ТИОГЛИКОЛАТ ЈУХА: РАЦИОНАЛНОСТ, ПРИПРЕМА И УПОТРЕБА - БИОЛОГИЈА - 2025

Тиогликолата чорба је флуидна конзистенција средње обогаћени. Познат је по акрониму ФТМ по акрониму на енглеском медијуму за течни тиогликолат. Направио га је Бревер и модификовао 1944. године Вера, која му је додала и казеин пептон.

Овај медијум има низак потенцијал редукције оксидације, стога се не препоручује за развој строгих аеробних бактерија, али је идеалан за опоравак факултативних аеробних, строгих анаеробних и незахтевних микроаерофичних бактерија.

Тиогликолат јуха без индикатора. Показује вагинални исцједак. Извор: Бобјгалиндо

Високе перформансе које су примећене са овим медијумом у изолацији и опоравку широког спектра микроорганизама, учиниле су га прихваћеним од стране Фармакопеје Сједињених Држава (УСП), Званичног удружења пољопривредних хемичара (АОАЦ) и Европске фармакопеје ( ЕП).

Ове организације га препоручују за тестирање фармацеутских производа за контролу стерилности и за обогаћивање различитих врста узорака.

Цадо тиогликолат се састоји од екстракта квасца, пробавног процеса панкреаса казеина, безводне декстрозе, Л-цистина, натријум-хлорида, натријум-тиогликолата, ресазурина и агарја у малој количини.

Постоји неколико верзија овог медијума, а међу њима су: тиогликолатни јуха са индикатором, јуха од тиогликолата без индикатора, јуха од тиогликолата са индикатором обогаћена хемином и витамином К _1, те јуха од тиогликолата са калцијум карбонатом.

Изразито, варијанта бујона тиогликолат обогаћена хемином и витамином К служи за поспјешивање раста брзих анаероба, а варијанта бујона тиогликолат која садржи калцијум карбонат је корисна за сузбијање киселина насталих током микробног раста.

Основе

Тиогликолатни јуха сматра се неселективним средством за обогаћивање јер омогућава раст већине нестименталних бактерија. Прехрамбене потребе обезбеђују екстракт квасца, варење панкреаса и глукоза.

С друге стране, овај медијум, упркос томе што је бујона, садржи малу количину агара; То значи да има низак потенцијал редукције оксидације, због чињенице да успорава улазак кисеоника, на начин да се кисеоник смањује како улази дубље у цев.

Због тога је овај медијум идеалан за развој факултативних аеробних, микроаерофилних и строгих анаеробних бактерија, последње 2 без потребе да се инкубирају под овим условима. Исти медијум регулише количину кисеоника у медијуму, одсутна на дну цеви и у довољној количини на површини.

Исто тако, тиогликолат и Л-цистин дјелују као редуктивни агенси, помажући у спречавању накупљања супстанци штетних за развој бактерија, попут пероксида. Поред тога, ова једињења садрже сулфхидрилне групе (-СХ-), које неутралишу инхибиторне ефекте деривата живе, арсеника, међу осталим тешким металима.

Са своје стране, ресазурин је показатељ редукције оксида. Ова супстанца је безбојна кад се редукује и ружичаста је када се оксидује. Постоје варијанте тиогликолатног бујона са индикаторима и без индикатора. Његова употреба зависиће од врсте узорка и склоности лабораторија.

У међувремену, натријум-хлорид одржава осмотску равнотежу бујона тиогликолата, а употреба глукозе у безводном облику спречава вишак влаге у дехидрираном медијуму.

Припрема

Тиогликолат јуха са индикатором

Извагати се 29,75 г дехидрираног медијума и растворити у 1 литру дестиловане воде. Смеша се остави око 5 минута. Доведите до извора топлоте и често мешајте док се потпуно не растопи.

Сипајте медијум у епрувете и аутоклавите на 121 ° Ц током 15 минута. Пре употребе оставите да се охлади. Проверите уложак комерцијалне куће да ли је сачуван. Неки препоручују чување на собној температури у тамном, а други у фрижидеру заштићеном од светлости.

ПХ припремљеног медијума је 7,1 ± 0,2.

Боја дехидрираног медијума је светло беж, а припремљени медијум је светло амбер са неком опалесценцијом.

Тиогликолат јуха са показатељем обогаћена хемином и витамином К

Постоје комерцијални медији који већ садрже хемин и витамин К ₁ , посебно за гајење анаероба.

Ако немате обогаћену медијуму за анаеробе, можете припремити основни јух од тиогликолата. За то _{се дода} 10 мг хемин хидрохлорида и 1 мг витамина К ₁ за сваки литар медијума. Међутим, ако се у јуху од тиогликолата дода крв или серум, додавање хемина или витамина К није неопходно.

Тиогликолат јуха са калцијум карбонатом

Долази у продаји и припрема се на основу упутстава на улошку.

Тиогликолат јуха без индикатора

Овај има исти састав основног тиогликолата, али не садржи ресазурин.

Одмрзните 30 г дехидрираног медијума и растворите у литру дестиловане воде. Остатак препарата је исти као онај описан у јухи од тиогликолата са индикатором.

Употреба

Тиогликолат јуха је корисна за обогаћивање клиничких узорака, посебно оних са стерилних локација. Такође је корисна за неклиничке узорке, попут козметике, лекова итд.

За инокулацију течних узорака (попут ЦСФ-а, синовијалне течности, између осталог), узорци се прво центрифугирају, а затим се узму 2 капи седимента и ставе у бујонс тиогликолат. Инкубирајте 24 сата на 35 ° Ц. Ако у овом времену нема раста (замућења), он се инкубира до највише 7 дана.

Ако се узорак узме брисом, медијум за културу прво се инокулира у плоче, а на крају се брис убаци у бујон, избочени део се подели, а епрувета се затвори, а тампон остави унутра. Инкубирајте на 35 ° Ц током 24 сата, максимално 7 дана.

За чврсте узорке, хомогенизујте у физиолошком физиолошком раствору (ССФ), а затим инокулирајте бујоном тиогликолат две капи суспензије.

Понекад се може користити као транспортни медиј за узорке за које се сумња да су строги анаероби или као резервни бујон за обогаћивање.

Варијанта тиогликолатног бујона са калцијум карбонатом користи се за дуже одржавање контролних сојева, јер има способност неутрализације киселина насталих употребом глукозе; Ове киселине су токсичне за одређене бактерије.

Раст у бујону тиогликолата посматраће се замућеношћу медијума. Препоручује се извођење мрља по Граму и после тога субкултура у неселективним и селективним подлогама, зависно од врсте узорка и сумњивих микроорганизама.

КА

За контролу стерилности препоручује се инкубација једног или два бујона без инокулације. Очекивани резултат је бистра маса, без промене боје, мада је нормално да се на површини епрувете види благо ружичаста боја.

За контролу квалитета потребно је инокулирати између 10 и 100 ЦФУ сертификованих контролних сојева, попут Стапхилоцоццус ауреус АТЦЦ 6538, Мицроцоццус лутеус АТЦЦ 9341, Бациллус субтилис АТЦЦ 6633, Псеудомонас аеругиноса АТЦЦ 9027, Цлостридиум спорогенес АТЦЦ 19404, Цлостридиум 11437 споро Бацтероидес вулгатус АТЦЦ 8482.

Инкубирајте на 30-35 ° Ц у аеробиози током 24 сата до највише 3 дана, јер ови микроорганизми брзо расту.

Очекује се добар развој у свим случајевима, осим Мицроцоццус лутеус и Бациллус субтилис, где може бити умереног развоја.

За контролу квалитета јухе од тиогликолата обогаћене хемином и витамином К ₁ могу се користити контролни сојеви Бацтероидес вулгатус АТЦЦ 8482, Цлостридиум перфрингенс АТЦЦ 13124 и Бацтероидес фрагилис АТЦЦ 25285. Очекивани резултат је задовољавајући раст.

препоруке

- Повремено се може приметити да површина тиогликолатног бујона са индикатором постаје ружичаста; То је последица оксидације медијума. Ако ружичаста боја покрива 30% или више укупне каше, може се загревати у воденој купељи 5 минута, поново охладити и употребити.

Ово ће уклонити апсорбовани кисеоник, вративши медијуму своју првобитну боју. Овај поступак се може обавити само једном.

-За побољшање раста аеробних бактерија инкубирајте поклопац мало лабавим. Међутим, пожељно је користити у ту сврху бујон за инфузију срца или сојин бујон триптицазе за правилан развој строгих аеробаба.

-Смрзавање медијума или прегревање треба избегавати, јер оба услова оштећују медијум.

-Директна светлост оштећује медијум за културу, мора се чувати заштићен од светлости.

Референце

1. Британниа Лабораториес. Тиогликолат УСП са индикатором. 2015. Доступно на: лабБританиа.цом.
2. Цхиос Сас Лабораториес. 2019. Бујон тиогликолат. Доступно на: куиос.цом.цо
3. Лабораторија БД течни тиогликолат медијум (ФТМ). 2003. Доступно на: бд.цом/Еуропе
4. ББЛ медијуми припремљени у епруветама за узгој анаеробних микроорганизама. Тиогликолатни медијуми. 2013. Доступно на: бд.цом
5. Форбес Б, Сахм Д, Веиссфелд А. (2009). Баилеи & Сцотт Микробиолошка дијагноза. 12 ед. Редакција Панамерицана СА Аргентина.