ЈУХА ОД УРЕЕ: ТЕМЕЉ, ПРИПРЕМА И УПОТРЕБА - БИОЛОГИЈА - 2025

Уреа чорба је течно култивирани медиј, користити за детекцију присуства уреазе ензима у одређеним микроорганизмима. Уреаза је микробни ензим који се производи на конститутиван начин, односно синтетише се без обзира на то да ли је супстрат на који делује постоји или не.

Функција уреазе повезана је са разградњом органских једињења. Нису сви микроорганизми способни да синтетишу овај ензим, зато његово одређивање у лабораторији омогућава идентификовање одређених сојева бактерија, па чак и разликовање врста истог рода.

Негативни и позитивни тест урее. Извор: Фотографију направио аутор МСц. Мариелса Гил.

Постоје две врсте теста урее: Стуарт и Цхристенсен. Разликују се по саставу и осетљивости. Први је посебан за приказ велике количине уреазе произведене од врста рода Протеус.

Други је осетљивији и може открити мале количине уреазе која касно настаје од стране других бактеријских родова, као што су Клебсиелла, Ентеробацтер, Стапхилоцоццус, Бруцелла, Бордетелла, Бациллус, Мицроцоццус, Хелицобацтер и Мицобацтериум.

Стуарт-ов Уреа бујот се састоји од урее, натријум-хлорида, калијум-фосфата, моно-калијум-фосфата, екстракта квасца, црвеног фенола и дестилиране воде.

У међувремену, Цхристенсен-ов уреа или агар се састоје од пептона, натријум-хлорида, моно-калијум-фосфата, глукозе, урее, фенол црвене боје, дестиловане воде и агар-агара. Потоњи само ако је чврсти медиј.

Основе

Ензим уреаза хидролизује сечнину да формира угљендиоксид, воду и два молекула амонијака. Ова једињења реагују и формирају крајњи продукт назван амонијум карбонат.

Стуарт'с Уреа брод

Стуарт-ов бујон урее је пуферирани са пХ од 6,8. Због тога микроорганизам мора бити у стању да формира велике количине амонијака да би фенол постао црвен. ПХ треба да порасте изнад 8.

Према томе, Стуарт-ов бујон урее је селективан за врсте Протеус, који даје позитивне резултате у року од 24 до 48 сати од инкубације, и није ефикасан за бактерије које стварају мале количине уреазе или које уреају споро хидролизирају.

То је зато што су врсте Протеус способне да користе сечнину као извор азота. Уместо тога, другим бактеријама које производе уреазу потребан је додатни извор.

Међутим, Перез ет ал. (2002) утврдили су да је Стуарт-ов мокраћни уреа подједнако ефикасан као Цхристенсен-ов уреа за одређивање уреазе у сојевима квасца рода Цандида, Цриптоцоццус, Рходоторула, Трицхоспорон и Саццхаромицес.

Аутори студије тврде да су постигли 100% -тни договор са оба медија (Стуарт и Цхристенсен) приликом инкубације током 24 и 48 сати; уз изузетак што су сојеви који су успели да медије окрену јакој ружичасто-фуксионој боји, узети као позитивни.

Ово појашњење је неопходно с обзиром да је Лоддер (1970) изјавио да скоро сви квасци успевају да претвори Цхристенсен-ов агар са убодом у бледо ружичасту. То је због чињенице да они могу да хидролизују уреа у минималним количинама, и стварања амина оксидативном декарбоксилацијом аминокиселина на површини. Ово се не би требало тумачити као позитивно.

Цхристенсенов Уреа Агар или брод

Цхристенсен-ов бујон или агар са уреа је мање пуфериран и може открити мале количине амонијака. Даље, овај медијум је обогаћен пептоновима и глукозом. Ова једињења узрокују раст других микроорганизама који стварају уреазу који не расту у бутеру Стуарт.

Исто тако, Цхристенсен тест урее нуди брже резултате, посебно за Протеус, јер може да даје снажно позитивне резултате у само 30 минута као минимално време и до 6 сати као максимално време.

Остали микроорганизми који производе уреазу успевају да мало заврте боју медијума након 6 сати, а снажно након 24, 48, 72 сата или више, па чак и неки сојеви могу да дају слабе реакције после 5 или 6 дана.

Тумачење оба медија (Стуарт и Цхристенсен)

Средство је првобитно жуто-наранџасте боје и позитивна реакција ће боју медијума претворити у ружичасто-фуксију. Интензитет боје је директно пропорционалан количини произведеног амонијака.

Негативна реакција ће оставити медијум првобитне боје, осим квасца, који могу постати бледо роза на Цхристенсен-овом агар медијуму.

Припрема

Стуарт'с Уреа брод

Тежите потребне граме према назнакама комерцијалне компаније. Отопити у погодно стерилној дестилованој води. Не користите топлоту за отапање, јер је уреа осетљива на топлоту.

Мембранска филтрација користи се за стерилизацију. За то се користи Миллипоре филтер са порама пречника 0,45 µ. Не користите аутоклав. Једном када се раствор филтрира, он се дистрибуира у стерилне епрувете. Да би се добили поуздани резултати, треба га пренети између 1,5 мл у минималној количини и 3 мл као максималне количине по епрувети.

Чувајте у фрижидеру и загрејте пре употребе.

Ако метода филтрације није доступна, медијум треба одмах користити да би се добили поуздани резултати.

Други начин припреме Стуарт-овог чорбе је следећи:

Неке комерцијалне куће продају основни медиј за тест урее, не укључујући уреу.

Количина која је наведена у комерцијалном предузећу се измери. Растворен је у дестилованој води и стерилизован у аутоклаву на 121 ° Ц током 15 минута. Остављено је да се мало одмори, а када је медијум загрејан, додајте 100 мл раствора урее припремљеног на 20% и стерилизирајте филтрирањем.

Дистрибуира се у стерилним епруветама, као што је претходно описано.

Цхристенсенов Уреа Агар или брод

-Препрема раствора урее

Извагати се 29 г дехидриране урее и растворити у 100 мл дестиловане воде. Користите методу филтрације за стерилизацију. Не аутоклавирајте.

-Угар базни агар

Отопите 24 г дехидрираног базног агара у 950 мл дестиловане воде. Стерилизирајте у аутоклаву на 121 ° Ц током 15 минута. Оставите да почива док не постигне температуру од 50 ° Ц и додајте претходно припремљену уреу асептично.

Сипати 4-5 мл у стерилне епрувете и нагнути се док не постане чврст. Требао би бити дугачак кљун флауте.

Овај медијум се такође може припремити у течном облику.

Апликације

Уреа тест је изузетно ефикасан у разликовању рода Протеус од осталих родова из породице Ентеробацтериацеае, с обзиром на брзу реакцију коју пружа Протеус.

Користећи Цхристенсен састав, тест помаже у разликовању врста истог рода. На пример, С. хаемолитицус и С. варнери су негативни на коагулазе и бета-хемолитички стафилокок, али се разликују по томе што је С. хеемолитицус уреа негативан, а С. варнери позитиван уреа.

С друге стране, МцНулти успешно је користио Цхристенсен-ов 2% -тни уреа за проучавање присуства Хелицобацтер пилори у узорцима биопсије узетим из желучане мукозе (антрал регија).

Присуство Х. пилори доказује позитивним тестом урее. Време трајања посматрања резултата директно је пропорционално количини микроорганизама који су присутни.

Као што се може видети, то је једноставна метода за дијагнозу Хелицобацтер пилори у биопсији желуца.

И на крају, овај тест је такође користан за разликовање врста од родова Бруцелла, Бордетелла, Бациллус, Мицроцоццус и Мицобацтериа.

Сјетва теста урее

Обе методе захтевају снажан микробни инокулум за оптимизацију резултата. Колоније бактерија преферирано се узимају из крвног агара, а квасци из агуса Сабоурауд, са неколико изузетака. Инокуулум се емулгује у течном медијуму.

За Стуарт-ов бујон, уреу инкубирајте на 37 ° Ц током 24 до 48 сати, знајући да тражите Протеусове сојеве само када је сој бактерија. За квасце се може инкубирати на 37 ° Ц или на собној температури током 24 до 48 сати инкубације.

У случају Цхристенсеновог бујона урее инкубира се на 37 ° Ц током 24 сата. Ако је тест негативан, може се инкубирати до 6 дана. Ако је тест позитиван пре 6 сати, то показује да је то род рода Протеус.

У случају Цхристенсеновог агара са уреом, зрна агарја снажно се инокулира, без пробијања. Јуха се инкубира и тумачи на исти начин.

КА

Контролни сојеви као што су Протеус мирабилис АТЦЦ 43071, Клебсиелла пнеумониае АТЦЦ 7006003, Есцхерицхиа цоли АТЦЦ 25922 и Салмонелла типхимуриум могу се користити за тестирање медијума. Прва два би требало да дају позитивне резултате, а последња два негативна резултата.

Извор: Конеман Е, Аллен С, Јанда В, Сцхрецкенбергер П, Винн В. (2004). Микробиолошка дијагноза. 5. изд. Редакција Панамерицана СА Аргентина.

Референце

1. Перез Ц, Гоитиа К., Мата С, Хартунг Ц, Цолелла М, Реиес Х. ет ал. Употреба Стуарт-овог чорбиног уреа за тест уреазе, као тест у дијагнози квасца. Влч. Мицробиол. 2002; 22 (2): 136-140. Доступно на: Сциело.орг.
2. Мац Фаддин Ј. (2003). Биохемијска испитивања за идентификацију бактерија од клиничког значаја. 3. изд. Редакција Панамерицана. Буенос Ајрес. Аргентина.
3. Форбес Б, Сахм Д, Веиссфелд А. (2009). Баилеи & Сцотт Микробиолошка дијагноза. 12 ед. Редакција Панамерицана СА Аргентина.
4. Конеман Е, Аллен С, Јанда В, Сцхрецкенбергер П, Винн В. (2004). Микробиолошка дијагноза. 5. изд. Редакција Панамерицана СА Аргентина.
5. Британниа Лабораториес. Цхристенсен Медиум (агар база урее) 2015. Доступно на: британиалаб.цом