ЕЦ ЈУХА: ОСНОВА, ПРИПРЕМА И УПОТРЕБА - БИОЛОГИЈА - 2025

ЕК чорба или чорба Есцхерицхиа цоли је селективни течни медијум културе. Стандардни методи овај медијум препоручују за бројање укупних и фекалних колиформи, највероватнијом бројевном техником (МПН) у узорцима воде и хране, где је главни узрочник Есцхерицхиа цоли.

ЕЦ брод се састоји од триптеина, лактозе, жучних соли, дикалијум-фосфата, моно-калијум-фосфата, натријум-хлорида и воде. Његова формула је стратешки дизајнирана да фаворизује раст укупних и фекалних колиформи и спречава развој других пратећих микроорганизама.

Фигуративни приказ припреме ЕЦ бујона. Извор: Пикабаи.цом

Бактерија Есцхерицхиа цоли је главни фекални колиформ присутан као загађивач у изворима воде и хране, узрокујући важне гастроинтестиналне поремећаје.

Треба напоменути да постоји много серотипова Есцхерцхиа цоли; Међу њима можемо поменути ентерохеморагичне (ЕХЕЦ), ентероинвазивне (ЕИЕЦ), ентеопатогене (ЕПЕЦ), ентеротоксигене (ЕТЕЦ) и ентероагрегације (ЕАЕЦ).

Овај медиј има могућност да дозволи развој свих њих, али без могућности да их разликују један од другог. Ово захтева додатно тестирање.

Микробиолошка студија воде и хране по највероватнијем броју (МПН) ради претраге укупних и фекалних колиформи је протокол који се састоји од неколико фаза; претпостављена фаза, потврдна фаза и фаза завршетка. ЕЦ јуха се користи у потврдној фази.

Основе

ЕЦ брод

ЕЦ медиј заснован је на обезбеђивању нутритивних елемената неопходних за оптималан развој укупних и фекалних колиформи, где су укључене бактерије Есцхерицхиа цоли.

Ове хранљиве елементе обезбеђује триптеин, који су одличан извор пептида и аминокиселина. Уз то, садржи и лактозу, ферментабилни угљени хидрат који даје енергију и омогућава да се покаже да ли бактерије производе гас.

С друге стране, медијум садржи жучне соли које дају селективни карактер, јер инхибира раст грам-позитивних микроорганизама који могу бити присутни у узорку.

Исто тако, калијум-фосфат и моно-калијум-фосфат дјелују као систем за уравнотежење пХ. Овај систем је неопходан, јер лактоза која се налази у бујону тежи да закисели медијум када га ферментирају микроорганизми, али то се надокнађује фосфатним солима.

Стога су ови елементи од суштинског значаја, јер неконтролисана киселост може утицати на правилан развој тражених микроорганизама.

Са своје стране, натријум-хлорид осмотски стабилизује медијум, док је вода растварач за присутне растворе и пружа течну конзистенцију медијуму.

Новоиоцин модификовани ЕЦ брод

Окренд и Росе створили су разне ЕЦ бујоне, назване новобиоцински модификовани ЕЦ бујов. Модификација се састојала од смањења концентрације жучних соли и додавања 20 мг / дл новобиоцина.

Ова модификација погодује опоравку ентерохеморагичних сојева Есцхерицхиа цоли (О157: Х7).

Овај бактеријски серотип узрокује јак хеморагични колитис који може довести до хемолитичког уремичког синдрома (ХУС); што заузврат може да створи акутни затајење бубрега, са високом стопом смртности која код старијих може достићи и до 50%.

Због годишњег оболевања и смртности ове бактерије изазване конзумирањем контаминиране хране, Министарство пољопривреде Сједињених Држава (УСАА) топло препоручује употребу овог медијума.

Припрема

ЕЦ брод

Измери се 37,4 г дехидрираног медијума и раствара се у 1 литру дестиловане воде. Смешу треба оставити да стоји 5 минута. Затим се у извору топлоте завршава растварањем честим мешањем.

Једном када се раствори, дистрибуира се у претходно припремљене епрувете са Дурхамовом епруветом. Стерилизирајте у аутоклаву на 121 ° Ц током 15 минута.

ПХ медијума треба да буде 6,9 ± 0,2. Боја дехидрираног медијума је беж, а припремљени медијум је светло амберна.

Буле се чувају у фрижидеру до употребе. У вријеме употребе, бродери морају бити на собној температури.

С друге стране, ЕЦ бујон се такође може припремити у двострукој концентрацији.

Новоиоцин модификовани ЕЦ брод

Извагати 36,7 г дехидрираног медијума и растворити у 1 литру воде. Остатак препарата је исти као што је горе описано.

Употреба

Тотална и фекална колиформна анализа

ЕЦ јуха је идеална за потврдну фазу проучавања колиформи НМП методом, како у узорцима воде, тако и у фармацеутским производима и храни.

Мутне, бујне лактозне бујоне добијене у претпостављеној фази треба поново засијати у 2% јарко зелене јухе и ЕЦ бујон.

За укупне колиформе, ЕЦ бујони се инкубирају аеробно током 24 до 48 сати на 37 ° Ц, а за фекалне колиформе се аеробно инкубирају 24 до 48 сати на 44 ° Ц.

У оба случаја то се тумачи на следећи начин: мутне цеви са производњом гаса сматрају се позитивним. Ако не дође до производње гаса за 24 сата, инкубација се наставља до 48 сати.

ЕЦ позитивни бројеви прелазе у потпуну фазу потврђивања, која се састоји од поновног поновног узимања селективних медија као што су Мац Цонкеи агар, ЕМБ агар или Ендо агар.

Ако је припремљени бујот ЕЦ са модификованим новобиоцином, препоручује се поновна сетва позитивних епрувета на агон Мац Цонкеи сорбитолом.

КА

Свака шаржа припремљеног медијума мора бити контролисана квалитетом. Прво, мора се проценити стерилност медијума. У том смислу, један или два подлога се инкубирају без инокулације у аеробиози током 24 сата на 37 ° Ц. Очекивани резултат је прозиран мелем, без замућења или промене боје.

Друго, мора се проценити раст познатих сојева, за то се могу користити следеће бактерије: Есцхерицхиа цоли, АТЦЦ 8739, Есцхерицхиа цоли АТЦЦ 25922, Салмонелла типхимуриум АТЦЦ 14028.

У свим случајевима се очекује задовољавајући развој микроба, посматрајући облачан бујот са производњом гаса за Е. цоли и без гаса за салмонелу.

Остали сојеви који могу бити укључени у контролу су: Стапхилоцоццус ауреус АТЦЦ 25923, Ентероцоццус фаецалис АТЦЦ 29212. Ови сојеви морају бити тотално инхибирани.

препоруке

-Представљање Дурхамових цеви је неопходно за проучавање колиформних облика.

-Поделите медијум у епрувете пре стерилизације, никако после.

-Не употребљавајте ако је медијум старији од 3 месеца.

-Не употребљавати ако се примети било каква промена у уобичајеним карактеристикама медијума.

Референце

1. Британниа Лабораториес. ЕЦ Медиум. 2015. Доступно на: британиалаб.цом
2. Ентерохеморагични Е. цоли. Центар за сигурност хране и јавно здравље. 2010. Доступно на: цфспх.иастате.еду
3. Неоген Цорпоратион. ЕЦ медиум. Доступно на: фоодсафети.неоген.цом
4. Неоген. Новобиоцин модификовани ЕЦ медиј. Доступно на: фоодсафети.неоген.цом
5. Јуре М, Цондори С, Леотта Г, Цхинен И, Миливебски Е, Аллори Ц, Аулет О, де Цастилло М. Детекција, изолација и карактеризација Есцхерицхиа цоли која производи Схига токсин из свежег млевеног меса месара у Цонцепцион, провинција из Туцумана. Мицробиол Рев Арг; 2010, 42 (4): 284-287. Доступно на: ввв.сциело.орг.