана мјерења. Ове линије су урезане дијамантским врхом.

Побољшан Неубауеров ретикулум. Извор: Практични водич за хематологију Школе биоанализе Универзитета у Карабобу у Венецуели.

Четири стране одговарају подручју за бројање. Управо се на тим странама или угловима броји већина ћелија (црвених крвних зрнаца и леукоцита), док се тромбоцити броје у централном делу.

Централна зона има више подела, састоји се од 1 мм ² квадрата подељеног у 25 квадрата са површином од 0,04 мм ² . Они су заузврат подељени у 16 ​​решетки са површином од 0,0025 мм ² .

Опис побољшаног Неубауеровог ретикулума. а) квадрат угла, б) централни квадрат, ц) средњи квадрат централног трга. Извор: Практични водич за хематологију Школе биоанализе Универзитета у Карабобу у Венецуели.

Зоне „а“ и „ц“ служе као подршка за постављање посебног покровног објекта који се назива хематометрички клизни поклопац или хематиметар.

Висина између фолије и површине за бројање је 0,1 мм. Мерења површинске површине лежишта, као и висина коморе и разблаживање узорка, потребни су за коначне прорачуне.

Апликације

Користи се за бројање ћелија. Посебно је од помоћи у хематолошком подручју јер омогућава бројање три крвне ћелије; тј. црвена крвна зрнца, бела крвна зрнца и тромбоцити.

Међутим, може се користити и у другим областима, на пример за бројање сперме, споре, бактерија или других важних предмета у зависности од врсте узорка.

Како се користи?

Припрема узорка

Да би се извршио број ћелија, обично се започиње од претходног разблаживања. Пример: да бисте бројали бела крвна зрнца, припремите разређивање од 1:20 туркиновом течношћу. Разблаживање се добро измеша пре пуњења пипете и постављања Неубауерове коморе.

Постоје случајеви када разређивање од 1:20 није довољно да се броји. На пример, код пацијената који пате од одређених врста хроничних леукемија. У тим случајевима треба направити већа разблажења попут 1: 100.

Ако је, са друге стране, број врло мали, као и код тешких леукопенија, може се направити мања разблажења за концентрирање узорка. Пример: можете да направите разређивање од 1:10.

Промене које су извршене утичу на прорачуне.

Уградња Неубауерове коморе

Неубауерова комора је састављена постављањем хематометријског тобогана у централни део. Оба морају бити врло чиста и сува. За постављање ламеле она се узима за ивице и лагано се спушта на камеру.

То се пуни постављањем врха Тхома аутоматске пипете или пипете под углом од 35 ° на ивицу зоне за утовар. Течност се лако одводи, а подручје утовара попуњава капиларно. То се ради са обе стране да би се учитале две пресеке.

Не треба преоптеретити мрежице, нити их треба одбити течно. Оптерећење мора бити тачно. Важно је да пуњење буде хомогено, односно да не би требало да постоје мјехурићи.

Када се комора састави, остави се да одмара 2 минута како би ћелије пале на дно, а визуелизација и бројање лакше.

Након одмора, поставља се на позорницу светлосног микроскопа ради посматрања. Прво се фокусира са 10Кс циљем, а ако је потребно онда прелази на 40Кс.

Да би се побољшала његова визуелизација, пролаз светлости из микроскопа је смањен. Да бисте то учинили, кондензатор се спушта, а дијафрагма је лагано затворена.

Бројање

За број белих крвних зрнаца или леукоцита мора се рачунати целокупна површина четири средња угласта квадрата и централни квадрат сваког ретикулума.

Пребројавање започиње с квадратом у горњем левом углу. Почињете од првог квадрата првог реда, то јест с лијева на десно док не дођете до супротног краја.

Тамо се спуштате и гледате назад с десна на лево док не дођете до другог краја, и тако даље, ћелије унутар сваке решетке броје се на цик-цак начин. Пребројава се 16 решетки сваког средњег квадрата.

Да бисте избегли бројање ћелија два пута, постоје правила о ћелијама које се налазе на граничним линијама сваке мреже. Ћелије у левој и горњој линији се броје, а ћелије у десној и доњој линији се игноришу.

Ручни бројач ћелија мора бити доступан тако да оператер притисне тастер уређаја онолико пута колико је посматраних ћелија. Употребом бројача, оператер може да рачуна без да мора подизати поглед са микроскопског поља. На крају бројања видећете укупан број пребројених ћелија.

Калкулације

За израчуне можете наставити на више начина. Једна зрна може се избројати или се обоје могу пребројати и обе су просечне. У ове двије ситуације, пребројане ћелије морају се помножити с фактором, што би у овом случају било 40. И на тај начин се добија укупан број по мм ³ .

Али ако се рачунају две решетке и не узима се просек, мора се помножити са различитим фактором, у овом случају са 20.

- Фактор множења

Ево како се израчунава фактор множења.

За прорачун се узимају у обзир различити подаци, укључујући титар разблажења, висину коморе и пребројану површину.

Разблажење

Стандардно разређивање које се користи је 1:20 за број леукоцита.

Висина коморе

Висина између коморе и листа крвних ћелија је 0,1 мм.

Бројена површина

Ако се рачуна 5 квадрата површине 1 мм ² , то значи да је укупна површина бројања 5 мм ² . Ови подаци морају се помножити са висином коморе да би се добила укупна бројена запремина. То јест, 5 мм ² к 0,1 мм = 0,5 мм ³ .

Формуле и прорачуни

Уз податке које имамо, каже се:

Ако је у 0,5 мм ^{3 -} броји се број ћелија

У 1 мм ³ --- ће бити - Кс н ° ћелија

Кс број ћелија = (број ћелија броји к 1) / 0,5 мм ³

Али разблаживање се такође мора узети у обзир. Стога је формула следећа:

(број ћелија пребројених к 1) к 20 / 0,5 мм ³

На крају, укратко, број пребројаних ћелија може се помножити са 40. Тако се добија вредност леукоцита по мм ³ .

Ако се рачунају две мрежице, подаци за пребројану површину се мењају, што би у овом случају било 10 квадрата, односно 10 мм ² . И укупна пребројена запремина од 1 мм3. Формула би била:

(број ћелија пребројен к 1) к 20/1 мм ³

Стога би у овом случају фактор множења био 20.

Грешке

-Ако се приликом утовара фотоапарата прекорачи или премаши течност, висина камере ће се разликовати. То резултира тиме да је бројност већа од стварне. Ако покушате уклонити вишак газом или памуком, то је велика грешка. Ова акција ће узроковати да се ћелије концентришу, повећавајући број.

-Ако се лоше учита, број ће бити мањи од стварног.

-Ако је камера монтирана и остављена да се осуши, више је није могуће бројати, јер ће дати погрешне резултате.

-Ако се разблаживање узорка не помеша добро пре пуњења коморе, постоји ризик од грешке у очитавању, јер ћелије неће бити хомогено расподељене. Због тога ће доћи до ниже или веће концентрације ћелија, зависно од тога да ли се узорак узима са површине течности или са дна епрувете.

- Присутност мехурића смањује количину течности која мора да уђе у ретикулум, ометајући правилну визуелизацију и дистрибуцију ћелија. Све то значајно утиче на резултате.

- Током бројања, не подижите поглед са микроскопа све док сваки велики квадрат није завршен да се не би изгубили.

-Једини разлог за грешку је нагињање фотоапарата након монтирања. Из тог разлога се позорност микроскопа мора пажљиво подићи.

Препорука

Ако из било ког разлога откријете неправилности у пуњењу коморе, препоручује се да тај препарат раставите, очистите комору и поново саставите од нуле.

Будите изузетно пажљиви при чишћењу фотоапарата да не би огребали попречне длачице. С друге стране, имајте на уму да је хематометрички тобоган осјетљив и ломљив. Неправилно руковање може да га поквари.

Пре него што започнете са бројем, проверите да ли су ћелије добро распоређене. Неравномерна расподела ћелија настаје услед лошег мешања или разблаживања узорака. Ако се то догоди, монтажа се мора поновити.

Један од начина да се сазна да ли је ћелија добро распоређена јесте упоређивањем броја сваког великог квадрата, број ћелија пребројених за сваки квадрат не сме се претјерано разликовати од једне до друге.

-Ако је број белих крвних зрнаца изнад 50.000 мм ^3, пожељно је поновити бројање, што је веће разблаживање.

-Ако промените разблажење, морате поново израчунати фактор множења, јер то утиче на формулу.

Референце

1. Цардона-Маиа В, Бердуго Ј, Цадавид А. Поређење концентрације сперме помоћу Маклерове коморе и Неубауерове коморе. Ацтас Урол Есп 2008; 32 (4): 443-445. Доступно на: сциело.
2. Неубауерова комора. (2018., 27. марта). Википедија, Слободна енциклопедија. Датум консултација: 04:10, 23. јуна 2019. са ес.википедиа.орг
3. Менесес А, Ројас Л, Сифонтес С. Примена алтернативног метода бројања у Неубауеровој комори за одређивање концентрације Трицхомонас вагиналис. Влч. Цуб Мед Троп 2001; 53 (3): 180-8. Доступно на: ресеарцхгате.нет
4. Гомез-Перез Роалд Е. Анализа спермограма. Вл. Венеција. Ендокринол. Метаб. 2007; 5 (2): 19-20. Доступно на: ве.сциело
5. Практични водич за хематологију Школе за биоанализу Универзитета у Карабобу. Венецуела, 1998